青岛海域海洋动物源真菌抑菌生物活性初探

海洋动物源真菌新资源的代谢产物研究对具有新颖结构和环境友好型农用抑菌活性物质的发现具有重要意义.从采自青岛海域的12种海洋动物中分离纯化出24株海洋内生真菌,经过优化培养、薄板层析、分别使用4株常用细菌和4株农用植物病原真菌为指示菌株进行生物活性初筛,结果发现墨斗鱼来源的菌株02-A对细菌具有广谱抑菌活性,小银鱼来源的05-A对EC具有强烈的抑制作用,抑菌圈最大为23mm(阳性对照为30mm),并对农用植物病原真菌表现出一定的抑制作用.     

水葫芦内生菌分离及真菌代谢产物初探

从水葫芦的根茎叶器官中分离纯化出7株内生菌（6株细菌,1株真菌）,经分子生物学鉴定,内生真菌为毛霉科匍枝根霉属中的匍枝根霉;并对7株内生菌粗提物以4株细菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、苏云金芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌）和5株农业病原菌（苹果腐烂菌、葡萄白腐真菌、白菜黑斑病菌、棉花枯萎病菌、高粱炭疽病菌）为指示菌株,采用滤纸片法进行抑菌活性测定.结果发现只有内生真菌对4株细菌有一定的抑菌活性,对5株农业病原菌中的葡萄白腐真菌有微弱的抑制活性,而细菌没有表现出明显的抑菌活性.通过对分离获得的内生真菌进行发酵、分离和纯化的研究,并根据质谱和核磁共振等谱学数据鉴定了一个过氧化麦角甾醇的化学结构.     

6株大型真菌发酵提取物的抑菌及细胞毒活性研究

目的:对6株广东大型真菌红汁乳菇(Lactarius hatsudake)G027、鸟巢菌(Cyathus sp.)G026、革耳菌(Panus sp.)G028、光亮小红孔菌(Pycnoporellus fulgens)G033、菌核斗菇(Lentinus tuber-regium)G025和有柄灵芝(Ganoderma gibbosum)G036的发酵提取物进行抑菌和细胞毒活性研究。方法:分别采用滤纸片扩散法和SRB法对这6株大型真菌的发酵提取物进行抑菌和细胞毒活性研究。结果:菌株G027、G028、G026和G033对金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌活性,其抑菌圈直径分别为25.00、18.23、14.96和14.30mm;6株大型真菌对神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺癌细胞NCI-H460和人肝癌细胞HepG-2均有不同程度的抑制作用,其中菌株G027的活性最为显著,对这4种肿瘤细胞株的IC50值分别为2.84、6.44、11.88和2.96μg/mL。结论:6株大型真菌具有抑菌和(或)细胞毒活性,值得进一步深入研究。     

一株海洋红藻抑菌活性初探

以青岛沿海的多管藻为研究对象,对其乙醇提取物中抑菌活性较好的组分进行柱色谱分离得到8个化合物.以4株细菌和5株农业病原真菌为指示菌株,采用滤纸片法测定各化合物的抑菌活性,并使用生长速率法对化合物ZP-8进行了毒力研究,初步确定其对白菜黑斑病菌和葡萄白腐真菌的毒力方程和EC50,其中对白菜黑斑病菌的EC50为0.19mg/L,对葡萄白腐真菌的EC50为0.52mg/L.     

乳酸菌对中草药的发酵及抑菌活性检测

选择13株性能良好的乳酸菌对5味抗菌、抗病毒中草药(板蓝根、甘草、陈皮、苦丁、苦藠)进行发酵,检测发酵产物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抗菌活性。结果显示,乳酸菌在5味中草药中均能生长,每种中草药均有最适发酵菌株;抑菌试验表明,不同的乳酸菌菌株发酵5味中草药表现出不同的抑菌能力,罗伊氏乳杆菌发酵板蓝根、陈皮、苦丁、苦藠的上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌都具有显著的抑菌效果,甘草被发酵后基本无抑菌活性。     

刺参机体酵母菌组成及其拮抗活性的研究

采用PDA、YPD、MEA培养基从刺参Apostichopus japonicus的体表、肠道和呼吸树分离出23株酵母菌,使用玻璃珠破碎方法提取其DNA,然后用酵母菌通用引物NL-1/NL-4从DNA中成功扩增出26S rDNA片段,将PCR产物进行测序,将各菌株序列在GenBank数据库中进行检索,从Blast比对结果中取相似性最高的序列,用Mega 4.0软件对所有序列进行聚类分析,采用邻接法构建系统发育树。结果表明:从大连柏岚子海域刺参中分离出的菌株分别属于红酵母属、梅奇酵母属和丝孢酵母属,从大连市黑石礁海域刺参中分离出的菌株分别属于红酵母属、假丝酵母属、德巴利氏酵母属、有孢汉逊酵母属和毕赤酵母属;以8株刺参病原菌作为指示菌,采用双层琼脂扩散法对分离菌株的拮抗活性进行测定,获得拮抗酵母菌17株,占总测试菌株的73.9%,从刺参机体的体表、肠道和呼吸树可以筛选出不同得率的活性菌株,其抗菌谱和活性强度各不相同,其中C11菌株的抗菌谱最广,抗菌活性最强;从肠道分离出的拮抗菌C11、C14和C21菌株的胞外产物经硫酸铵沉淀后也具有抗菌活性,C14菌株胞外产物经65%硫酸铵沉淀获得的粗提物对热和蛋白酶K敏感,表明其拮抗物质为蛋白质。     

海洋微生物代谢产物中抗肿瘤活性物质的研究进展

海洋微生物特殊的生存环境造就了其独特的代谢方式,从海洋微生物代谢产物中发现具有良好生理活性的抗肿瘤先导化合物已经成为海洋药物开发的研究热点。本文综述了近年来从海洋微生物中发现的结构新颖的具有抗肿瘤活性的代谢产物。     

一株海绵放线菌的分离培养、发酵条件优化及其抑制弧菌效果

为研究放线菌对海水养殖病原弧菌(哈维弧菌Vibrio harveyi和灿烂弧菌Vibrio splendidus)的抑制效果,从繁茂膜海绵Hymeniacidon perlevis中分离筛选出了一株具有抑菌活性的放线菌(FH),并采用16S r DNA基因序列进行分析,初步鉴定为球孢链霉菌Streptomyces globisporus;以抑菌活性为导向对放线菌FH菌株的发酵条件进行优化,并通过测量发酵沉淀菌丝体干质量,获得了FH菌株生长曲线,同时研究了发酵产物保存温度及时间对抑菌效果的影响,以及FH发酵产物在灭菌海水中对弧菌的抑制作用。结果表明:对FH菌株生长曲线测定结果显示,0~15 h为适应期,15~72 h为指数生长期,72~120 h为稳定期,120 h后为衰亡期;抑制弧菌效果试验显示,FH菌株发酵正交试验的最优条件为温度25℃、p H 7.5、装液量30m L(250 m L三角瓶);在正交试验最优条件下,FH菌株发酵培养72 h获得的粗提物抑制哈维弧菌和灿烂弧菌的效果最好;FH菌株发酵粗提物在4℃和-20℃下保存60 d和在室温保存7 d,其抑菌效果无显著性差异(P>0.05);在100 m L灭菌海水中,FH菌株发酵产物2 m L可有效抑制哈维弧菌和灿烂弧菌的繁殖。研究表明,海绵放线菌及其发酵产物在海水养殖领域具有潜在应用价值。     

枯草芽孢杆菌BA015对无乳链球菌的拮抗作用及其物质分析

为了从微生态防控的角度寻找水生动物无乳链球菌Streptococcus agalactiae病的防治方法,以21株芽孢杆菌Baciclus作为来源菌株,采用双层平板点种法筛选出19株对无乳链球菌有拮抗作用的菌株,经琼脂平板扩散抑菌试验获得一株对无乳链球菌有较强抑制作用的菌株BA015,并对该菌株进行了进一步研究。结果表明:经生理生化及16S rDNA序列分析确定其为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis;BA015去菌体发酵液(CFS)的80%饱和硫酸铵沉淀物抑菌活性最强,抑菌圈直径达(22.8±1.9)mm;特性分析显示,其与茚三酮水溶液反应呈红色,且对高温、酸碱、蛋白酶、有机溶剂、紫外线均不敏感,符合脂肽类物质的特性;经凝胶柱层析后抑菌最强组分的最小抑菌浓度(MIC)为3.2μg/mL;MALDI-TOF-MS分析显示,其脂肽含有伊枯菌素(Iturin)、杆菌霉素(Bacillomycin)、表面活性素(Surfactin)、芬荠素(Fengycin)等。研究表明,枯草芽孢杆菌BA015及其去菌体发酵液对鱼类无乳链球菌病的防治存在潜在应用价值。     

枯草芽孢杆菌BA015对无乳链球菌的拮抗作用及其物质分析

为了从微生态防控的角度寻找水生动物无乳链球菌Streptococcus agalactiae病的防治方法,以21株芽孢杆菌Baciclus作为来源菌株,采用双层平板点种法筛选出19株对无乳链球菌有拮抗作用的菌株,经琼脂平板扩散抑菌试验获得一株对无乳链球菌有较强抑制作用的菌株BA015,并对该菌株进行了进一步研究。结果表明:经生理生化及16S rDNA序列分析确定其为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis;BA015去菌体发酵液(CFS)的80%饱和硫酸铵沉淀物抑菌活性最强,抑菌圈直径达(22.8±1.9)mm;特性分析显示,其与茚三酮水溶液反应呈红色,且对高温、酸碱、蛋白酶、有机溶剂、紫外线均不敏感,符合脂肽类物质的特性;经凝胶柱层析后抑菌最强组分的最小抑菌浓度(MIC)为3.2μg/mL;MALDI-TOF-MS分析显示,其脂肽含有伊枯菌素(Iturin)、杆菌霉素(Bacillomycin)、表面活性素(Surfactin)、芬荠素(Fengycin)等。研究表明,枯草芽孢杆菌BA015及其去菌体发酵液对鱼类无乳链球菌病的防治存在潜在应用价值。