蓖麻毒蛋白分离条件优化

本文以蓖麻蛋白为原料,通过单因素试验和正交试验优化对毒蛋白纯化工艺进行优化。结果表明:最佳工艺条件为缓冲液pH值7.0、缓冲液浓度0.10mol/L、D-半乳糖浓度0.10mol/L和洗脱速度1.0mL/min。优选所得工艺设计合理、结果可靠,可作为蓖麻毒蛋白的分离纯化工艺。     

重组蛋白LuxS诱导表达及纯化条件的优化

目的：优化重组蛋白LuxS诱导表达及纯化条件,提高具有生物活性的重组蛋白LuxS的表达量,为体外合成自诱导物2（autoinducer-2,AI-2）奠定基础。方法：采用单因素试验,优化诱导培养基、诱导温度、诱导前菌体生物量、诱导时间以及异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG）的浓度;采用Ni-NTAPurification System对重组蛋白进行纯化,比较Native Elution Buffer的咪唑浓度和pH值对重组蛋白纯化的影响,确定最佳的Native Elution Buffer;对比蛋白与树脂结合时不同缓冲液的纯化效果,选择最优的结合缓冲液。结果：重组蛋白的最佳诱导表达条件为：以LB培养基为诱导培养基,菌液OD600 nm为0.6～0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导温度为37 ℃,诱导时间为12 h。采用添加3 mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液作为蛋白与树脂结合的缓冲液,含500 mmol/L咪唑的Native Elution Buffer（pH 6.5）作为蛋白洗脱液。使用分离获得的LuxS蛋白合成的AI-2生物活性约为阳性对照的6 倍。结论：本研究成功优化了重组蛋白LuxS的诱导表达及纯化条件,获得了具有生物活性的重组蛋白,并成功合成了AI-2。     

富硒茶中硒蛋白冻融法辅助提取工艺优化

为了使富硒茶茶渣中的硒蛋白具有更高的提取率,以单因素试验作为硒蛋白提取试验的基础,选择液固比、碱液浓度、提取时间和温度进行正交试验提取富硒茶中硒蛋白并对冻融法辅助提取硒蛋白的相关参数进行优化处理。结果显示,提取硒蛋白的最佳工艺条件为:Na OH溶液浓度0.10 mol/L,液固比60∶1(V∶m),提取温度70℃,提取时间3h,提取次数2次。在该条件下,硒蛋白粗品提取率为60.93%,硒蛋白粗品纯度为52.07%。并进一步利用乙醇沉淀法对所得硒蛋白粗品进行纯化,得到纯度为78.26%的硒蛋白,纯化过程中蛋白质的损失率为7.21%。     

麻疯树籽饼粗蛋白提取及毒蛋白Curcin脱除工艺的研究

以麻疯树籽饼为原料,研究了麻疯树籽饼中粗蛋白的提取工艺,并在此基础上采用超滤技术对毒蛋白Curcin进行脱除.试验结果表明:在提取剂为含1.00 mol/L NaCl的0.005 mol/L PBS缓冲液、原料粒度80目、提取时间90 min、料液比1∶12、提取温度65℃下粗蛋白提取率为98.11%;在超滤时间60 min、超滤压力0.14 MPa、超滤温度45℃、超滤液质量浓度3.235 mg/mL的条件下,毒蛋白Curcin脱除率达到97.62%.     

植物乳杆菌乳酸脱氢酶的抽提与初步纯化

研究了从植物乳杆菌RS2 2中提取胞内乳酸脱氢酶的工艺过程,探讨了超声破碎时菌体质量浓度、处理量及处理时间对破碎效果的影响;对酶的提取工艺研究表明,0.05mol/L磷酸缓冲液(pH7.0)添加0.10～0.30mol/LNaCl可达到较好的抽提效果;对硫酸铵盐析去杂蛋白质及DEAE离子交换层析工艺进行了初步优化.在优化的工艺条件下,酶的总回收率为40.2%,比酶活提高到原来的18.9倍.     

基于响应面法优化凝胶过滤在分离乳铁蛋白中的工艺研究

目前我国乳铁蛋白主要依靠进口，产业化发展相对较慢，相对于其他原料，牛初乳具有廉价、易获得等优点。为低成本获得更多乳铁蛋白，本文对凝胶过滤层析纯化方法进行了优化，并设计了响应曲面试验。研究了磷酸盐缓冲液pH、流速、洗脱液浓度三个不同因素对乳铁蛋白含量的影响，通过设计三因素三水平的响应面试验分析优化凝胶过滤层析在乳铁蛋白纯化中的应用，检测方法采用紫外分光光度法，测量所得样品在475 nm处的OD值，计算出相应的质量浓度，得到最终结果。试验表明：最优工艺条件为磷酸盐缓冲液pH 7.48，流速0.20 mL/min，洗脱液浓度0.42 mol/L，预测乳铁蛋白质量浓度为170.567μg/mL。在此条件下进行三次重复试验并取平均值，实际所得乳铁蛋白质量浓度为166.485μg/mL，相对误差为2.393%，与模型基本吻合。     

醇析法结合离子交换法提取分离卵转铁蛋白

乙醇析出法结合两步弱酸性阳离子交换层析可有效地从鸡蛋清中分离纯化卵转铁蛋白,结果表明:预处理后黏度降低的蛋清经两步醇析法(45%浓度乙醇沉淀杂蛋白、59%乙醇浓度沉淀获得OVT粗品),再经两步阳离子层析法(第一步:pH8.0,20 mmol/L磷酸盐缓冲液平衡,含0.5 mol/L NaCl的pH8.0,20 mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱;第二步:pH5.2,10 mmol/L柠檬酸盐缓冲液平衡,含0.5 mol/L NaCl的pH5.2,10 mmol/L柠檬酸盐缓冲液洗脱)可得到纯度较高的卵转铁蛋白;SDS-PAGE电泳检测终产品的纯度大于96%。     

蛋白A的固定及在抗体亲和纯化中的应用

目的 以蛋白A作配基偶联活化的Sepharose 4FF后纯化兔免疫蛋白IgG.方法 以环氧氯丙烷(ECH)活化凝胶,正交试验确定最佳活化条件;以纯化数据确定抗体兔免疫蛋白IgG纯化最佳缓冲液盐浓度.结果 Sepharose 4FF最佳活化条件:ECH浓度20％(v/v),0.8 mol/L NaOH添加量为1 mL/1 g Sepharose 4FF湿胶,活化时间2.5 h,反应温度40℃.结论 建立将活化琼脂糖凝胶Sepharose 4FF与蛋白A偶联的条件,可应用于纯化兔免疫蛋白IgG.     

天蚕素抗菌肽(Cecropin A)融合蛋白的表达及其分离纯化工艺研究

通过单因素实验确定了天蚕素抗菌肽融合蛋白表达的最佳条件,即温度为31℃,种子菌接种量为2.0%,培养基pH值为6.5,诱导时间为10 h,此时融合蛋白的表达量占细胞总蛋白的30.6%;开发融合蛋白纯化工艺,将工程菌细胞超声破碎后,所得包涵体使用8 mol/L尿素溶液溶解,泵入2 mol/L尿素溶液中搅拌使蛋白质复性,复性完成后将2 mol/L尿素溶液通过超滤置换成含0.5 mol/L NaCl、20 mmol/L的PB缓冲液,pH 7.2,并浓缩溶液体积至总体积的30%～40%,采用镍离子亲和层析法纯化Cecropin A融合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示目标融合蛋白纯度达到87%以上。     

反胶束法提取花生蛋白后萃工艺的优化

以琥珀酸二(2-乙基己基)酯磺酸钠(AOT)-异辛烷-氯化钾缓冲溶液为前萃体系,对从前萃体系中提取花生蛋白的后萃工艺条件进行了研究。考察了后萃时间、后萃温度、缓冲液pH、KCl浓度对花生蛋白后萃率的影响,并在单因素试验基础上,通过正交试验确定后萃最佳工艺条件为:后萃时间50 min,后萃温度40℃,缓冲液pH9.0,KCl浓度1.0 mol/L。在此最佳工艺条件下,花生蛋白后萃率达到86.49%。     

盐及非盐物质对常用低浓度食品胶溶液粘度影响的研究

对饮料生产中常用的食品胶－黄原胶、海藻酸钠、瓜尔胶和琼脂在低浓度水相体系中外加盐（阴、阳离子）、乙醇、蔗糖及柠檬酸对溶液粘度的影响作了探讨性研究,结果表明四种胶溶液（０．１０％黄原胶、０．３０％海藻酸钠、０．２５％瓜尔胶、０．１０％琼脂）中、瓜尔胶溶液对盐的耐受性最好,即大多数阴阳离子都不会对其粘度产生影响,而常用金属盐阳离子及Ｃｌ＾－、ＳＯ３＾２－对黄原胶溶液粘度的影响与阴阳离子对海藻酸钠和琼脂     

无乳链球菌产CMP-唾液酸合成酶发酵培养基优化

为获得低成本高酶活的产CMP-唾液酸合成酶(Cytidine 5'-monophosphate N-acetylneuraminic acid synthetase,NmCSS)培养基,对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)产CMP-唾液酸合成酶发酵生产培养基进行优化。通过单因素试验筛选发酵温度、碳源、氮源、pH,确定对NmCSS酶活具有明显影响的因子及水平值;采用响应面法(Box-Behnken)确定以氮源浓度、碳源浓度、pH为三个主要影响因子的最适条件。结果表明,当培养温度为34℃时,蔗糖浓度为0.10%,氮源浓度为2.50%,pH为7.5、Na₂HPO₄ 2.5 g/L、NaCl 5.0 g/L时,NmCSS酶活为(5.895±0.005)×107 U/mol,较基础发酵培养基的酶活(0.507±0.002)×107 U/mol提高了10.627倍,显示出了良好的优化效果。响应面方法优化得到的低成本高酶活培养基为无乳链球菌产NmCSS及其应用奠定了基础。     

Ultra‐Performance Liquid Chromatographic Determination of L‐Ergothioneine in Commercially Available Classes of Cow Milk

A new efficient and sensitive precolumn hydrophilic interaction ultra‐performance liquid chromatography (HILIC‐UPLC) method was established for the quantitative determination of L‐ergothioneine (ERT) in milk. After derivatization of ERT with 7‐diethylamino‐3‐[4‐(iodoacetamido)phenyl]‐4‐methylcoumarin, chromatographic separation was achieved in a fairly short time, less than 5 min, on a 100 × 2.1 mm Waters Cortecs UPLC HILIC 1.6‐μm column, by using a mixture of 30 mmol/L ammonium acetate/acetonitrile (10:90, v/v) as a mobile phase flowing isocratically at 0.9 mL/min. Limit of detection and the limit of quantification were 0.03 and 0.10 μmol/L, respectively. The method exhibited linearity in a concentration range of 0.16 and 5.08 μmol/L. Mean recovery was 106.66%, whereas intra‐ and interassay precisions were determined to be within 6 RSD%. On average, ERT concentration in different commercially available classes of cow milk was found to be 0.442 ± 0.191 μmol/L, with the highest levels in the ultra‐high temperature milks and low values in the unprocessed and HTST whole milks. In this light, our experiments suggest that ERT could be used as a marker for the heat treatment of milk.     

普鲁士蓝/石墨烯修饰电极检测酱油中的亚硝酸盐

利用电化学沉淀普鲁士蓝纳米粒子在石墨烯的表面,采用差分脉冲伏安法对该电极进行表征,并研究亚硝酸根离子在修饰电极上的电化学行为。结果表明:在0.10 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中,亚硝酸根在1×10-6~1×10-2 mol/L浓度范围内呈线性关系,信噪比为3时检出限为3×10-8 mol/L。所构建的普鲁士蓝/石墨烯修饰电极对亚硝酸根离子具有良好的电催化活性,表现出良好的稳定性、重复性和抗干扰能力,同时将所构建的复合材料修饰电极应用于酱油中亚硝酸盐的检测。     

Hypophagic effects of propionate increase with elevated hepatic acetyl coenzyme A concentration for cows in the early postpartum period

Thirty multiparous lactating dairy cows were used in a randomized block design experiment to evaluate factors related to the degree of hypophagia from intraruminal infusion of propionate. Cows between 3 and 40 d postpartum at the start of the experiment were blocked by calving date and randomly assigned to treatment. Treatments were 1.0 mol/L propionic acid or 1.0 mol/L acetic acid adjusted to pH 6 with sodium hydroxide and infused at 0.5 mol of volatile fatty acid/h from 6h before feeding until 12h after feeding. Propionate infusion decreased dry matter intake by 20.0%, total metabolizable energy intake by 22.5%, and plasma β-hydroxybutyrate concentration by 54.3% compared with acetate infusion. Effects of treatment on dry matter intake were related to concentration of acetyl coenzyme A (CoA) in the liver; hypophagic effects of propionate compared with acetate increased as liver acetyl CoA concentration increased. Hypophagic effects of propionate are greater for cows with elevated concentrations of acetyl CoA in the liver.     

酸解制备低聚糖阿魏酸酯的优化工艺研究

采用稀盐酸水解玉米麸皮制备低聚糖阿魏酸酯(FOs),以FOs的量为指标,研究了液料比、酸浓度、温度、时间和提取次数5个因素对酸解效果的影响,并在此基础上,通过中心组合试验对工艺进行了优化。结果表明,稀盐酸水解玉米麸皮提取FOs的最佳工艺条件是液料比为15∶1(mL/g),酸浓度为0.05 mol/L,温度为100℃,时间为4 h,提取次数为2次,在此条件下,FOs平均含量可达每克麸皮4.66×10-5mol。     

反油酸对人脐静脉内皮细胞活力的影响

目的：观察反油酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖活力的影响。方法：采用50、100、200、400、600μmol/L 等5 个浓度的反油酸作用于人脐静脉内皮细胞,以正常组为阴性对照组,NaOH 组(200μmol/L)为阳性对照组,MTT 法和台盼蓝排斥实验检测其对内皮细胞的毒性。结果显示：反油酸组内皮细胞增殖活力明显低于正常组,且高浓度组(400、600μmol/L)对细胞增殖抑制率明显高于低浓度组(50μmol/L);而NaOH 组与正常组比较却无明显差异。此外,反油酸组活细胞率降低。结论：反油酸对内皮细胞有明显毒副作用,其生长抑制率与反油酸浓度和作用时间呈正相关。     

缬氨酸转氨酶拆分DL-缬氨酸的催化条件

利用具有缬氨酸转氨酶活性的工程菌对DL-缬氨酸进行拆分,考察了反应温度、pH值、底物摩尔比、底物浓度和金属离子对酶活性和底物转化率的影响。结果显示,该催化反应的最适反应条件为:反应温度是45℃,pH=9,L-缬氨酸与丙酮酸的摩尔比1∶8,DL-缬氨酸初始浓度为0.6 mol/L、丙酮酸初始浓度为2.4 mol/L,0.5 mmol/L的Mg2+和Na+对酶活性有明显的促进作用。     

马铃薯淀粉产衣康酸发酵培养基的优化

以马铃薯淀粉为原料,利用土曲霉XL-6发酵生产衣康酸,并对发酵培养基组分进行优化。在单因素基础上,采用Plackett-Bur-man设计法从诸多因素中筛选出显著因素,通过响应面分析方法对其进行优化,建立衣康酸产率的二次多项式回归模型。试验结果表明,在最佳发酵培养基:碳源浓度130g/L,玉米浆2.14g/L,MgSO4.7H2O 2.19g/L,KH2PO4 0.14g/L,NH4NO3 3g/L,FeSO4.7H2O 0.10g/L,衣康酸产率达到7.04%。验证试验的实测值与预测值基本一致,说明模型可较好的反映实际情况。     

玉米直链淀粉的制备及其特性

以普通玉米淀粉为原料,采用稀碱分散法制备玉米直链淀粉。以直链淀粉的得率和蓝值为评价指标,通过正交试验确定最佳分离工艺为NaOH溶液浓度0.35～0.45mol/L、NaCl溶液质量分数5%、离心力5439～7014×g。该法制备的玉米直链淀粉与丁醇法和乙醇分散法制备的直链淀粉以及直链淀粉标准品的特性进行对比,根据其蓝值、特性黏度及特性分子质量、质构特性、相对分子质量分布结果可知,稀碱分散法制备直链淀粉的纯度高于乙醇分散法和丁醇法,并且直链淀粉的凝胶特性和相对分子质量分布情况接近直链淀粉标准品。