里氏木霉高产纤维素酶菌株的选育及产酶培养基的优化

通过对里氏木霉DWC原生质体紫外线诱变,筛选产纤维素酶活力高的突变株并对该菌株的产酶培养基进行优化.研究原生质体最佳诱变时间以筛选高产纤维素酶的突变株.同时分别对产酶培养基中不同种类碳源和氮源、Vogel's母液、表面活性剂对cMc酶活(CMCA)、FP酶活(FPA)的影响进行了研究.结果表明:原生质体经过90 s诱变,得到产纤维素酶活力高的突变株DWC5,其CMCA、FPA分别达到410.2 ms/mL·0.5 h和23.2 mg/mL·h分别为原菌株的1.5倍和1.2倍.DWC5突变株的CMCA、FPA达到最高水平的培养基条件是:氮源NH4>C10.2%、碳源微晶纤维素1%、Vogel's母液4.0%、吐温80 0.1%～0.15%、微量元素母液0.01%.     

椰纤果发酵液中降解细菌纤维素酵母菌株的分离及鉴定

从被微生物污染的椰纤果发酵液中分离筛选出13株能够降解细菌纤维素的酵母菌株,并对这些菌株产生的纤维素酶粗酶液进行了酶活测定。选择羧甲基纤维素酶活(CMCA)和滤纸酶活(FPA)较高的酵母菌株3-1进行了鉴定,鉴定酵母菌株3-1为东方伊萨酵母(Issatchenkiaorientalis),菌株培养液CMCA为71.48IU,FPA为81.07IU。     

马铃薯渣高效降解菌的驯化、发酵试验及菌粉制备

以马铃薯渣为主料,以选育马铃薯渣高效降解菌为目的,利用梯度法对康宁木霉40144进行定向驯化,并对驯化后的菌株进行发酵试验。结果表明,在发酵条件下,康宁木霉的纤维素酶活提高了2．94倍,发酵培养基的含糖量提高了1．34倍,含氮量提高了1．5倍。驯化的菌株有良好的降解马铃薯渣的能力。将驯化后的菌株制成菌粉,经涂布检测表明,菌粉中的活菌数量可达1．3×10^7个／g,冻干发酵剂可直接应用于马铃薯渣的发酵生产。     

以豆渣为基质高产纤维素酶菌株的选育

以豆渣为培养基,通过时里氏木霉Rut C-30进行紫外诱变,经水解圈法初筛和摇瓶发酵复筛,选育出适合在豆渣中生长,并且产纤维素酶和半纤维素酶活力较高的菌株LX0121.菌株产纤维素酶(FPA)和半纤维素酶活力的变化规律基本一致,在28℃摇床培养4d达到酶活高峰期,酶活分别为5.87U/mL和125.6U/mL.     

里氏木霉Rut-C30发酵热水预处理稻草产纤维素酶

为提高工业生产菌Trichoderma reesei Rut-C30产酶能力,以热水预处理稻草(hot water pretreated rice straw,HWPRS)为碳源,开展系统优化培养基与培养条件以及采用添加剂等方面的实验工作。菌株初始摇瓶发酵HWPR产纤维素酶在168 h时滤纸酶活(FPA)为1.20 U/m L。通过单因素实验与正交实验,获得最佳培养基(g/L):HWPRS 50.0、玉米浆6.0、(NH_4)_2SO_44.0、KH_2PO_41.0、尿素0.2、MgSO_4·7H_2O 0.4、CaCl_20.3;最佳培养条件:pH6.0、转速220 r/min、温度30℃、接种量φ6%;优化后菌株产酶FPA达2.69 U/m L,是优化前2倍以上。添加吐温-80能显著提高产酶,β-葡萄糖苷酶活(BG)提高26%;添加乳糖主要能提高BG酶活;实验中首次发现壳聚糖类物质能促进纤维素酶发酵,其中壳聚糖效果最明显,添加1.5 g/L壳聚糖时纤维素酶FPA与BG分别提高了10%和30%,使纤维素酶FPA、CMCase和BG分别达到3.67、8.65和1.76 U/m L。该产酶稳定性为上罐实验证实,所产纤维素酶FPA水平是初始摇瓶发酵的3倍,初步显示了其工业发酵潜力。     

微波诱变筛选纤维素酶高产菌株

利用透明圈法和刚果红染色法从堆肥中分离出产纤维素酶活力较高的霉菌7株。通过测定其羧甲基纤维素(CMC)酶活力和滤纸(FPA)酶活力,筛选出酶活力较高的5株菌,分别命名为D_2、D_(12)、D_(13)、D_(21)、D_(23),其中菌株D_2产酶能力最强,CMC酶活和FPA酶活分别为252.3U/mL和104.4U/mL。根据D_2菌株的菌落、菌丝、分生孢子梗、孢子的形态等特征,初步鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)。为了进一步提高菌株D_2的产酶能力,对其进行了微波诱变,得到产酶活力最高的突变株W_(41),其滤纸(FPA)酶活达到128.7U/mL,比D_2菌株提高了23.3%。经连续传代,其性能稳定。     

一株纤维素酶产生菌的抗阻遏选育

从沂蒙地区灌木枯枝中筛选到一株产纤维素酶菌株,初步鉴定为绿色木霉(T.viride Persex Fx NS90).该研究考察了不同浓度阻遏剂甘油、葡萄糖、纤维二糖对菌株生长和产酶的影响.结果显示:菌株生长的生物量随发酵培养基中甘油、葡萄糖、纤维二糖的浓度增加而提高,当培养基中分别含0.6%的甘油或0.4%葡萄糖时,菌株的相应发酵产酶活力较高,葡萄糖的浓度达2%时,菌株发酵产酶能力受到明显抑制,纤维二糖浓度对菌株发酵产酶没有明显的影响.实验采用紫外和微波对筛选菌株进行诱变处理,在含一定浓度阻遏剂的分离培养基上进行修复筛选,对选育出突变菌株的显微形态、抗阻遏性能和发酵产酶能力进行考察.结果表明:经紫外照射90s,微波辐射60s,结合2%葡萄糖平板修复选育,筛选到的突变株在生长过程中,菌落由黄色逐渐变为绿色,呈现黄色孢子,相对于出发菌株其抗阻遏性能明显提高,摇瓶发酵产CMCA和FPA酶活分别提高了41.0%和44.95%.     

利用等离子诱变技术改造纤维素酶生产丝状真菌工业菌株

为了降低纤维素乙醇工业中的用酶成本,必须改良纤维素酶生产菌株,提高丝状真菌的纤维素酶生产效率。我们首先对草酸青霉的工业菌株进行紫外线诱变,通过纤维素双层平板初筛和摇瓶复筛,获得了纤维素降解能力有一定的提高的草酸青霉,随后再对紫外线诱变过的菌株进行等离子诱变,摇瓶培养,依据胞外蛋白浓度进行初筛,继续摇瓶复筛,得到了一株较为理想的变异菌株PQ-5,滤纸酶活(FPA)较出发株提高28.2%。这是第一次报道采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术可有效提高草酸青霉纤维素酶生产能力。     

高产纤维素酶突变株的筛选及其产酶条件优化

通过常压室温等离子体技术诱变里氏木霉RUT-C30,筛选高产纤维素酶突变株,并对其产酶进行优化,提高纤维素酶的产量。筛选得到高产纤维素酶突变株后,进行全基因组测序分析突变型,并对产酶培养基和培养条件进行优化。结果表明：经过筛选获得高产纤维素酶突变株JNDY-13,其摇瓶发酵最高滤纸酶活可达2.21 IU/mL,为出发菌株的2.21 倍,优化后JNDY-13在5 L罐中流加发酵所产最高滤纸酶活为5.40 IU/mL;测序结果显示JNDY-13基因组中共有752 个突变发生,其中半乳糖激酶基因中被插入的18 个碱基可能是突变株纤维素酶活力增加的原因。     

纤维素酶产生菌黑曲霉的选育及其产酶条件的研究

进行优良纤维素酶高产菌株的选育,并研究其发酵条件.以黑曲霉菌株S1为原始出发菌株进行紫外诱变,经过单因素实验和正交实验优化突变菌株的产酶条件.获得一株高产纤维素酶黑曲霉(Aspergillus niger)菌株S12,其最佳产酶条件为:在pH6.0、培养温度28℃、培养时间96 h条件下;秸秆粉2.5 g、麦麸2.5 g、1%(NH4)2SO410mL.在此条件下,滤纸酶活力为3.79 IU/mL,羧甲基纤维素酶活力19.06 IU/mL,β-葡萄糖苷酶活力47.33 IU/mL,其酶活分别是原始菌株的1.20倍、1.70倍和1.13倍.     

纤维素酶的滤纸酶活和CMC酶活的测定

采用3，5-二硝基水杨酸（DNS）为显色剂、滤纸或CMC为底物，测定纤维素酶的滤纸酶活（FPA）和CMC酶活（CMCA）。分析确定了酶活测定用波长为530nm，参比溶液应为失活酶、底物和DNS等共热的反应物，比较了两种底物的酶活测定方法，结果表明：纤维素酶的CMC酶活比滤纸酶活高，酶对水溶性底物有较高的活力，吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响。     

纤维素酶耐高温高产菌株的选育

该文以绿色木霉N0为出发菌株，经紫外线、亚硝基胍诱变处理，采用刚果红透明圈法，在含有制霉菌素浓度为20U的平板上挑取Hc值(透明圈直径与菌落直径之比)比N0大的菌株分别在不同温度下进行固态发酵复筛，得到耐高温(38℃)高酶活菌株110。     

大曲中放线菌和青霉产酶初探

以从大曲和糟醅中分离出的放线菌和青霉为研究对象,用淀粉培养基和纤维素刚果红培养基对两种菌分别进行初筛,根据透明圈和菌落直径之比大小筛选出产淀粉和纤维素酶的菌株,进一步通过固体发酵培养并测定淀粉酶和纤维素酶活,筛选出三株分解淀粉和纤维素的菌株命名为放线菌F1,青霉Q4,青霉Q5,其中青霉Q4的两种酶活力都较高,α-淀粉酶活达到1160u/g干曲,内切纤维素酶活达到301.83u/g干曲,滤纸酶活达到48.26u/g干曲。     

离子注入诱变米曲霉及酱油优良生产菌株的快速筛选

利用平板透明圈法,在pH为5.5的筛选培养基条件下,分别采用酪素、淀粉和羧甲基纤维素(CMC)平板,对用离子注入法诱变米曲霉3042后得到的诱变菌株进行快速筛选,然后进行复筛,测定其三角瓶曲酶活,确定优良生产菌株。同时进行了诱变菌株蛋白酶,纤维素酶,糖化酶酶学性质研究。     

紫外诱变法选育酒酒球菌乙醇胁迫耐受菌株及其发酵性能研究

该研究以酒酒球菌（Oenococcus oeni）SD-2a为研究对象,采用紫外诱变法选育乙醇胁迫耐受突变菌株,评价其在乙醇胁迫条件下的生长能力,并测定其产β-葡萄糖苷酶活性及其在模拟酒中苹果酸、乳酸含量及活菌数的变化。结果表明,分离筛选到3株乙醇胁迫耐受性好的突变菌株,分别编号为UVe1、UVe2、UVe3,在高体积分数乙醇（12%和14%）胁迫环境下,3株突变菌株的生长速度均显著高于出发菌株SD-2a（P＜0.05）;突变菌株UVe2的β-葡萄糖苷酶活性显著高于出发菌株SD-2a和对照菌株L-450（P＜0.05）;在模拟酒中,3株突变菌株的苹果酸降解与乳酸生成速度均显著高于出发菌株SD-2a（P＜0.05）,且突变菌株UVe1和UVe2的存活率显著高于出发菌株SD-2a（P＜0.05）;综上,突变菌株UVe2具有优良商业酒酒球菌的潜力。     

秸秆纤维素降解菌的分离筛选、复合菌系构建及产酶条件优化

该研究采用刚果红染色法和滤纸条崩解法从山西老陈醋源中分离筛选纤维素降解菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定。以滤纸酶活性为筛选指标构建复合菌系,采用单因素试验及响应面试验对其产酶发酵条件进行优化,并评价其对不同秸秆的降解效果。结果表明,筛选出3株纤维素降解菌,编号为J1、J2和J3,分别被鉴定为灿烂类芽胞杆菌（Paenibacillus lautus）、千叶类芽胞杆菌（Paenibacillus chibensis）和窖泥类芽胞杆菌（Paenibacillus vini）。3株菌等比例复配得到最佳复合菌系D,其最优产酶发酵条件为初始pH 7.4,接种量9%,发酵温度40℃。在此优化条件下,滤纸酶活性达到35.10 U/m L,是优化前的1.6倍。复合菌系D对不同秸秆均具有较好的降解效果,且对小麦秸秆的降解率最高,达27.63%。     

豆豉中丁硫克百威降解菌的筛选及鉴定

以豆豉为筛选原料,采用逐步增加液体培养基中丁硫克百威的浓度对降解菌进行驯化富集,然后进行平板划线获得单菌落,采用高效液相色谱法测定降解菌株对丁硫克百威的降解率,降解率高于60%的菌进行PCR测序及序列比对,并对其降解丁硫克百威的影响因素进行研究。结果表明,筛选的14株降解率高的菌株的4株菌株降解率高于60%,其中JJ-1被鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),JJ-4鉴定为毕赤酵母(Pichia pastoris),JJ-5鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),JJ-8鉴定为柑桔青霉(Penicillium citrinum)。当pH=8时,JJ-4对丁硫克百威的降解率为50.87%,而此时丁硫克百威自身水解速率仅有5.29%,在环境温度25~40 ℃时,JJ-4对丁硫克百威的降解速率是丁硫克百威自身水解速率的2~3倍。菌株JJ-4降解丁硫克百威的最适pH为8,最适温度为35 ℃。JJ-4对丁硫克百威的降解速率符合一级动力学,拟合方程为C_t=36.189e0.1009 d(R2=0.9912)。     

蔗渣纤维素分解菌的筛选、鉴定及酶活的测定

为充分利用蔗渣,筛选高效降解蔗渣的菌株,本文从堆肥中分离得到有显著透明圈、可产纤维素酶的真菌8株,选其中3株测定了羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPA)活性。结果表明,菌株SC8的透明圈直径、CMCase和FPA活性均最大。经菌落形态特征分析,初步鉴定菌株SC8属于曲霉属(Aspergillus)。相关性分析表明,所筛选菌株在纤维素透明圈直径的大小与CMCase、FPA酶活性成极显著正相关(p0.01)。     

繁茂膜海绵中产甲壳素酶菌株筛选的研究

通过富集培养和初筛，从繁茂膜海绵中分离到108株产甲壳素酶菌株；其中有12株菌产生的透明圈比较明显。结合平板法和酶活力比较法，筛选出1株高酶活力的优良菌株H7，酶活力为0．5415／mL。通过16SrRNA同源序列分析和系统发育树分析，鉴定菌株H7为Pseudoaheromonas属，和P．ganghwensis/DQ011614相似性达到98％。