产己酸菌Lysinibacillus fusiformis SigA基因的克隆、表达及生物信息学分析

通过克隆产己酸菌Lysinibacillus fusiformis SigA全长基因,并对其进行表达和生物信息学分析。结果表明,SigA基因开放阅读框（ORF）有1 128个碱基,编码327个氨基酸,其分子质量为45.275 kDa;生物信息学预测表明,L. fusiformis与Lysinibacillus sphaericus具有较近的亲缘关系,二者序列相似度达97%;该蛋白为亲水性可溶性蛋白,与Bacillus sp. B14905相似度达100%,其二级结构主要由α-螺旋和loop环状构成,α-螺旋和loop环状分别占其二级结构的60.15%和 37.79%;预测并优化的三级结构由14个α-螺旋和15个loop构成。     

一株整合型高抗性高效发酵己酸菌的选育研究

该试验采用同源重组技术从产己酸菌-纺锤形赖氨酸芽孢杆菌（Lysinibacillus fusiformis）基因组中敲出α-淀粉酶基因、蔗糖磷酸化酶基因,同时敲进SigA和SigB基因,以提高L. fusifoemis的抗性,选育高效发酵己酸菌。结果表明,SigA和SigB双整合菌株SigA-SigB4在pH 4、乙醇体积分数6%条件下,己酸产量达到360.86 mg/100 mL,比单整合菌株SigB3提高了1.17倍,比非重组出发株L. fusifoemis提高了8.97倍,且经过32代传代后,其高效产己酸效能无显著变化（P＞0.05）。     

浓香型白酒窖泥中产己酸菌的研究进展

酯类物质对浓香型白酒的口感和风味起到决定性作用,由产己酸菌产生的己酸和酒精作用生成的己酸乙酯是浓香型白酒的主要香体成分。产己酸菌是浓香型白酒窖泥中能够影响白酒风味的重要微生物。该文总结了浓香型白酒窖泥中产己酸菌的形态特征和代谢途径;不同培养条件如乳酸亚铁、不同碳源、不同氮源对产己酸菌的影响;对产己酸菌与酵母菌、放线菌以及产甲烷菌等不同菌种共培养以及产己酸菌在窖池养护等实际中的应用进展进行综述,为白酒窖泥中筛选优质的微生物菌种资源与白酒提质増香提供理论基础。     

己酸菌的分离纯化及生长规律的研究

浓香型大曲酒的窖池中栖息着己酸菌、乳酸菌、丁酸菌、甲烷菌、硫酸盐还原菌、硝酸盐还原菌等大量的微生物,这种独特的微生物环境对形成窖香浓郁、绵甜悠长的浓香型典型风格起着举足轻重的作用。其中,己酸菌是浓香型白酒生产中非常重要的产酸微生物,由它代谢产生的己酸与大曲发酵产生的酒精生成己酸乙酯．是浓香型大曲酒的主体香成分。本试验通过对老窖泥富集培养、多次分离纯化等一系列菌种培养工作,并经过产己酸鉴定,筛选出一株高产酸己酸菌,然后,着重研究该己酸菌的生长规律,为科研和生产提供理论指导,促进了己酸菌的科学应用。     

耐高温耐高酒度醋酸菌突变株的选育

以从高温季节发酵良好的醋醅中，分离筛选出的N9、F17两株醋酸菌为出发菌株，经紫外线、硫酸二乙酯逐级诱变，分别获得编号为HNl5、HF6两株耐高温耐高酒度醋酸菌株。在培养温度40℃，培养基酒度12％（V／V）条件下，HN15酒精转化率为75％，HF6酒精转化率为70％。     

九株谷氨酸生产菌的生物学特性研究

【目的】研究九株谷氨酸生产菌的生物学特性,为具有广域pH耐受性的谷氨酸高产菌筛选提供实验依据。【方法】考察九株菌的低pH生长、高pH产酸特性;对磺胺胍、酮基丙二酸、丙二酸和香豆素的耐受性以及发酵特性。【结果】Corynebacterium glutamicumS9114、Corynebacterium glutamicumATCC13761、Corynebacterium glutamicumT613-85均能在pH3·9下生长,而在pH10·5时S9114、Corynebacterium acetoacidophilum ATCC13870、T613-85依然能够产酸;抗性平板上具有明显生长优势的菌株如下:磺胺胍:S9114;酮基丙二酸:S9114、ATCC13870;丙二酸:ATCC13761、ATCC13870、Microbacterium ammoniaphilumATCC15354;香豆素:除ATCC13761和Corynebacterium melassecolaATCC17966,其他耐受程度相似;九株菌中产酸能力最强的是S9114,其次是T613-85。【结论】以S9114为出发菌株进行改造,确定筛选平板为含磺胺胍2%、酮基丙二酸0·25%、丙二酸1·6%、香豆素0·2%的低pH梯度（pH3·6～4·0）平板和高pH梯度平板（pH10·5～11·2）。      

窖泥中高产己酸功能菌的分离筛选及代谢功能的研究

窖泥是己酸功能菌繁衍栖息的场所。该研究从原酒车间老窖泥中分离筛选得到了高产己酸的复合功能菌株,命名为HJ31~#,该复合菌多数为革兰氏阴性杆菌。经条件优化及代谢功能研究,该复合功能菌的最适培养条件为培养温度34～36℃,最佳初始pH值为6.00～7.95,厌氧培养。在最适条件下,复合功能菌株HJ31~#的己酸产量均可达到1000 mg/100 mL以上。     

L-缬氨酸产生菌的原生质体融合及抗高糖融合株的筛选

通过原生质体融合技术选育出一株抗高糖的融合株。以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)NV128和黄色短杆菌(B.flavum)JV16(Leu-Ile-Met-)为亲本菌株,通过单灭活原生质体融合、高糖梯度平板筛选及进一步的硫酸二乙酯(DES)诱变,获得了一株L-缬氨酸高产菌NJ-237。同时研究了影响原生质体形成、再生的3种重要条件(青霉素、酶和渗透压稳定剂),并确定了其最佳处理浓度和时间。该融合株经7 L发酵罐培养72 h L-缬氨酸达到46.8 g/L,糖酸转化率为27.7%,比两亲株都有显著提高。     

一株耐热脂肪酶产生菌XD-23的发酵条件优化

优化脂肪酶产生菌XD-23的发酵条件,采用单因素发酵实验和正交试验,研究其菌株最佳发酵条件,从而提高该菌株所产脂肪酶的活力。通过单因素发酵试验得知,该菌株最佳发酵时间为48 h;最优碳源为橄榄油,其添加量为2.5%;最优氮源为蛋白胨,其添加量为3.0%;最适装液量为80 mL。通过正交试验优选出最佳组合,得出该菌株最适产酶条件为:MgSO4.7H2O 0.05 g,K2HPO4 0.1 g,CaCO2 0.25 g,橄榄油2.5 g,蛋白胨3.5 g,装液量50 mL,发酵培养时间为48 h,在此条件下酶活可提高到258.55 nKat。     

己酸菌选育及在浓香型白酒生产中的应用

己酸是浓香型白酒的主体风味物质己酸乙酯的合成前体,己酸菌是己酸合成的主要功能微生物。优良己酸菌经扩大培养后制作成窖泥培养菌剂对改善窖泥质量、提升浓香型白酒品质大有裨益。该文综述了近年来有关己酸菌筛选情况,重点论述了己酸合成的途径和改进策略,并介绍了己酸菌在浓香型白酒生产中的应用,以提高白酒品质。     

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究

浓香型白酒的主体香味物质是己酸乙酯,己酸菌是重要的功能菌种。该研究从优质窖泥中分离获得了高产己酸菌株,命名为JZZ,该菌是革兰氏阳性杆菌,经形态学和16S rDNA序列鉴定,属于克氏梭菌（Clostridium kluyveri）。通过培养条件考察,该己酸菌最适培养条件为接种量5%,装样量90%,培养温度37 ℃,pH值为6.5。在最适培养条件下,菌株JZZ的己酸产量均可达到4.36 mg/mL。     

多重耐药维氏气单胞菌porin基因敲除的构建及其耐药特性研究

目的 研究微孔蛋白基因porin对维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,A. veronii)耐药性的影响以解析A. veronii的耐药机制。方法 以多重耐药的A. veroniiWL-3为研究对象,采用同源重组双交换的方法构建Δporin敲除株,利用比浊法测定其生长曲线,通过药敏纸片法分析其耐药性。结果 以A. veronii WL-3基因组DNA为模板,利用overlap聚合酶链式反应技术扩增获得上下同源臂融合片段,并连接至自杀质粒pDM4中,重组成敲除质粒pDM4-Δporin。将pDM4-Δporin转化至感受态大肠杆菌SM10中,通过接合转移转入A. veronii WL-3中。通过同源重组双交换构建A. veronii WL-3Δporin敲除株。生长曲线显示与野生株相比,Δporin菌株的生长速度并无明显变化;抗生素耐药特征分析显示敲除porin基因会降低A. veronii对头孢氨苄、新霉素、四环素、环丙沙星等10种抗生素的敏感性,提高对多粘菌素B的敏感性。结论 基因porin不是A. veronii生长所必需的,但会影响A. veronii对部分抗生素的...     

酵素中一株高产酸醋酸菌的鉴定及其产酸特性

以10种酵素样品为菌源,经分离纯化、产酸定性和定量试验,获得1株高产酸量醋酸菌LMY-1,对其形态学、生理生化指标测定及16SrDNA鉴定,确定其为芝庇侬醋酸杆菌(Acetobacter cibinongensis);以苹果、梨、黄瓜作为果蔬培养基,研究菌株LMY-1的产酸特性。结果表明,菌株LMY-1的最适产酸温度为30℃;菌株LMY-1在乙醇含量为4mL/100mL时,产酸量最高(22.72 g/L),比对照菌株CICC7015(Acetobacter pasteurianus subsp.pasteurianus)(19.05g/L)产酸量高;在底酸浓度为1~5 mL/100 mL时,菌株LMY-1和菌株CICC7015的产酸量随发酵时间的变化趋势均先减少后增加再减少;相同条件下,菌株LMY-1产酸速率优于菌株CICC7015;两菌株均产2种有机酸,分别是乙酸和草酸,且乙酸量远高于草酸量。菌株LMY-1更适宜于果蔬酵素的酿造。     

无痕敲除法构建食品安全级枯草芽孢杆菌无芽孢菌株

利用同源重组法快速构建枯草芽孢杆菌(Bacilus subtilis168)spo0A基因缺陷型无芽孢菌株B.subtilis168Δspo0A。经PCR及核酸电泳验证,孢子形成率鉴定和芽孢染色镜检,确定最终获得不产芽孢的B.subtilis168Δspo0A基因缺失突变菌株。基因敲除完成后,菌株基因组不需引入抗性基因或其它任何筛选标记,实现了对spo0A基因的无痕基因敲除。本研究对枯草杆菌的工业化生产及提高相关产品食品质量安全性具有重要意义。      

高产靛蓝色素大肠杆菌工程菌的构建及靛蓝色素稳定性

目前国内外天然食用蓝色素资源稀缺,利用微生物发酵制备的靛蓝色素是天然蓝色素的重要来源之一。本文克隆了假单胞菌B3的苯乙烯单加氧酶基因sty AB,将其在大肠杆菌中进行了异源超量表达,构建了高产靛蓝色素的基因工程菌株E-AB,并研究了温度和光照等环境因素对靛蓝色素稳定性的影响。结果表明,工程菌以吲哚为底物合成靛蓝色素最高产量为68.9 mg/L,较野生型菌株提高约5.4倍。温度和光照条件对靛蓝色素色度稳定性具有显著性影响,低温和避光条件能显著延缓靛蓝色素的降解,而高温和紫外光则加速其降解;靛蓝色素降解反应较复杂,靛红是主要的降解产物之一。研究结果将为天然靛蓝色素的高效生物转化制备及应用提供了理论支持和技术指导。      

一株产高活性多酚氧化酶菌株筛选鉴定及其酶学性质

采用变色圈法从土壤样品中分离筛选产多酚氧化酶的菌株,对其进行形态学观察、分子生物学鉴定,并对其所产多酚氧化酶的酶学性质进行研究。结果表明,筛选得到1株产多酚氧化酶活性较高的菌株,命名为ZL-2,其被鉴定为竹黄菌属（Shiraia sp.）。菌株ZL-2发酵8 d产多酚氧化酶酶活最高,达到521 U/mL。菌株ZL-2产多酚氧化酶最适底物为邻苯二酚,其最适pH值为6、最适温度为30 ℃;酶活在温度20～40 ℃及pH 3～6范围内稳定。金属离子Cu2+、Mg2+、Mn2+、Fe3+、Zn2+对多酚氧化酶都有激活作用,其中Cu2+激活作用最强;Ca2+、Al3+对酶活有一定抑制作用;L-抗坏血酸和亚硫酸氢钠对该酶抑制作用较强。