液相色谱-电喷雾飞行时间质谱法同时测定虫生真菌菌丝中16种游离氨基酸

采用液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(LC-ESI-TOF-MS)法,选择阴离子电离模式,建立了一种同时检测虫生真菌菌丝中16种游离氨基酸的定性定量分析方法。研究结果表明:16种氨基酸的色谱特征和质谱离子特征明显,可用来对氨基酸进行准确定性分析。定量实验结果表明,16种氨基酸的线性范围广准确性高,在氨基酸浓度线性范围4.0～125μmol/L,16种氨基酸的峰面积与浓度相关系数都大于0.998。在氨基酸浓度为50μmol/L时,16种氨基酸的相对标准偏差在0.84%～2.75%之间。用液质联用法对7种虫生真菌菌丝样品中16种游离氨基酸含量的测定结果显示,同一菌株中各种氨基酸的含量相差较大,但所有供菌株中含量最高的均为苯丙氨酸,它在不同供试菌株中的含量范围为0.718～2.173 mg/g,其中中国被毛孢的苯丙氨酸含量最高。供试菌株中含量较高的氨基酸还有脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸,它们含量大部分都在0.3mg/g以上,较其他氨基酸含量明显较高,这些含量较高的氨基酸可作为判定虫生真菌菌丝中游离氨基酸的特征指标。不同菌株的游离氨基酸总量也存在较大差异,中国被毛孢中游离氨基酸总含量为7.537 mg/g,较蝉棒束孢(3.196 mg/g)的总含量高出1.36倍。     

7种虫草真菌菌丝游离氨基酸的聚类分析和 主成分分析

目的研究虫草真菌菌丝中游离氨基酸的组成、主成分和依据氨基酸的聚类。方法以7种虫草真菌菌丝为原料,以菌丝中游离氨基酸含量为对象,应用聚类分析和主成分分析方法探讨不同虫草真菌菌丝中游离氨基酸的含量和组成规律。结果结果表明,聚类分析将7个样品分为3类;其中蛹拟青霉、蝉棒束孢菌丝聚为一类,古尼拟青霉、粉被玛利亚霉、中国被毛孢、细脚拟青霉菌丝聚为一类,戴氏绿僵菌菌丝单独一类。主成分分析提取的前3个主成分可以代表7个样品中游离氨基酸含量93.901%的信息,第一主成分以缬氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、组氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸的影响为主;第二主成分以丝氨酸、苯丙氨酸和精氨酸的影响为主;第三主成分以脯氨酸、赖氨酸和谷氨酸的影响为主。结论聚类分析将7个样品分为3类,主成分分析提取得到3个主成分。     

酱油中游离氨基酸成分分析

采用高效液相色谱柱前衍生法对酱油中氨基酸的组成进行分析，结果表明市售酱油中氨基酸的组成与酿造酱油中氨基酸组成存在一定的差异，这是因为人为添加了鲜味剂，或者是使用植物蛋白水解液所致。经研究表明通过对酱油中氨基酸组成成分分析可以作为酿造酱油品质评价体系提供新思路。     

制丝过程中烤烟内游离氨基酸含量的变化

为了解烟草中游离氨基酸在制丝过程中的变化,对不同工序进行在线取样,采用柱前衍生反相高效液相色谱法对烟草中的游离氨基酸进行了分析,并进行了对比评吸。结果表明,烟草中游离氨基酸的含量在加料后稍微增大;在贮片过程中明显降低;烘丝后部分增加、部分降低;贮片过程中游离氨基酸含量的降低对提高卷烟的感官质量作用明显。     

酸奶中游离氨基酸含量及乳清蛋白组成分析

用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定了5种原味发酵型酸奶中游离氨基酸含量，并用十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析了酸奶乳清蛋白组成。结果表明：被测酸奶中乳清蛋白含量的范围在5.66-10．45g／L，其主要成分为α-乳清蛋白、β-乳球蛋白及少量酪蛋白。用HPLC在酸奶中检测到17种氨基酸，总游离氨基酸质量浓度范围285．90-1116．21mg／L，其中4个品牌酸奶中精氨酸（她）质量浓度最高，1个品牌酸奶中天冬氨酸（Asp）质量浓度最高。     

烘焙期间加料与未加料白肋烟游离氨基酸的变化

采用OPA、FMOC联合在线衍生反相高效液相色谱法测定了烘焙过程中加料和未加料的白肋烟游离氨基酸的变化。结果表明:①烘焙过程中未加料白肋烟的游离氨基酸总量呈先增后减的趋势,烘焙18min后游离氨基酸总量降低19%,其中降幅20%以上的有Asn、Asp、Arg;②加料白肋烟的游离氨基酸总量呈逐渐减少的趋势,烘焙18min后其游离氨基酸总量降低37%,其中降低50%以上的有Glu、Phe,降低40%以上的有Asn、Val;降低30%以上的有Asp、Ser、Arg、Lys、Pro;③未加料和加料的白肋烟中游离氨基酸的变化均主要发生在140℃。     

超高效液相色谱-串联质谱法直接测定啤酒中20种游离氨基酸含量

目的 采用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS),建立高效、快速直接测定啤酒中20种游离氨基酸的方法。方法 啤酒样品经水稀释后,经CAPCELL PAK CR 1:4 ST色谱柱(150 mm×2.1 mm,5μm)分离,乙腈-0.3%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子模式,在多反应监测模式下进行检测。结果 20种游离氨基酸在各自相应线性范围内,线性关系良好,相关系数(r²)均大于0.99;加标回收率为81.3%～108.4%,相对标准偏差在2.5%～7.2%之间,方法检出限为1～6 ng/mL,方法定量限在3～15 ng/mL之间。结论 该方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可快速检测出啤酒中的20种游离氨基酸成分。     

血浆中游离氨基酸的高效液相色谱分析

氨基酸与遗传疾病、肝病、肺心病、癌症等都有关系，对于婴幼儿，特别是一些先天性遗传代谢异常引起的疾病通常很难被及时诊断，一般都是在他们有一些异常症状而又很难用常规方法诊断出来，而体液中氨基酸的异常通常能够反映出先天性遗传代谢异常。在国外，特别是欧美国家筛查、诊     

异硫氰酸苯酯柱前衍生RP-HPLC法同时测定莲雾中15种游离氨基酸的含量

采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱法,建立了同时测定莲雾果实中15种游离氨基酸含量的方法。采用Atlantis T3柱为固定相,以0.1 mol/L乙酸钠缓冲液(pH6.5,含0.5%三乙胺)和乙腈-水(4:1)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温35 ℃,紫外检测器波长254 nm。各氨基酸组分在2.0~500 mg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数r均大于0.99,检出限为0.08~0.35 mg/L,定量限为0.35~1.25 mg/L,加标回收率为85.61%~106.68%,相对标准偏差RSD均小于5%。该方法使得15种氨基酸很好的分离,且准确度和精密度好,灵敏度和回收率高,适用于莲雾果实游离氨基酸含量的分析。

     

游离氨基酸检测方法及其应用

游离氨基酸是动植物体中重要的活性成分和风味物质,随着现代科学技术的进步,游离氨基酸的检测方法多样且应用研究进展迅速,汇总整理各类检测方法及其相关应用不可或缺。综述了常用于检测分析游离氨基酸的分光光度法、离子色谱-积分脉冲安培法、氨基酸分析仪法、高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法5种方法,以及2种新技术,分析了各检测方法的原理及优缺点,并对各检测方法列举了相关应用研究。现代新型技术的发展和推广,多元化离子化方式、高分辨质谱、多级串联质谱等技术将会使游离氨基酸分析的灵敏度、准确度、分析速度及自动化程度均提高到一个崭新的水平,选择性好、准确度高、前处理简便的检测手段将是游离氨基酸检测分析技术的未来发展趋势。     

6种葡萄籽中水解氨基酸和游离氨基酸含量测定及比较

以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,采用Thermo Acclaim~(TM) 120 C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相A为pH 6.5的乙酸钠缓冲溶液,流动相B为甲醇—乙腈—水(体积比20:60:20),在流速1.0mL/min,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长254nm的条件下,建立了高效液相色谱法测定葡萄籽中水解氨基酸和游离氨基酸的含量。结果表明,在试验浓度范围内,17种氨基酸的R~2均0.999 0;水解氨基酸的加样回收率为92.0%～104.6%,RSD为0.83%～4.07%;游离氨基酸的加样回收率为95.2%～102.4%,RSD为1.06%～3.98%。同时,6种葡萄籽中水解氨基酸的含量为130.46～163.24 mg/g,游离氨基酸的含量为2.04～5.13mg/g;用于酿造白葡萄酒的雷司令、赛美容和贵人香3种葡萄籽中游离氨基酸含量较高,用于酿造红葡萄酒的黑皮诺、蛇龙珠和赤霞珠3种葡萄籽中水解氨基酸含量较高。该方法稳定可靠,可用于葡萄籽中水解氨基酸和游离氨基酸的含量测定。     

云南产6种蜂蜜中35种游离氨基酸的测定

目的采用全自动氨基酸分析仪测定蜂蜜中35种游离氨基酸的含量。方法蜂蜜样品经水溶解,采用全自动氨基酸分析仪进行定量检测。检测器为荧光检测器,脯氨酸在波长440 nm处测定,其余34种氨基酸在570 nm波长下测定。结果蜂蜜中含有丰富的游离氨基酸成分,且氨基酸组成及含量存在较大区别。脯氨酸是蜂蜜中的主要氨基酸,其平均含量为0.042978 g/100g,占氨基酸组分总含量的71.21%。35种游离氨基酸的线性相关系数均达到0.99以上,回收率在92.4%~109.4%范围内。结论该方法快速、准确,可用于蜂蜜中游离氨基酸含量的测定。     

葡萄酒酿造过程中氨基酸含量变化的研究

应用HPLC对我国4个产区多个品种葡萄酒酿造过程样品中氨基酸含量变化趋势进行了研究,结果表明,L-脯氨酸是所有葡萄汁中氨基酸的主体,也是各样品含量差异最大的氨基酸;红葡萄酒中含脯氨酸、苏氨酸、赖氨酸等20种氨基酸,其中以脯氨酸含量最高,发现不同葡萄品种之间游离氨基酸种类和含量有差别,这与葡萄品种、气候、发酵工艺有关。     

侗家奇液酒中游离氨基酸含量测定分析

采用日立L-8800型氨基酸自动分析仪分析研究侗家奇液酒中游离氨基酸的组成,色谱条件:标准分析柱4.6mm×60.0mm,反应柱温度:150℃,测定了不同地区保健酒中游离氨基酸的含量。结果表明,所测试样中各种氨基酸加标回收率均在85.2%~112.6%,最低检出限为3pmol。该仪器重现性好,实验数据可靠。测定的侗家奇液酒中游离氨基酸总含量为488.48mg/L,仅次于灵芝酒;谷氨酸含量为252.12mg/L,占氨基酸总量的51.59%,在6种保健酒中含量最高,是一种天然绿色、营养健康的保健佳品。     

高效液相色谱法检测食品中17种游离氨基酸

目的使用异硫氰酸苯酯衍生-高效液相色谱法对食品中17种游离氨基酸进行检测。方法对17种游离氨基酸及其苯胺硫甲酰基衍生物稳定性的分析,研究游离氨基酸的最佳衍生条件。同时,对盐沉淀法和C_(18)固相萃取(solid phase extraction, SPE)小柱法2种样品除杂方法的加标回收率进行测定。结果胱氨酸加热干燥5h后,回收率为68.46%±4.01%,热稳定性差;其它16种氨基酸加热1～5h后回收率均在90%～110%之间,热稳定性较好。胱氨酸的苯胺硫甲酰基衍生物,6h后回收率仅为11.04%±1.65%,稳定性差;其它氨基酸的苯胺硫甲酰基衍生物24 h后回收率均大于90%,比较稳定。另外,前处理中使用C_(18) SPE除杂时,样品中游离氨基酸的加标回收率均大于70%,而使用水杨酸和三氯乙酸除蛋白后苯胺硫甲酰基衍生物降解严重。结论除胱氨酸外,其余16种氨基酸的热稳定性均较好,且生成的苯胺硫甲酰基衍生物比较稳定,可以通过异硫氰酸苯酯衍生进行定量分析。相比于水杨酸和三氯乙酸沉淀法, C_(18) SPE柱是游离氨基酸除杂方法的首选,而无机盐影响异硫氰酸苯酯与氨基酸衍生,因此此方法不适用于含盐样品的衍生。     

自然发酵酸菜游离氨基酸的分析

以自然发酵酸菜为研究对象,利用氨基酸自动分析仪,对酸菜中游离氨基酸的种类及含量进行了测定。结果表明,酸菜中富含17种呈味氨基酸,总含量达635 mg/L。其中,苏氨酸含量最高,其次是谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、缬氨酸和天门冬氨酸等。酸菜中含有7种为人体必需氨基酸,其含量占氨基酸总含量的41.73%。这些呈味氨基酸对酸菜特有风味的形成,具有重要作用。     

全自动氨基酸分析仪测定酱油中游离氨基酸的不确定度评定

该实验评定了全自动氨基酸分析仪测定酱油中游离氨基酸的不确定度。参考 CNAS-GL 006—2019《化学分析中不确定度的评估指南》和JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》中的规定与要求,分析游离氨基酸在测定过程中的各种不确定度来源。在包含因子k=2时,酱油中游离氨基酸的扩展不确定度范围为0.02～0.60 g/100 g。结果表明,影响不确定度的主要因素是仪器本身的不确定度和酱油重复性测量的不确定度。