呋喃西林代谢物单克隆抗体及荧光免疫层析试纸条的制备

为建立一种基于荧光免疫层析技术的呋喃西林代谢物的快速检测方法,采用活性酯法合成呋喃西林代谢物（氨基脲盐酸盐）（semicarbazide hydrochloride,SEM）人工抗原,并获得SEM的单克隆抗体,通过将量子点微球（quantumdot submicrobeads,QBs）与SEM偶联,得到QBs探针,制备荧光免疫层析试纸条。结果表明：SEM免疫荧光层析试纸条检测鱼肉组织的检测限为0.247 μg/L,不同添加质量浓度的回收率均在70%～120%之间,批内、批间变异系数均在15%以下,符合我国动物源食品中兽药残留检测方法相关指导文件的规定,且在2～8 ℃条件下可以保存6 个月以上,稳定性良好。     

荧光微球免疫层析方法定量检测水产品中4 种硝基呋喃代谢物

采用荧光微球标记抗体作为信号探针,建立荧光微球免疫层析检测方法（fluorescent microsphere immunochromatographic assays,FMICA）,并应用于水产品中4 种硝基呋喃类兽药代谢物残留量的快速定量检测。结果表明：呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃西林代谢物FMICA试纸条的检出限分别为0.004（以1-氨基-乙内酰脲衍生物计算）、0.01（以5-吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算）、0.008（以3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算）、0.009（以氨基脲衍生物计算）μg/L;检测线性范围分别为0.005～5、0.01～10、0.01～10、0.01～10 μg/L;最佳检测时间为10 min,方法特异性良好。水产样品经衍生化处理后,经检测硝基呋喃代谢物的加标回收率在75.88%～104.81%之间,变异系数均小于15%。FMICA方法操作简单、快速、成本低,适用于水产品中硝基呋喃类兽药代谢物快速定量检测。     

苯乙醇胺A荧光免疫层析试纸条的制备及特性

为通过荧光免疫层析技术制备一种快速、灵敏、特异性强的尿液中苯乙醇胺A（phenylethanolamine A,PEAA）的检测方法,采用重氮化法合成PEAA人工抗原,并通过免疫、融合、有限稀释法获得特异性抗PEAA的单克隆抗体,通过将量子点微球与PEAA偶联,制备荧光免疫层析试纸条。结果表明：PEAA免疫荧光层析试纸条的检测限为0.496 μg/L,回收率在80%～120%之间,批内、批间变异系数均小于10%,与其他类似物的交叉反应率小于5%,特异性良好。说明将荧光免疫层析技术应用到PEAA检测中是可行的,且制备的PEAA荧光免疫层析试纸条灵敏度高、准确性好、特异性好,应用前景广阔。     

荧光免疫层析试纸在水产品中呋喃唑酮代谢物快速检测中的应用

目的 建立一种快速检测水产品中呋喃唑酮代谢物的荧光免疫层析试纸。方法 以紫外灯下呈鲜亮红色的铕荧光微球为抗体标记物, 通过调试荧光微球-抗体复合物的工作液配方, 优化检测线和控制线, 改善试纸反应性能和荧光显色梯度, 提高试纸灵敏度。结果 结果显示, 通过肉眼判断本试纸对呋喃唑酮代谢物的最低检出限为0.25 mg/kg, 特异性良好, 在冷藏条件下其稳定性可达1年。在40批次不同品种水产品的检测中, 试纸检测结果与液相色谱-串联质谱法的检测结果符合程度为100%。结论 呋喃唑酮代谢物荧光免疫层析试纸具有快速简单、准确灵敏、成本低的优势, 其结果易于判定, 无需专门的检测仪器, 适用于大规模筛查、多环节质控和风险评估, 具有广阔的应用前景。     

呋喃唑酮代谢物单克隆抗体和胶体金免疫层析试纸条的研制

本研究旨在建立一种快速检测呋喃唑酮代谢物残留的方法。试验用呋喃唑酮代谢物的衍生物（CPAOZ）与牛血清白蛋白（BSA）的偶联物免疫小鼠,利用单克隆抗体技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA和间接竞争ELISA法对阳性克隆进行筛选。单克隆细胞株诱生腹水后,经纯化即为单克隆抗体,用于胶体金标记,制备呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条。融合后得到2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,其中4G3纯化后的抗体效价达到1:100万,对CPAOZ的50%抑制质量浓度（IC50）为1.7 μg/L,亲和常数Ka=1.6×109 L/mol。该抗体制备的胶体金试纸条的检测限为4 μg/L,与其他3种硝基呋喃代谢物的衍生物CPAHD、CPSEM和CPAMOZ均不存在交叉反应,对样品的检测与高效液相色谱结果一致。本研究制备了抗呋喃唑酮代谢物特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够实现呋喃唑酮代谢物残留的快速、灵敏的检测。     

量子点微球免疫层析试纸条检测鸡蛋中恩诺沙星的性能评价

目的:现场快速筛查鸡蛋中恩诺沙星。方法:按《食品安全国家标准食品中41种兽药最大残留限量》要求,依据国家市场监督管理总局2023年1月发布的《关于规范食品快速检测使用的意见》,制备3个浓度水平的恩诺沙星加标样本。50份空白样本和50份标准限量要求0.5倍浓度水平(5μg/kg)的加标样本用以评价快检方法的假阳性率;50份标准限量要求1倍浓度水平(10μg/kg)的加标样本用以评价快检方法的假阴性率。50份实际鸡蛋样本用量子点微球免疫层析试纸条与HPLC-MS/MS方法分别进行检测。结果:量子点微球免疫层析试纸条可以满足国家限量要求,假阴性率为0%,假阳性率为0%。实际样本检测时,量子点微球免疫层析试纸条与HPLC-MS/MS方法的结果符合率高。结论:借助于便携式读取仪,量子点微球免疫层析法可获得数字化的准确结果,适合鸡蛋中风险因子的大批量样本现场快速筛查。     

用于水产品中硝基呋喃类代谢物检测的胶体金快速检测试剂板的研制

目的 本文采用胶体金免疫层析技术,研制了一种水产品中硝基呋喃代谢物四合一免疫胶体金快速检测试剂板.方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和微孔中.包被后的NC膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条.结果 经试验,该四合一试剂板对水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)和呋喃妥因代谢物(AHD)的检出限分别为1.0、1.0、1.0、2.0μg/kg.结论 试剂板具有快速、准确、灵敏度高的特点,适用于大批量水产样品中硝基呋喃代谢物的检测.     

聚集诱导发光微球免疫层析试纸条定量检测水产品中孔雀石绿

目的 建立一种用于定量检测水产品中孔雀石绿的高灵敏免疫层析检测新方法。方法 以聚集诱导发光荧光微球为标记探针,制备荧光免疫层析试纸条,通过T/C比值法构建定量检测孔雀石绿的定量标准曲线,并实现水产品中孔雀石绿的高灵敏、定量检测。结果 本方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较高的检测灵敏度,其50%抑制率达到0.17μg/kg,最低检出限为0.05μg/kg。样本加标0.25、0.50、1.00μg/kg的平均回收率介于116.01%～122.76%,变异系数介于8.66%～11.71%(n=10),表明所建立的荧光免疫层析方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较好的准确性、精密度。通过检测30份孔雀石绿阴性以及12份阳性的水产样本,结果表明所建立的荧光免疫层析方法无假阳性,且检测孔雀石绿含量与液相色谱-串联质谱法具有良好的一致性(线性相关系数为0.9695)。结论 本研究以聚集诱导发光荧光微球为新型标记探针,建立了一种高灵敏检测水产品中孔雀石绿的定量方法,为水产品中孔雀石绿的筛查检测提供了技术支撑。     

免疫层析试纸条标记探针研究进展

免疫层析试纸条(Immunochromatographic test strips,ICTSs)有效结合了层析法卓越的分离能力和常规免疫分析技术的高度特异性,加之其便携性,该技术无疑为灵敏、定量现场检测提供了一个理想的平台。近年来随着检测方法和技术的不断革新,包括生色、发光及电化学信号产生型等在内的多种探针不断涌现,它们或直接共价结合靶标蛋白或装载于纳米颗粒中用于免疫层析试纸条的标记。本文旨在总结归纳当前ICTSs标记探针的最新进展,详尽解析各类探针性质、发展、优略势及其在生物分析中的应用,以期为研究者在设计试纸条时适宜探针的选择提供有力的技术支持。     

CdTe量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗

以巯基乙酸作为稳定剂,利用水热反应制备了水溶性的高荧光CdTe量子点,量子产率为54.961%。研究了该量子点在1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺的作用下与抗克伦特罗抗体的共价连接。结果表明：该量子点与克伦特罗抗体连接后体系的荧光强度和吸光度均增强,且峰位均未发生明显移动,F/P值为4.20。将该偶联反应物CdTe-Anti CLE pAb作为荧光标记物,组装出一种用于检测克伦特罗的荧光免疫试纸条,最低检测限达0.5 μg/L,与酶联免疫吸附法进行对比,该试纸条能够实现对克伦特罗的快速检测。     

量子点标记免疫层析试纸条快速检测谷物中赭曲霉毒素A

目的:根据竞争抑制免疫层析原理,构建一种基于量子点标记的免疫层析试纸条用于检测谷物中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的残留量。方法:通过活化酯法将羧基功能化的量子点(Quantum dot,QD)与赭曲霉毒素A多克隆抗体(Antibody,Ab)偶联制备量子点抗体偶联物(QD-Ab);通过分别添加不同量的QD-Ab和工作液,优化量子点标记免疫层析试纸条的工作条件;通过商品化试剂盒验证该方法的有效性。结果:当QD与Ab的摩尔比为1:10时,QD-Ab荧光特性最佳;在QD-Ab和工作液添加量分别为1、10 μL时,量子点标记免疫层析试纸条结果最佳;量子点标记免疫层析试纸条的检测限为0.5 μg/L,谷物样品中的检测限为5 μg/kg,整个检测过程不超过10 min;量子点标记免疫层析试纸条特异性良好且具有有效性。结论:该方法操作简便、检测快速、结果准确灵敏,易于判断,可以满足谷物中赭曲霉毒素A残留量现场快速检测的要求。     

基于比色和荧光双信号检测戊唑醇的免疫层析试纸条的构建

基于Au@PDA核壳纳米粒子和其对量子点荧光淬灭效应,制备了一种双信号读取模式的免疫层析试纸条,可用于定性或定量检测果蔬中戊唑醇的含量.研究了纳米金和抗体复合物的制备、试纸条传感元件的载量和缓冲液等因素对试纸条检测灵敏度的影响.在最优条件下,采用比色检测模式时,所构建双信号戊唑醇试纸条,其肉眼定性检测限为1μg/mL;...     

一种新型定量检测恩诺沙星量子点免疫层析方法的建立

恩诺沙星作为一种应用较为广泛的抗生素,因在实际抽检中出阳率较高引起了广泛的重视。本研究建立了一种可以快速定量检测恩诺沙星,采用量子点进行标记和示踪的免疫层析方法。通过对新型的纳米荧光材料量子点结合抗原抗体等活性材料的技术研究、样本前处理试剂的研发、浓度的筛选优化等技术实现量子点材料与食品基质的配适,建立定量检测恩诺沙星免疫层析的平台。通过对试剂盒整体的相关优化,本检测方法线性范围为2~1000 ng/mL,最低检测限为1.80 ng/mL,精密度可控在10%以内,热加速稳定性为37 ℃可稳定放置10 d,性能优越。与传统液相色谱方法比较,简便快捷,整体检测时间可控在20 min内,检测结果相关性较好,相关系数为0.98。本研究弥补国内对量子点与免疫层析技术相结合定量检测食品类抗生素残留方面研究的空缺,可实现大批量现场原材料的快速筛查,推动食品快检技术的发展。     

荧光微球免疫层析技术定量检测河鲀毒素

建立河鲀毒素的荧光微球免疫层析检测方法。基于抗体亲和位点保护标记方法制备抗河鲀毒素抗体偶联荧光微球,方法简单稳定,所有结合分离步骤均在亲和柱中完成,避免了亲和位点被破坏而且荧光信号更强,将检测灵敏度提高至原来的8倍左右。所建立的河鲀毒素检测方法IC50为18.4 ng/m L,线性范围为2~200 ng/m L(y=-0.15ln x+0.95,R2=0.98)。检测河鲀样本的最低检出限为10μg/kg,平均相对标准偏差小于25%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需15 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前速测提供了一定技术手段。     

硝基呋喃类代谢物胶体金法检测的前处理研究

采用胶体金免疫层析方法建立了水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测,并对其样品前处理方法进行了研究。结果表明,最佳衍生剂为4-硝基苯甲醛(4-NP),用量为0.1 m L,衍生条件为60℃水浴条件下孵育60 min,提取剂用量为6.0 m L,净化剂用量为1.0 m L。呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)的线性范围分别为0.0μg/L~4.0μg/L、0.0μg/L~4.0μg/L、0.0μg/L~6.0μg/L、0.0μg/L~6.0μg/L;添标回收率均为76.6%~102.3%;相对标准偏差均为3.03%~7.40%。该样本前处理方法适合硝基呋喃类代谢物免疫胶体金快速检测。