几种促进因子对中性蛋白酶活力影响比较

分别探讨了2种天然有机物(F、K)和3种金属离子(Ca2 、Mn2 、M2 )对1398中性蛋白酶活力的影响.采用福林法测定了酶的最适反应条件,分别确定了天然有机物和金属离子的最适工作浓度,较系统地考察了它们对酶活的影响,并就对蛋白酶活力的促进作用进行比较,结果表明天然有机物均优于金属离子.     

嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.产胞外蛋白酶特性及其酶学性质

对嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.生长过程中的产酶特性做了初步研究,并研究了其胞外蛋白酶的理化特性。试验结果表明:嗜盐古生菌Halobacteriaceae sp.生长周期较长,从对数期开始分泌大量胞外蛋白酶;胞外蛋白酶的最适酶解反应温度是60℃;该蛋白酶具有较好的热稳定性,70℃条件下放置60 min,酶活力基本保持不变;最适反应p H为7.5,在p H 6.5~8.5范围内酶活力保持稳定;此蛋白酶对Na Cl耐受性不强,Na Cl浓度超过2 mol/L时,酶活力被显著抑制(P0.01);金属离子Ca2+对蛋白酶活力具有激活作用,可以增强蛋白酶热稳定性;Mn2+则对蛋白酶活力具有抑制作用,而K+与Mg2+对蛋白酶活力无影响;1.31 mol/L异丙醇以及1mmol/L DTNB对酶活力基本无影响,5 mmol/L的EDTA严重抑制其蛋白酶活力,1 mmol/L的PMSF则使其完全失活,说明此酶可能是一种金属依赖性的丝氨酸蛋白酶。     

枯草芽孢杆菌B.SUBT12酶学性质研究

考察分离得到的一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌B.SUBT12最适作用温度、pH值以及温度、pH值、金属离子和表面活性剂对酶稳定性的影响。试验研究表明:该酶最适作用温度为55℃,最适作用pH为7.5,酶在55℃反应45min仍有50%的酶活力,热稳定性较好。金属Ca2+和表面活性剂Tween-80对酶有一定的激活作用,但激活作用不显著。     

复方蛋白酶促进剂的初步研究

分别探讨了三种金属离子及其与天然有机物组方后对1398中性蛋白酶活力的影响.采用福林法测定了酶的最适工作条件,并在此基础上确定了三种不同金属离子的最适添加浓度,同时较系统地考察了它们分别作用于酶以及与天然有机物进行组方后对酶活力的影响,结果表明钙离子与天然有机物组方后对酶活力提高最为显著.     

高产蛋白酶根霉菌株的筛选及酶学性质研究

试验以实验室保存的12株根霉菌为研究对象,通过平板初筛、发酵复筛筛选出产蛋白酶活力强的菌株,并对其蛋白酶的最适反应温度、最适p H值以及金属离子对酶活力影响等酶学性质进行研究。平板初筛中选出了R8、R9和R12三株HC值大的菌株进一步复筛。发酵复筛中测定三株菌的蛋白酶活力依次为R8>R9>R12。进一步对三株菌的蛋白酶性质进行研究,结果表明,几株菌所产蛋白酶的最适温度都在40℃左右,p H值对三株菌蛋白酶活力影响较大,R8和R9在p H5.5~6.0酶活力强,R12在p H6.0~6.5酶活力强。K+、Ca2+、Mg2+对酶促反应有一定促进作用,Cu2+、Zn2+对酶促反应有抑制作用,Na+对酶促反应的影响不大。     

复方蛋白酶促进剂的初步研究

分别探讨了三种金属离子及其与天然有机物组方后对1398中性蛋白酶活力的影响。采用福林法测定了酶的最适工作条件，并在此基础上确定了三种不同金属离子的最适添加浓度，同时较系统地考察了它们分别作用于酶以及与天然有机物进行组方后对酶活力的影响，结果表明钙离子与天然有机物组方后对酶活力提高最为显著。     

浓香型大曲中蛋白酶菌株的分离及酶学性质研究

从浓香型大曲中分离得到1株产蛋白酶优势菌株,并将该菌所产蛋白酶经硫酸铵分级沉淀、透析、吸附树脂处理,得到蛋白酶粗酶。对该酶的最适pH值、pH值稳定性、最适温度、温度稳定性、金属离子影响等进行研究。结果表明,该菌株产蛋白酶的最适pH值为7,pH值稳定性较差;最适温度为40℃,热稳定性随温度增加而降低;金属离子Li+和螯合剂EDTA对该酶具有抑制作用,金属离子Mn2+、Fe3+、Cu2+、K+、Zn2+、Mg2+、Ca2+等均对该酶具有激活作用,其中Zn2+对该酶的激活作用最强。     

生物技术产物(HFS)对酸性蛋白酶酶活的影响

探讨生物技术产物HFS对537酸性蛋白酶活力的影响,测定了该酶的最适反应条件(最适温度为55℃,最适pH3),较系统考察了HFS对537酸性蛋白酶温度作用曲线和pH作用曲线的影响。试验结果表明,生物技术产物HFS对537酸性蛋白酶具有较好的激活作用,且不改变酶的最适反应条件。     

福寿螺纤溶活性蛋白的纯化及性质研究

通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-32纤维素柱和SephadexG-75柱层析,从福寿螺(Ampullarum crossean)体内分离纯化出一种相对分子质量约为40kDa的纤溶活性蛋白,紫外光谱法测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带.研究表明,该蛋白作用最适pH为8.0,最适温度为59℃,热稳定性较好,金属离子Na+对酶的活力无影响,而K+、Mg2+、Ca2+可提高此蛋白酶的活力.采用平板法测定此蛋白酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性.     

地衣芽孢杆菌弹性蛋白酶纯化和性质研究

用地衣芽孢杆菌发酵液制备弹性蛋白酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀和Sephadex凝胶柱层析的方法分离纯化弹性蛋白酶,并对弹性蛋白酶的酶学性质进行研究。结果表明：弹性蛋白酶粗酶液经40%～70%饱和度的硫酸铵纯化后比活力提高到120U/mg,经凝胶柱层析纯化后比活力可达到292U/mg,纯化倍数为12.6,SDS-PAGE法证实弹性蛋白酶分子质量为29.5kD。对酶学性质的研究结果表明：弹性蛋白酶最适反应温度为55℃,最适反应pH值为7.4,以刚果红-弹性蛋白为底物,米氏常数Km为9.67mg/mL。低浓度金属离子Ca2+和K+对酶活力有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Zn2+和Al3+对酶活力则有抑制作用。     

化学物质对蛋白酶在羊毛减量率及有关方面的影响

考查了金属离子、葡萄糖、蔗糖、甘油、表面活性剂对蛋白酶在羊毛减量率及有关方面的影响.它们在一定条件下能提高蛋白酶对羊毛的减量率,但原因却不同.金属离子的作用主要是提高蛋白酶的活力,葡萄糖、蔗糖、甘油主要是维持蛋白酶在水溶液中高级结构的稳定性,而表面活性剂能降低溶液表面自由能,降低蛋白酶从溶液扩散到羊毛纤维表面的能垒.     

猪皮残存AS1398酶活力的酸性抑制

对AS1398酶在不同pH值的酸性缓冲溶液中的活力抑制进行了试验,以此为基础,研究了猪皮块中残存的AS1398酶在加NaCl与不加NaCl的酸性缓冲溶液的活力变化,找到了一种通过两次酸性缓冲溶液处理完全抑制皮块中残存酶活力的方法.     

铬鞣革屑固定化1398中性蛋白酶的制备和应用

以铬鞣革屑为载体、戊二醛为交联剂,探讨了影响1398中性蛋白酶固定的因素。确定了制备固定化1398中性蛋白酶的最佳条件:温度35℃,pH值7.0,戊二醛与载体反应的时间4 h,酶与载体反应的时间8 h,戊二醛用量0.11%,酶用量3.1%。用铬鞣革屑固定化1398蛋白酶催化水解明胶,采用串连柱型反应器,可方便的控制水解明胶相对分子质量的大小。     

影响生姜蛋白酶稳定性因素的探讨

生姜蛋白酶作为一种重要的植物蛋白酶在食品工业中有广泛的应用,实验研究了金属离子、巯基试剂、抗氧化剂、螯合剂、食品加工试剂对生姜蛋白酶稳定性的影响。结果表明:KCl,MnCl2,FeCl2,巯基乙醇、异抗坏血酸钠、EDTA二钠、蔗糖、NaCl对生姜蛋白酶有激活作用,尤其较低浓度的FeCl2对酶就有很强的激活作用,ZnSO4、CuSO4可抑制其活性。     

蜂胶提取物中抑菌成分稳定性研究

对蜂胶提取物抑菌性能进行研究,同时以蜡样芽孢杆菌为指示菌研究蜂胶提取物抑菌成分的稳定性。结果表明：蜂胶提取物具有较强的抑菌活性,对热处理、pH 值、紫外线、金属离子均具有较好的稳定性,仅在121℃或pH10 处理后其抑菌活性才明显下降。     

芽孢杆菌NCB-01胞外蛋白酶酶学特性的初步研究

该实验对来自于渤海海域沉积物的芽孢杆菌NCB-01分泌的胞外蛋白酶的酶学特性进行了初步研究。结果表明,该蛋白酶的最适作用温度为60 ℃,最适pH值为8.0,在50 ℃以下及pH值7.0～9.0的范围内酶稳定性良好。该酶具有较好的金属离子耐受能力,Fe2+、K+、Na+、Mn2+、Ca2+、Mg2+对酶活均有不同程度的激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂（PMSF）能强烈抑制该酶的酶活性,表明该蛋白酶为丝氨酸碱性蛋白酶。非离子型表面活性剂Tween-20、Tween-80及Triton X-100和阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）对酶活均有较强的抑制作用。该酶具有良好的耐盐性。其米氏常数（Km）为1.11 mg/mL,最大反应速率（Vmax）为91.74 μg/（min·mL）,说明该碱性蛋白酶与酪蛋白的亲和力好,特异性强。     

沙棘SOD结构修饰及性质研究

研究沙棘SOD纯化和化学修饰的效果。用沙棘原果为材料,经透析膜进行纯化SOD,选用月桂酸对沙棘SOD进行化学修饰,最后分别对天然SOD和修饰后SOD做热稳定性、抗酶解性、抗酸碱性和金属离子影响的研究。研究结论表明:修饰后SOD的热稳定性与pH稳定性均明显提高。与天然SOD相比,修饰后的蛋白酶酶切耐受性明显增强,同时金属离子对修饰后的SOD影响也较天然SOD不同。     

大鲵肌肉ACE抑制肽的制备及其稳定性

以大鲵肌肉为原料,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为评价指标,通过单因素试验筛选得到3种效果较佳的单酶。在此基础上,借助混料试验,对三酶复合的配比进行优化。当风味蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶质量比为0.54︰0.23︰0.23时,产物具有最高的ACE抑制率,IC50值为0.55 mg/mL。探究金属离子和体外模拟胃肠消化道酶系对对产物ACE抑制率稳定性的影响,结果显示,Zn^2+、Al^3+、Fe^2+离子能显著降低大鲵多肽的ACE抑制率,胃蛋白酶系对大鲵多肽的ACE抑制率影响较小,但胰蛋白酶系能显著降低ACE抑制率。     

荧光假单胞菌胞外蛋白酶的纯化及特性研究

采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析、Sephacryl S-100 HR凝胶过滤层析方法对从原料乳中分离出一株荧光假单胞菌胞外耐热蛋白酶进行纯化及特性研究。将纯化后的单一蛋白酶进行SDS-PAGE分子质量测定,并考察最适温度、最适pH值、热稳定性、金属离子对其酶活性的影响及对该蛋白酶的氨基酸种类分析。纯化后蛋白酶的分子质量为47kD,经纯化后蛋白酶比活力提高了近61.38倍;最适温度和pH值分别为30℃和7.0;二硫苏糖醇对蛋白酶活性具有一定的抑制作用,Fe2+可以促进蛋白酶活性的提高;该酶具有较强耐热性,原酶液经130℃热处理3min后,残留酶活仍超过原酶液的47.67%;该蛋白酶氨基酸组成中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和谷氨酸(Glu)的含量占明显优势,其中Gly含量最高,物质的量分数高达42%。