脱硫菌Rhodococcus sp.LY822专一性脱硫活性及相关基因的研究

以专一性脱硫菌Rhodococcus sp. LY822质粒DNA为模板,利用已知的脱硫基因序列设计引物,PCR扩增得到了3个脱硫基因片段dszA, dszB和dszC. 构建了相应的表达质粒pETA, pETB和pETC,在转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达,得到了dszA, dszB和dszC基因的融合表达产物. SDS-PAGE分析结果显示,蛋白带分子量分别为50, 40和45 kDa. 3种重组菌BL21(DE3)(pETA), BL21(DE3)(pETB)和BL21(DE3)(pETC)的无细胞粗提液(2 mL)的活性检测结果表明,DszC酶的粗提液反应30 min能够将0.02 mmol/L二苯并噻吩完全转化为二苯并噻吩砜,DszA酶的粗提液能够将0.01 mmol/L二苯并噻吩砜完全转化为羟基联苯亚磺酸盐,DszA和DszB酶的粗提液联合作用能够将0.01 mmol/L二苯并噻吩砜完全转化为2-羟基联苯,证明LY822对二苯并噻吩的降解符合专一性脱硫的"4S途径".     

高产1,3-丙二醇的等离子体诱变菌株选育及发酵动力学分析

以肺炎克雷伯氏菌为出发菌株,利用大气压介质阻挡放电等离子体诱变,确立等离子体诱变的物理参数和最佳诱变条件,分别以不同浓度的底物和产物筛选培养基对诱变菌液进行驯化,并结合96孔板筛选单菌落,获得一株高产1,3-丙二醇的突变菌株,命名为Kp-M2,其间歇发酵1,3-丙二醇产量比野生菌提高43%.基于Logistic和Lue...     

南极菌Pseudoalteromonas sp.A211-5产碱性α-淀粉 酶Amy172的克隆表达及酶学性质研究

对具有淀粉降解活性的南极菌Pseudoalteromonas sp.A211-5进行测序分析,根据基因注释结果,获得了一条基因序列为2 139 bp的淀粉酶基因,命名为amy172;通过特异性引物克隆获得Amy172的基因序列并进行异源表达;采用Ni-NTA层析柱对重组α-淀粉酶Amy172进行纯化,采用DNS法测定其酶学性质,采用薄层层析(TLC)技术对其酶解产物进行分析。结果表明:SDS-PAGE显示在分子量为79 kDa左右有一条明显的目的蛋白条带;重组α-淀粉酶Amy172最适温度为50℃,最适pH值为10.0,且在pH值5.0～10.0的范围内仍能保持80%以上的酶活,金属离子Fe~(3+)、Mn~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Ca~(2+)、K~+、Sr~(2+)、Ni~(2+)和Ba~(2+)对酶活性具有抑制作用;TLC分析Amy172的酶解产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖和麦芽四糖。