基于高活菌数的瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌混合发酵工艺优化

以瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌混合发酵培养,利用两菌株细胞代谢的差异,以静置发酵24 h后得到的活菌数目为指标,通过单因素实验和正交实验,研究了瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌高活菌数混合发酵的最适发酵条件。结果表明,瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌高活菌数混合发酵的最优条件为:发酵温度37℃,初始pH=6.8,接种量6%,瑞士乳杆菌:鼠李糖乳杆菌=1∶2,瑞士乳杆菌优先接种3 h。最终得到乳酸菌总活菌数为7.2×10~9m L~(-1)。与在相同条件下单独发酵的瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌活菌数相比,分别提高了1∶8倍和10.2倍。为乳酸菌的高活菌数发酵奠定了基础。     

瑞士乳杆菌LH-G51冻干菌粉生产工艺研究

目的:对瑞士乳杆菌LH-G51菌粉生产工艺进行优化。方法:通过单因素及正交试验设计,确定适合LH-G51生长的发酵培养基、冻干保护剂配方及生产工艺。结果:发酵时间、碳氮源及微量元素添加量均对LH-G51生长有明显影响。最终确定LH-G51培养基碳氮源及微量元素为葡萄糖20 g/L、大豆蛋白胨10 g/L、酵母膏15 g/L、MgSO_4·7H_2O为250 mg/L、MnSO_4·H_2O为50 mg/L、发酵时间10 h、保护剂为B。结论:根据优化工艺,LH-G51冻干菌粉活菌数可达到4.21×10^(11)CFU/g。     

高活性副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备及工艺优化

目的:优化副干酪乳杆菌多种冻干保护剂的配比和真空冷冻干燥工艺参数,提高发酵剂的活菌含量,为冻干菌粉的制备提供指导。方法:以存活因子为指标,通过单因素实验筛选大分子保护剂、糖类、聚合物类、抗氧化剂类保护剂,应用正交试验优化保护剂配比,并通过单因素分析冷冻干燥的工艺参数,采用扫描电子显微镜观察冻干菌体形态。结果:副干酪乳杆菌冻干保护剂配方为:脱脂奶粉15%,蔗糖20%,聚乙烯吡咯烷酮(PVP K-30) 7%,谷胱甘肽(GSH)1.3%;真空冷冻干燥的工艺参数为在15℃下预处理2 h,保护剂pH为6.5,菌液和保护剂的比例为1∶1.5 (v/v),冻干厚度为0.5 cm,预冻方式为在液氮(-196℃)下处理15 min。在此条件下,副干酪乳杆菌经真空冷冻干燥后存活因子达(0.998±0.001),活菌数为(2.35±0.02)×1011CFU/g。经电镜观察发现菌体形态饱满,结构完整。结论:研究结果表明优化后的冻干保护剂及冻干工艺参数适用于副干酪乳杆菌菌体的保存,菌体活性保持良好,该工艺具有良好的应用推广前景。     

植物乳杆菌CGMCC8198冻干菌粉的制备工艺优化

为提高植物乳杆菌CGMCC8198冻干存活率,以浓缩乳清蛋白粉、木糖醇和壳寡糖为保护剂材料,先后通过单因素和正交试验得出最优复合配方,并进一步对冻干菌粉的活性及储存性能进行探究。研究表明：各保护剂成分对冻干存活率的影响顺序为浓缩乳清蛋白粉＞壳寡糖＞木糖醇,且最优配方质量分数分别为15%、6%及1.5%,添加复合保护剂的冻干菌粉表面光滑且精致,流式细胞术分析表明冻干后其活性保持较好,约为80.47%。同时,耐受试验表明冻干菌粉具有较好的耐酸性和肠溶性。     

一株鼠李糖乳杆菌培养条件的优化

为获得高活菌数的鼠李糖乳杆菌,优化筛选自婴儿粪便的鼠李糖乳杆菌HCS01-003的最适培养条件和筛选优化培养基中最佳促生长因子,研究采用单因素实验设计,分别考察了培养温度、培养基初始pH值、接种量和需氧型对菌体生长的影响;选取了低聚异麦芽糖、低聚半乳糖、水苏糖、维生素B2、维生素B5、维生素B126种物质作为优化培养基...     

鼠李糖乳杆菌冻干保护剂的研究

以菌种冻干后存活率为指标,研究糖类、蛋白质类、多元醇类对鼠李糖乳杆菌的冻干保护作用。实验结果表明,在脱脂乳、甘油、海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、糊精、抗坏血酸、谷氨酸钠、麦芽糖10种物质中保护效果较好的物质分别为脱脂乳、海藻糖、甘油。将它们确定为单因素进行响应面分析,响应面优化结果为:脱脂乳11.12%、海藻糖4.87、甘油2.96%。菌种冻干后的细胞成活率能达到96.48%±1.27%,与理论预测值接近。     

鼠李糖乳杆菌发酵及冻干保护的研究

对鼠李糖乳杆菌发酵性能和冷冻干燥存活率与保护剂、发酵时间和温度的关系进行了研究。利用液体发酵、紫外分光测量法、微量活菌计数法进行培养、测量。结果表明，鼠李糖乳杆菌发酵周期为12－16h；乳清粉和双歧因子对鼠李糖乳杆菌发酵产酸性能和细菌总数有定的影响。正交实验结果表明，10％乳清粉，15％脱脂奶粉，16h发酵时间的组合，冷冻干燥后存活的影响无显著性差异。结论：乳清粉和双歧因子在发酵后期会对鼠李糖乳杆菌的生长和发酵有促进作用可能是含糖量较高的原因。在冻干时，蛋白质（特别是酪蛋白）对细菌有保护作用。     

鼠李糖乳杆菌(H0107)冻干保护剂的优化

以鼠李糖乳杆菌为研究对象,研究冻干保护剂脱脂乳粉、麦芽糊精、海藻糖、葡聚糖及甘油对菌株冻干存活率的影响。在鉴定菌种的基础上,先后通过单因素实验和正交实验得出最佳冻干保护剂组合,并进行验证,此配方冻干存活率为96.38%,根据配方的组成阐述冻干保护机理。     

瑞士乳杆菌发酵乳制备ACE 抑制肽的条件优化

本研究以脱脂乳为主要原料,对瑞士乳杆菌发酵产生血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽工艺条件进行研究。通过单因素试验和响应面试验设计,确定瑞士乳杆菌发酵脱脂乳生产ACE 抑制肽的最佳工艺条件为：脱脂乳浓度9.67%(m/V)、底物灭菌时间30min、接种量3%(V/V),温度38.82℃、发酵时间6.26h,测得ACE 抑制率为92.26%。研究结果证实利用发酵法生产乳源ACE 抑制活性肽对控制高血压具有重要意义。     

瑞士乳杆菌冻干发酵剂制备中保护剂的选择

通过对不同种类不同浓度的冻干发酵剂复水后活菌数和乳酸脱氢酶的测定,比较了几种冻干保护剂对瑞士乳杆菌的保护效果.实验表明,选用10%～15%脱脂奶,10%～15%海藻糖作为保护剂,对瑞士乳杆菌的冻干保藏有较好的保护效果.     

瑞士乳杆菌冻干保护剂的选择

研究几种高、低分子化合物对冻干瑞士乳杆菌的保护作用.以冻干后的活菌存活率和凝乳时间为考察指标,先进行单因素试验筛选出保护效果最好的4种物质甘油、葡萄糖、组氨酸和牛血清白蛋白,用这4种物质复配,进行复合保护剂正交试验.结果表明:将增菌培养基发酵液(含10%脱脂乳)与冻干保护剂溶液混合冻干,最佳保护剂配方为0.5%甘油+15.0%葡萄糖+150 mg/L组氨酸+1.5%牛血清白蛋白.加入冻干保护剂后,瑞士乳杆菌冻干后存活率可达89%.     

海藻酸钠固定瑞士乳杆菌条件优化

采用海藻酸钠固定瑞士乳杆菌,制备具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的酸乳,通过单因素试验和L9(34)正交试验确定其最优固定条件。结果表明,最优固定条件是1.5g/100mL海藻酸钠溶液、菌液浓度1:10(m/V)、0.1mol/L CaCl2溶液、固定时间1h。将固定化的瑞士乳杆菌与传统酸乳发酵剂(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)复配接入到11g/100mL牛乳中,在37℃条件下发酵至凝乳,凝乳时间为8h,pH值为4.2,凝乳状态好,口感柔和、细腻,成品酸乳ACE抑制活性为70.3%。     

不同中和剂对植物乳杆菌LP-C冻干菌粉制备的影响

研究了氨水(NH_3·H_2O)、氢氧化钠(NaOH)及碳酸钠(Na_2CO_3)作为发酵中和剂对植物乳杆菌LP-C(以下简称LP-C)冻干菌粉制备的影响。研究中对高细胞密度培养过程中的活菌数、碱液消耗速率、细胞长度及冻干过程中的冻干存活率等参数进行了监测。结果表明:(1)在高细胞密度培养阶段,使用Na_2CO_3作为中和剂时,培养终点活菌数最高,可达到(1.31±0.08)×10~(10)CFU/m L;各实验组碱液消耗速率变化趋势基本一致,均是在培养前期0~6 h快速增长,之后逐步下降;各实验组菌体长度均随培养时间推移逐渐减小,至培养终点,Na_2CO_3实验组细胞长度最小,为(1.05±0.13)μm;(2)在离心、冻干后,Na_2CO_3实验组获得的冻干菌粉活菌数最高,为(5.17±0.27)×10~(11)CFU/g,冻干存活率最高,为(89.31±0.74)%。由此可以得出,Na2CO3更合适作为中和剂应用于LP-C冻干菌粉的制备,碱液消耗速率可作为判断LP-C生长情况的间接指标,较小的细胞形态更利于提高培养液活菌数和冻干存活率。     

鼠李糖乳杆菌LT22培养条件的优化及增殖曲线的绘制

采用测定鼠李糖乳杆菌LT22培养物的生物量及酸度的方法,对培养基的成分和起始pH值、培养温度、时间、方式及接种量进行优化;通过测定培养物的pH值和A600,绘制鼠李糖乳杆菌LT22发酵增殖曲线。结果表明,鼠李糖乳杆菌LT22发酵培养基的优化组合是:20%麦芽汁、3%豆粕汁,添加适量的无机盐;优化后的培养条件是:培养基pH值自然,30℃~37℃静置培养48h,接种量2%。发酵增殖曲线表明生物量与pH值正相关,培养36h时菌体生物量达最大值;38h时培养物pH值为最低值。     

干酪乳杆菌鼠李糖亚种冻干保护剂的研究

以存活率为指标,对干酪乳杆菌鼠李糖亚种(Lactobacillus casei subsp.rhamnosus 719)的菌体进行冻干保护研究,通过优化冻干保护剂,以降低冻干过程中的细胞损伤.结果表明,7种保护剂中,保护效果由大到小依次为海藻糖、脱脂奶粉、蔗糖、甘油、可溶性淀粉、硫酸锰、抗坏血酸;复配则以质量分数10%海藻糖+10%脱脂奶粉的组合为最佳,其菌体存活率达100%,冻干菌粉活菌数达1011 g-1.     

响应面法优化鼠李糖乳杆菌冻干保护剂配方的研究

直投式乳酸菌发酵剂的制备中,菌体在冷冻干燥过程中受损会降低发酵活力。采用响应面法结合Plackett-Burman实验设计与最陡爬坡法,探讨保护剂对鼠李糖乳杆菌的保护效果。结果表明:脱脂乳、海藻糖和甘油对菌体存活率的影响比较显著,脱脂乳与海藻糖、海藻糖与甘油对菌体存活率的交互作用影响高度显著,而脱脂乳与甘油的交互作用不显著。冻干保护剂最佳配方为:脱脂乳浓度6.56g/100mL、海藻糖浓度2.35g/100mL、甘油浓度2.47g/100mL,在此条件下,菌体存活率可达86.69%,该配方有较强的实用价值。      

响应面法优化鼠李糖乳杆菌冻干保护剂配方的研究

直投式乳酸菌发酵剂的制备中,菌体在冷冻干燥过程中受损会降低发酵活力。采用响应面法结合Plackett-Burman实验设计与最陡爬坡法,探讨保护剂对鼠李糖乳杆菌的保护效果。结果表明:脱脂乳、海藻糖和甘油对菌体存活率的影响比较显著,脱脂乳与海藻糖、海藻糖与甘油对菌体存活率的交互作用影响高度显著,而脱脂乳与甘油的交互作用不显著。冻干保护剂最佳配方为:脱脂乳浓度6.56g/100mL、海藻糖浓度2.35g/100mL、甘油浓度2.47g/100mL,在此条件下,菌体存活率可达86.69%,该配方有较强的实用价值。     

双歧杆菌冻干菌粉制备工艺的研究

优化双歧杆菌冻干菌粉的制备工艺及检测冻干菌粉在模拟人体胃肠环境中的耐受性和贮存稳定性,采用3 种方法制备双歧杆菌冻干菌粉。方法1：双歧杆菌在牛奶还原培养基中的扩大培养液加入甘露醇作为保护剂制备冻干菌粉;方法2：双歧杆菌在PTYG 培养基中的扩大培养液经低温离心得到菌泥,向菌泥中加入保护剂甘露醇、增量赋形剂脱脂乳粉制备冻干菌粉;方法3：同方法2 得到菌泥,向其中加入保护剂甘露醇、包埋剂明胶及增量赋形剂脱脂乳粉制备冻干菌粉。由方法2 得到菌粉活菌数较高,为1.31 × 1010CFU/g;经模拟胃肠环境处理后,活菌数仍保持在4.19 × 108CFU/g;对胃酸、胆汁酸具有很高的耐受力。经典加速实验证明由方法2 制备的菌粉室温保存1 年以上活菌数仍保持在107 数量级,具有较好的贮存稳定性。     

香蕉低聚糖对鼠李糖乳杆菌增殖条件的优化

探寻香蕉低聚糖对鼠李糖乳杆菌的最佳增殖条件。以香蕉低聚糖为碳源,以鼠李糖乳杆菌的数量为指标,在单因素实验的基础上,采用响应曲面法研究培养时间、低聚糖添加量、菌液浓度以及初始菌液pH对鼠李糖乳杆菌增殖数量的影响,建立各种因素与鼠李糖乳杆菌增殖数量关系的数学回归模型。结果表明:当以香蕉低聚糖为碳源时,对鼠李糖乳杆菌增殖的最佳条件为:培养时间37 h,低聚糖添加量为6 g/L,菌液浓度为2.2×10⁶ CFU/mL,pH为6.80。在此条件下,进行三次重复实验,实际测得的鼠李糖乳杆菌数量为1.5×10⁹ CFU/mL,取对数后得9.1706,与预测值的RSD值为0.149%。综上所述,本实验所得模型合适,回归方程对实验拟合度好,其最佳优化条件适合于鼠李糖乳杆菌的增殖。     

鼠李糖乳杆菌电转化条件的研究

目的:研究不同因素对鼠李糖乳杆菌电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,提高电转化效率。方法:以鼠李糖乳杆菌05-28为受体菌株,大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒p MG36e为载体,通过原生质体电转化的方法研究了质粒浓度、电击缓冲液、电转化参数、复苏培养基组成及复苏培养时间对电转化效率的影响。结果:利用1μL质量浓度为1μg/μL的质粒p MG36e,在电场强度8 k V/cm,电阻200Ω,电容25μF的条件下进行电击转化,以含有0.5 mol/L蔗糖和20 mmol/L的MgCl_2、CaCl_2且无吐温80的MRS再生培养基复苏培养2.5 h,并采用添加红霉素的筛选培养基,获得1.66×105CFU/μg DNA的电转化效率。结论 :实现了鼠李糖乳杆菌的高效遗传转化,为遗传育种提供了技术支持。