醋酸杆菌产乙醇脱氢酶发酵条件的研究

选择一株醋酸杆茵Acetobacter sp.CCTCC M209061,通过单因素和正交实验确定醋酸杆菌产乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)的最优发酵条件.结果表明,产ADH的最优培养条件为温度30℃、pH值6.0、通气量为100 mL/250 mL、接种量为8%,在此条件下发酵培养24 h,发酵液酶活可达0.340 U/mL.     

食醋生产中醋酸菌的乙醇脱氢酶活性研究

本文对醋酸发酵过程中醋酸菌乙醇脱氢酶（ADH）活性与产酸速率，产酸浓度的相关性进行了研究。运用检测发酵过程中ADH活力的变化，可感知菌体的发酵能力。     

食醋生产中醋酸菌乙醇脱氢酶的活性与产酸速率关系的研究

探讨了食醋生产过程中醋酸菌乙醇脱氧酶活性与产酸速率的关系,实验表明,醋酸发酵是靠醋酸菌细胞膜结合酶(ADH)进行的,是通过将乙醇氧化成乙醛的乙醇脱氧酶和将乙醛冉氧化成醋酸的乙醛脱氢酶(ALDH)来完成的.在醋酸发酵过程中运用检测ADH的活力,确定菌株的发酵能力,保证生产顺利地进行.     

酿酒酵母产乙醇脱氢酶发酵条件的研究

选择了一株酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)As2.399,通过单因素和正交实验得到酿酒酵母产乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)的最优发酵条件。结果表明:产ADH的最优培养条件是温度为25℃、pH为5、通气量为250mL、接种量为7%,液体发酵培养中pH对ADH活性的影响最大。      

乙醇脱氢酶过表达对醋酸菌发酵产酸影响研究

目的:通过构建乙醇脱氢酶过表达基因工程菌株提高醋酸菌醋酸发酵产率。方法:PCR扩增沪酿1.01 Acetobacter pasteurianus CICC20001的乙醇脱氢酶亚基I(Alcohol dehydrogenase I,adh A)和乙醇脱氢酶亚基II(Cytochrome c subunit,adh B)基因,将其依次连接到质粒pBBR1MCS-4中,构建重组质粒pBBR-adh A-adh B,并将该重组质粒导入沪酿1.01,成功获得过表达乙醇脱氢酶的基因工程菌,并对基因工程菌与原始菌的微观形态以及发酵特性进行对比分析。结果:乙醇脱氢酶过表达基因工程菌的醋酸发酵产率和酒精耐受性都有所提高。结论:乙醇脱氢酶的过表达不仅提高了醋酸菌的产酸率,其酒精耐受性也有显著提高。     

响应面设计优化醋酸杆菌产乙醇脱氢酶发酵培养基

利用响应面分析法优化醋酸杆菌产乙醇脱氢酶培养基。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken中心组合试验设计,选定碳源、氮源和生长因子3个因素为响应因子,以乙醇脱氢酶的酶活为响应值建立二次回归方程,相关系数R^2=0.9652,在分析各个因素的显著性和交互作用后,确定了醋酸杆菌产乙醇脱氢酶最优的培养基,即碳源15.1 g/L、氮源7.0 g/L、生长因子272.5 mL/L,在此条件下,乙醇脱氢酶活力理论响应值为0.352 U/mL,验证值为0.349 U/mL。     

基于正交设计与人工神经网络模型的醋酸菌A3菌株醋酸发酵条件优化

以甘肃传统食醋酿造过程中分离得到的1株优势产酸醋酸菌A3为出发菌株,采用正交设计与人工神经网络模型相结合的方法优化其发酵条件以提高产酸量.用正交实验中的因素水平组合作为ANN的输入变量,用产酸量作为输出变量,正交实验数据作为建立BP网络模型的训练样本,另外两组实验(17号、18号)用于检验模型的泛化能力,并运用建立好的人工神经网络模型在正交实验分析基础上寻找最佳发酵条件.实验结果表明,该菌株A3醋酸发酵最佳条件为:初始乙醇浓度4.2％ (v/v)、发酵温度30℃、起始pH6.4、发酵周期8d,在此条件下的产酸量明显高于正交实验中的最高产酸量,达到4.3086g/100mL.     

酵母菌醋酸菌混菌发酵高产醋酸工艺研究

以葡萄糖为底物,利用酵母菌和醋酸菌混合发酵生产醋酸,通过单因素试验筛选了最佳醋酸生产工艺条件。试验结果表明:pH值为5.5,醋酸菌种龄48h,接种间隔0h,醋酸菌接种量6%,酵母菌接种量0.15%,装液量50mL/250mL,发酵温度30℃,初始还原糖含量18%为最优工艺条件,在此工艺条件下醋酸的产量可达到10.09g/100mL,糖转化率达到90%。     

基于正交设计与人工神经网络模型的醋酸菌A3菌株醋酸发酵条件优化

以甘肃传统食醋酿造过程中分离得到的1株优势产酸醋酸菌A3为出发菌株,采用正交设计与人工神经网络模型相结合的方法优化其发酵条件以提高产酸量。用正交实验中的因素水平组合作为ANN的输入变量,用产酸量作为输出变量,正交实验数据作为建立BP网络模型的训练样本,另外两组实验(17号、18号)用于检验模型的泛化能力,并运用建立好的人工神经网络模型在正交实验分析基础上寻找最佳发酵条件。实验结果表明,该菌株A3醋酸发酵最佳条件为:初始乙醇浓度4.2%(v/v)、发酵温度30℃、起始pH6.4、发酵周期8d,在此条件下的产酸量明显高于正交实验中的最高产酸量,达到4.3086g/100mL。      

产高醋酸菌的筛选及小型Frings醋酸发酵实验

要生产高浓度醋，应筛选出耐高酸的菌株，本文介绍一种从酿造食醋中筛选高酸菌株的方法，并对其进行小型Frings罐的液态深层发酵实验。     

热带醋酸杆菌B104发酵条件的优化研究

从自然发酵的苹果醋醪中筛选鉴定得到1株热带醋酸杆菌（Acetobacter tropicalis）B104,为进一步提高这株热带醋酸杆菌的产酸能力,对其培养条件和培养基成分进行了优化。结果表明,最佳培养条件和培养基组成为接种量4.0%,培养温度30 ℃,摇床转速120 r/min,培养基初始pH值为5.5,10.0 g/L葡萄糖和体积分数为5.0%的无水乙醇为碳源,20.0 g/L酵母膏为氮源。在此条件下培养12 d,该菌株产酸量达到55.4 g/L,是优化前的1.5倍。     

海洋源低温微生物产苹果酸脱氢酶发酵条件优化

苹果酸脱氢酶（MDH）是参与生物三羧酸循环（TCA）的关键酶,广泛用于临床肝脏相关疾病的诊断,并在生物制药、化工检测等领域具有极大的市场需求。该研究以墓画大洋芽孢杆菌（Oceanobacillus picturae）XJH-11为苹果酸脱氢酶（MDH）产生菌,基于单 因素试验,通过Plackett-Burman响应面试验并结合Box-Behnken试验设计对发酵条件进行响应面优化。结果表明,菌株XJH-11产MDH 的发酵培养基为葡萄糖10g/L、酵母膏20g/L、硫酸镁0.1g/L、初始pH值8.0,最佳发酵条件为发酵温度27℃、摇床转速150r/min、接种量5%、装液量125mL/500 mL。在此优化条件下,MDH酶活为43.67U/mL,比优化前提高了197.87%。     

醋化醋杆菌产乙醇脱氢酶发酵培养基的优化

采用单因素及正交试验对醋化醋杆菌产乙醇脱氢酶的发酵培养基进行优化,以期提高菌株产乙醇脱氢酶的水平。结果表明,培养基最优配方为:葡萄糖1%,酵母浸膏2%,乙醇3%,MgSO40.05%,KH2PO40.45%。在此优化条件下,菌株培养3 d产酶达到最大,为0.423 U/mL。     

巴斯德醋酸杆菌AC2005乙醇脱氢酶基因克隆与蛋白序列分析

以具有优良醋酸发酵性能的巴斯德醋酸杆菌AC2005基因组DNA为模板,利用PCR的方法分别克隆了编码乙醇脱氢酶亚基Ⅰ和乙醇脱氢酶亚基Ⅱ的基因adhA和adhB。序列分析表明,adhA与GenBank已报道的序列（accessio nnumber：D13893.1）具有94%的同源性,氨基酸序列同源性达98%;adhB与GenBank已报道的序列（accession number：D13893.1）同源性为93%,氨基酸序列同源性达97%。利用TMHMM 2.0软件,对乙醇脱氢酶跨膜结构进行了分析,发现乙醇脱氢酶亚基Ⅰ和乙醇脱氢酶亚基II均为膜结合蛋白。利用Swiss-Model在线软件模拟了巴斯德醋酸杆菌AC2005乙醇脱氢酶亚基I的三维立体结构。该研究对该酶的结构和功能的进一步分析提供了基础。     

Quinoprotein alcohol dehydrogenase is involved in catabolic acetate production, while NAD-dependent alcohol dehydrogenase in ethanol assimilation in Acetobacter pasteurianus SKU1108

The relationship between quinoprotein alcohol dehydrogenase (ADH) and NAD-dependent ADH was studied by constructing quinoprotein ADH-deficient mutants. Quinoprotein ADH-deficient mutants were successfully constructed from Acetobacter pasteurianus SKU1108 by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) mutagenesis and also by adhA gene disruption with a kanamycin cassette. The NTG mutant exhibited a complete loss of its acetate-producing ability and acetic acid resistance, while the disruptant also exhibited a loss of its acetic acid resistance but retained a weak ADH activity. The immunoblot analysis of quinoprotein ADH indicated that there are no appreciable ADH subunits in the membranes of both mutant strains. The NTG mutant grew better than the wild-type strain in ethanol-containing medium, despite the absence of quinoprotein ADH. In the mutant, the activities of two NAD-dependent ADHs, present in a small amount in the wild-type strain, markedly increased in the cytoplasm when cultured in a medium containing ethanol, concomitant to the increase in the activities of the key enzymes in TCA and glyoxylate cycles. The disruptant showed a poorer growth than the wild-type strain, producing a lower amount of acetic acid in ethanol culture, and it induced one of the two NAD-dependent ADHs and some of the acetate-assimilating enzymes induced in the NTG mutant. This study clearly showed that quinoprotein ADH is extensively involved in acetic acid production, while NAD-dependent ADH only in ethanol assimilation through the TCA and glyoxylate cycles in acetic acid bacteria. The differences between the NTG mutant and the disruptant are also discussed.     

优势醋酸菌株的筛选鉴定及乙醇脱氢酶活性研究

为满足苹果醋液态深层发酵的需要,从果渣、泥土中选育出生长良好、遗传稳定的较优醋酸菌株,实现高效率、高产量的苹果醋中试生产。经初筛、复筛、产酸试验、遗传稳定性试验、生理生化试验和16S rDNA序列分析鉴定,优选菌株Y010鉴定为巴氏醋酸杆菌（Acetobacter pasteurianus）。进一步研究该菌株在苹果醋发酵过程中乙醇脱氢酶（ADH）活性与产酸量、产酸速率的关系。结果表明：该菌株在醋酸发酵48 h时酶活较高,达到4.62 U/mL,产酸速率最大达到0.51 g/（L·h）,发酵120 h总酸含量最高达到53.12 g/L,其ADH酶活与产酸速率变化趋势一致。     

纳豆食品发酵条件的优化

纳豆是日本的传统发酵食品,由大豆经纳豆菌纯种发酵后制成。因其不但营养价值丰富,而且含有多种生物活性物质,使其成为保健食品开发的热点之一。该文以成品纳豆在我国发展的限制条件为依据,使纳豆口味能够为我国居民更好地接受,对其发酵条件的影响因素,即浸泡时间、蒸煮时间、接种量、发酵时间和温度进行了优化,得出纳豆的最佳发酵条件是:浸泡时间为18h,121℃蒸煮40min,接入10%培养12h的种子液,35℃发酵18h,于4℃冰箱后熟24h。     

蜡样芽孢杆菌产磷脂酶D发酵条件优化

通过单因素和正交试验,对蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）产磷脂酶D发酵条件进行了优化。结果表明,培养基最佳组成为卵黄10 g/L、蛋白胨15 g/L、牛肉粉2 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、氯化钠3 g/L;最佳发酵条件为：培养基初始pH8.0,接种量1.0%,于36 ℃,200 r/min培养8 h。在最适发酵条件下磷脂酶D酶活达4.21 U/mL。     

响应面法优化食醋酿造过程中酒精发酵工艺条件

对食醋酿造过程中的酒精发酵工艺进行研究,在单因素试验的基础上,应用Plackett-Burman试验设计筛选影响酒精发酵的重要参数,然后通过Box-Behnken设计优化酒精发酵工艺重要参数。 结果表明,影响发酵结束后醪液酒精度的重要参数是醪液初始 pH、发酵温度和发酵时间,最优发酵工艺条件为发酵温度34 ℃、醪液初始pH 4.2、发酵时间71 h,在此发酵条件下,酒精发酵结束后测得醪液的酒精度为9.93%vol,比优化前（7.12%vol）提高了39.5%。