复合酶生产酪蛋白磷酸肽的工艺研究

实验以木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶As1．398、碱性蛋白酶As2709 4种酶复合水解酪蛋白，生产酪蛋白磷酸肽。设计了木瓜蛋白酶 中性蛋白酶As1．398、木瓜蛋白酶 碱性蛋白酶As2709，胰蛋白酶 中性蛋白酶As1．398、胰蛋白酶 碱性蛋白酶As2709、木瓜蛋白酶 胰蛋白酶 中性蛋白酶As1.398和木瓜蛋白酶 胰蛋白酶 碱性蛋白酶As2709六种试验方案。通过比较水解度、酶促水解速率(酶活力)、得率和N／P比等工艺参数，探索合适的实验工艺条件。我们发现胰蛋白酶 中性蛋白酶As1．398这组的产品综合结果最佳。     

CO2超临界流体介质中制革酶脱毛的研究

对CO2超临界流体代替水作介质下的制革酶脱毛进行了研究,并与常规条件下以水作介质进行的有温有浴酶脱毛和堆置酶脱毛作了对比。结果表明：在CO2超临界流体介质中进行制革酶脱毛是可行的,其脱毛分析液的总蛋白含量和羟脯氨酸含量分别约为常规酶脱毛的2倍和1～2倍,其脱毛分析液的酶活力损失低于常规酶脱毛。CO2超临界流体介质中酶脱毛后铬鞣的革,在本实验条件下其收缩温度达到95℃左右,高于常规酶脱毛后铬鞣的革。本实验中较为理想的在CO2超临界流体介质中进行制革酶脱毛的超临界反应条件为：反应压力8．5MPa、反应温度37℃、反应时间2h、AS1．398蛋白酶用量200单位／g皮。     

酶脱毛过程中脱毛液的成分变化分析

为更好地理解酶脱毛的机理，本文用Lowery法、对二甲胺基苯甲醛（DMBA）法和硫酸-蒽酮法分别测定了2709酶和A．S1398酶有温有浴酶脱毛过程溶液中的总蛋白、羟脯氨酸及糖含量的变化。结果表明，它们三者的变化规律具有相似性，其浓度都在脱毛的最初阶段内出现急剧性的增长，此段时间也正好是酶作用毛根鞘与毛袋之间及毛球与毛乳头之间的组分，从而使毛脱落的时间。因而可以用脱毛溶液中的总蛋白及糖含量的多少表征脱毛的程度。     

酶脱毛过程中脱毛液的成分变化分析

为更好地理解酶脱毛的机理,本文用Lowery法、对二甲胺基苯甲醛(DMBA)法和硫酸-蒽酮法分别测定了2709酶和A.S1398酶有温有浴酶脱毛过程溶液中的总蛋白、羟脯氨酸及糖含量的变化.结果表明,它们三者的变化规律具有相似性,其浓度都在脱毛的最初阶段内出现急剧性的增长,此段时间也正好是酶作用毛根鞘与毛袋之间及毛球与毛乳头之间的组分,从而使毛脱落的时间.因而可以用脱毛溶液中的总蛋白及糖含量的多少表征脱毛的程度.     

猪皮酶法脱毛时蛋白酶的活力分析

用福林—酚法可以分析2709碱性蛋白酶在猪皮脱毛浴中的作用和它的活力分配。将消肿水洗的猪皮投入40℃的蛋白溶液(pH11.0)中,组成不搅拌的脱毛浴,可以测出随酶反应时间的增加,浴液中还原性物质有规律地增加,而剩余酶活力则相应地减少。我们认为:猪皮一旦加入酶溶液中,酶分子就迅速地结合在猪皮上,而且结合上的酶的活力等于猪皮投入前的酶活力与投入后的剩余酶活力之差。猪皮上的酶的结合量(结合上的酶活力/投皮前的酶活力)是一个与投酶量无关而仅与酶作用时间有关的一次线性函数。     

两种脱毛蛋白酶活力的研究

本文对两种常用的脱毛蛋白酶（2709碱性蛋白酶与A．S1398蛋白酶）在不同pH值、温度等条件下的活力变化情况进行了研究。结果表明：2709蛋白酶的活力最适pH值为9．5～10，A．S1398蛋白酶为7．5～8．0且2709酶的pH值适应范围更广，对pH值的敏感度更低；两种酶活力的温度变化曲线具有相似性，温度越高，它们的活力衰减得也越快；两种蛋白酶受Mn抖强激活，Cu^2＋、Cr^3＋、Fe^2＋、Zn^2＋等离子则对其有抑制作用；表面活性剂如洗衣粉、平平加和JFC等对两种酶具有一定的激活作用。     

山羊皮清洁脱毛工艺的研究

为减少脱毛工序的污染，研究用硫氢化钠辅助2709酶进行山羊皮酶脱毛的工艺试验，对酶脱毛的方式及酶脱毛过程中的NaHS、酶用量等相关工艺条件进行优化，最后得到一个脱毛效果良好的工艺：0．2％NaHS辅助150u·g^-1 2709酶进行浸酶堆置酶脱毛，与常规灰碱毁毛脱毛工艺相比，该工艺可减少脱毛废液中的S^2-含量、COD及BPD5分别为89．2％、85．0％及84．8％，而成革的相关性能元明显变化，是一个行之有效的清洁脱毛工艺。     

猪皮灰碱法脱毛工艺

本文在总结猪皮脱毛技术的基础上，运用正交试验法对猪皮灰碱法脱毛的工艺技术进行了研究，提出了猪皮灰碱法脱毛的最佳工艺条件，阐明了变型少浴灰碱脱毛法的机理。     

双酶法酶解大豆蛋白制备大豆低分子肽的研究

以水解度为考察指标,研究了枯草杆菌AS1．398中性蛋白酶、木瓜蛋白酶制备大豆肽的工艺参数。结果表明,利用AS1．398中性蛋白酶与木瓜蛋白酶协同水解大豆蛋白制取低分子肽的方法是可行的,木瓜蛋白酶与AS1．398蛋白酶酶活力之比为1：1情况下水解效果较佳。双酶水解的最佳条件是底物浓度100g/L,温度40℃,加酶量为12500U／g,pH为7．5。在此条件下,研究了水解时间与低分子肽得率的关系,表明水解4．5h即可。     

剖蓝革工艺中酶在皮内的分布

配合转鼓酶脱毛剖蓝革制猪皮鞋面革新工艺的研究,本文阐述了猪皮在天然厚度下,以调整pH值控制脱毛蛋白酶(166中性蛋白酶,以下简称为酶)活力的方式,进行脱毛的过程中,在不同的pH值浴液中以及脱毛进行的不同时期,酶在皮内各层域里的分布状况;抑制与复活状况;首次探讨出酶脱毛过程中,在适宜的软化与脱毛的程度下,酶在皮中的分布尚能达到较为均衡和饱和状态。从而对脱毛浴液pH值的合理调整、对确定适宜的脱毛、软化终点提出了初步看法。     

B.subtilis蛋白酶高产菌株的筛选与鉴定

本文以中性蛋白酶生产菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＡＳ１．３９８为出发菌，用ＮＴＧ与紫外辐照相结合的方法对其进行复合诱变，筛选到一株蛋白酶活性明显高于出发菌的正突变株，命名为Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＭＬ。通过对该突变株蛋白酶活性曲线的绘制、酶作用最适ＰＨ的确定、所产一的酶性质的分析及比酶活性的测定，发现该突变株扩酶活性比ＡＳ１．３９８至少高出３０％，最适反应ＰＨ７－８，酶活性受ＥＤＴＡ的强烈抑制，其突变位点很     

响应面法优化牛皮酶法脱毛工艺

研究旨在探求复合酶脱毛的最优工艺条件,并为牛皮的开发利用提供了一定的理论基础。本试验以牛皮酶法脱毛过程中加酶方式、酶活力配比、酶液浓度、酶解时间、酶解pH、酶解温度等为研究因素,在单因素实验基础上进行复合酶脱毛方法,结合响应面法对复合酶脱毛工艺进行优化。结果表明,碱性蛋白酶和中性蛋白酶采用先后加入的酶解方式,得到了碱性蛋白酶和中性蛋白酶的最适酶活力配比、酶解温度、酶液浓度、酶解时间、pH值,测得综合评分为0.756。响应面法分析结果表明,酶解温度和酶液浓度的交互作用对脱毛效果的影响显著,而其他因素交互作用不显著。     

双酶法制备银杏抗氧化肽工艺研究

为获得制备银杏抗氧化肽的最佳工艺,采用2709碱性蛋白酶和胃蛋白酶分步水解银杏种仁蛋白,以总还原能力为指标,考察酶用量、酶解温度、pH值和酶解时间这4个因素对银杏种仁蛋白酶解效果的影响。通过响应面试验得出2709碱性蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为6976U/g、酶解温度为55℃、pH值为8.9、酶解时间为5h,此时银杏种仁蛋白酶解液的总还原能力(A700nm)为1.278;通过正交试验,得到胃蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为9000U/g、pH值为3.0、酶解温度为50℃、酶解时间为2h,此时银杏种仁蛋白酶解液的A700nm为1.636。     

细菌和真菌蛋白酶在生皮脱毛中的应用研究

利用不同来源的微生物酶制剂(中俄两国)进行生皮脱毛试验与研究。对脱毛用微生物酶的来源及其各组成成分的作用,以及传统制革脱毛工艺与微生物酶制剂脱毛工艺显现的不同污染指数进行了详细的论述。结果表明,微生物酶制剂脱毛方法能够有效改善制革工艺,降低制革污染,提高成品革的品质,有利于制革者和皮革消费者的健康。     

花生多肽的制备及纯化的研究

用AS1.398 中性蛋白酶水解花生蛋白得到花生多肽粗品,对影响花生蛋白水解的各种影响因素,如酶制剂的筛选,酶解工艺参数等进行了系统研究,得到最佳工艺条件为：pH6.7、反应温度50℃、酶解时间2.5h、加酶量为6500U/g 底物。超滤截取相对分子量小于5kD 和3kD 以下的两部分,冷冻干燥后用Sephadex G-25 柱层析分别得到两个和一个活性峰。在三甲基甘氨酸SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示单一条带的纯品。相对分子量分别在6.5kD 和 2kD 左右。     

麦胚抗氧化肽水解用酶的筛选研究

研究了中性蛋白酶AS1.398、Neutrase及碱性蛋白酶Alcalase、Proleather FG-F、Protease S水解麦胚蛋白的进程特性,考察了5种蛋白酶水解物的体外抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶Proleather FG-F是制备麦胚抗氧化肽的最适水解酶,其酶解物清除超氧阴离子自由基(O2-.)的能力最强,IC50为1.33mg/mL;其酶解物中相对分子质量小于1000的组分所占比例最高,达到68.28%。     

鸡血酶解工艺条件的研究

以新鲜鸡血为主要原料,研究了酶法水解的工艺条件。研究表明新鲜鸡血用AS1.398中性蛋白酶在水解液初始pH值为7.0,水解温度为50℃,酶用量为8000U/g,鸡血浓度为50%的条件下水解4h,水解后的血液灭酶、离心加入活性碳进行脱色除腥。     

稳定剂对2709碱性蛋白酶作用的探讨

研究了稳定剂在不同温度、不同比例下对 2 70 9碱性蛋白酶泥活力的影响 ,并探讨了其作用机理。     

制备芝麻抗氧化肽的蛋白酶筛选

研究了菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶2709和Alcalase蛋白酶分别酶解芝麻蛋白制备芝麻抗氧化肽,测定多肽产率、水解度并评价抗氧化活性,以多肽产率和抗氧化活性为参数采用逼近理想解排序法对酶解物进行排序,确定适宜制备芝麻抗氧化肽的蛋白酶。结果表明:蛋白酶品种差异会显著影响芝麻抗氧化肽的制备效果;在加酶量相同时,碱性蛋白酶2709、Alcalase蛋白酶、胰蛋白酶酶解芝麻蛋白能力强,多肽产率高,且抗氧化活性强;根据与最优向量距离总和,用于制备芝麻抗氧化肽蛋白酶的适宜性由高到低依次为碱性蛋白酶2709、Alcalase蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶。     

酶水解大豆蛋白物理化学性质的综合表征

大豆分离蛋白分别用AS1.398中性蛋白酶和黑曲霉3.4310酸性蛋白酶在不同条件下水解后,测定其水解度(DH)、三氯乙酸(TCA)溶解度、等电点(IP)溶解度,以及不同分子量区段的相对含量等13个参数.通过主成分分析将这些参数线性组合为4个主成分,但是中性蛋白酶和酸性蛋白酶水解产物参数在主成分中的组合方式不同.以主成分为指标对全体样品进行聚类分析时,两种酶水解产物各自聚为一类;中性蛋白酶和酸性蛋白酶的水解产物单独进行聚类分析则分别得到5个和4个子类,其中包括水解条件差别较大的水解产物,说明水解工艺参数之间存在某种协同或互补效应.