基于PCR技术的水貂毛皮鉴别研究

本研究应用荧光PCR技术鉴定水貂毛皮。方法建立:市场采购32件鞣制动物毛皮,提取足够的DNA,应用荧光PCR方法检测水貂成分;其中21件水貂毛皮检测到水貂成分,11件其他动物毛皮均未检出水貂成分,方法特异性达到100%。方法验证:市场采购10件毛皮服装样品,比较宏观法与PCR法结果;其中宏观法鉴定结果与PCR法一致,宏观法无法确定水貂的4件样品均可通过PCR法明确。本方法可用于水貂毛皮的鉴定,并作为宏观法的有效补充和验证。     

PCR技术用于食品中原料肉物种鉴别的研究进展

本文对目前鉴别食品中原料肉物种的方法,即以PCR技术为基础的分子生物学方法进行了综述,并展望其应用前景.     

一种快速鉴别普通高温放线菌的特异PCR方法

普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris)具有产生多种耐热酶的能力,在淀粉深加工、皮革制造、高温堆肥生产以及分子生物学等领域中均有重要应用,应用常规技术鉴别费时费力,无法满足普通高温放线菌筛选及其应用研究的要求,有必要建立一套快速、准确的鉴别方法。该研究根据普通高温放线菌的gyr B基因分别设计了普通高温放线菌的特异性引物,建立了快速筛选普通高温放线菌的特异PCR方法。实验结果表明所设计的特异性引物对普通高温放线菌具有较高的特异性,可以快速鉴别普通高温放线菌,与传统的菌种鉴定方法相比,具有高效、灵敏、便捷及成本低廉等显著优点。     

基于PCR原理的常见肉品快速真伪鉴别技术探讨

肉品掺假作为欺骗消费者、违反市场规则的恶性手段,不仅会降低消费者对市场和商家的信任,而且某些恶劣的掺假肉类会危害消费者的健康.因此,肉品快速真伪鉴别技术具有非常重要的意义.     

运用PCR方法鉴别四种犬科动物的研究

建立了狐狸、貉子、水貂和家犬四种犬科动物的PCR鉴别方法。分别用狐狸、貉子、水貂和家犬的特异性引物对,以提取的狐狸、貉子、水貂、家犬的总DNA为模板进行PCR扩增,分别获得701、840、382、473bp的DNA片段,通过限制性内切酶,验证了该PCR扩增的特异性。结果表明,该方法可以有效鉴别出狐狸、貉子、水貂和家犬四种犬科动物。      

玛卡及其制品的PCR方法鉴别研究

本研究通过玛卡的defensin基因序列,设计了玛卡的特异性引物,建立了玛卡及其制品中玛卡源性成分检测的一种新方法。通过物种特异性测试,所设计的引物能够特异性扩增玛卡基因,并且,DNA浓度的检测灵敏度达到0.1 ng/μL以上,重量灵敏度达到0.1%以上。并结合芜菁源性成分基因检测方法对市场随机抽取的21份玛卡及其制品进行检测,21份样品均检出了玛卡源性成分而未检出芜菁源性成分。本研究所建立的PCR检测方法快速,准确,高效,适用于市场上玛卡及其制品真伪的快速鉴别。      

MassCode PCR技术

推出时间 2010年12月主要特点◇MassCode PCR技术结合了质量标记PCR引物和液质联用技术．前者用于扩增,后者用于快速鉴别沙门氏茵和其他食源性致病菌的血清型。     

一种转基因马铃薯PCR鉴别方法的建立

为建立一种鉴别转基因马铃薯的PCR方法,设计转基因马铃薯常用调控元件的特异性引物,以4种转基因马铃薯标准品系EH92-527-1、AV43-6-G7、AM04-1020、PH05-026-0048为模板进行单基因PCR和多重PCR扩增工艺方法研究。经琼脂糖凝胶电泳结果分析后,从中筛选出一组引物特异性较强,且无交叉污染或非特异性扩增现象的引物组合对。对9种已知转基因马铃薯样品进行多重PCR验证,均得到条带清晰且区分明显的目的条带。成功建立了能够快速、准确鉴别转基因马铃薯中多种调控元件的多重PCR与单基因PCR相结合的检测方法。     

基于多重PCR定性鉴别鹿肉掺假

该研究建立鹿肉掺假快速鉴定方法,可对掺假肉的种类进行定性鉴定。建立一种应用多重聚合酶链式反应技术鉴别梅花鹿肉中牛肉、猪肉的掺假鉴定方法。提取梅花鹿肉、牛肉、猪肉3个物种肉组织的基因组DNA,通过多重PCR对梅花鹿、牛、猪的特异性片段进行扩增,鉴别样品中是否含有梅花鹿、牛、猪3种动物源性成分。通过对特异性片段的PCR扩增,可同时将梅花鹿、牛、猪的肉与其他物种进行区分。该研究建立了一种基于多重PCR技术快速、准确鉴别梅花鹿中掺假牛、猪等其他肉类的方法,为解决食用药用性产品易掺假、难以鉴定的问题提供了一个新途径。     

高效液相色谱法检测液态奶中6种增香剂

建立高效液相色谱法检测液态奶中的6种增香剂,包括麦芽酚、乙基麦芽酚、香兰素、乙基香兰素、甲基香兰素、香豆素含量的分析方法。1.00 g液态奶样品经4%乙酸-乙腈溶液进行2次超声提取（5 m L+5 m L）,上清液在30℃下进行氮吹浓缩后,经过C18柱分离,用二极管阵列检测器进行检测,在检测波长为275 nm下进行扫描分析,外标法定量。结果显示,高效液相色谱法检测液态奶中6种增香剂的方法检出限为0.05～2 mg/kg,在相应的浓度范围内均具有良好的线性关系,当麦芽酚的添加水平为5、10、20μg/mL,乙基麦芽酚的添加水平为10、20、40μg/mL,香兰素、乙基香兰素、甲基香兰素和香豆素的添加水平为1、5、10μg/m L时,方法回收率为72.5%～93.9%,RSD在1.07%～3.50%(n=6)。该方法操作简便快速、准确、重现性好,适用于测定液态奶中的6种增香剂的含量。     

乳粉中阪琦肠杆菌的PCR检测

针对我国食品进出口和生产卫生的需要,使用以16 S rRNA基因为靶序列设计合成了一对可扩增282 bp的目的片段的引物,建立了检测阪琦肠杆菌的PCR方法.结果表明,阪琦肠杆菌PCR产物有282 bp的特异性片段,而金黄色葡萄球菌无此目的条带,证实该引物具有特异性.该方法快速、可靠、灵敏,特异性强,可用于食品中阪琦肠杆菌的检测.     

实时荧光聚合酶链式反应技术快速鉴定仿刺参

基于仿刺参线粒体COX1基因、NAD4基因分别设计特异性检测引物和探针,采用TaqMan探针实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术进行仿刺参的特异性鉴定检测。对21 种海参样品进行实时荧光PCR检测的特异性检验,并对每个样品做3 个平行实验,计算Ct平均值、标准偏差及变异系数,评估检测方法的重复性。结果表明：所设计的引物和探针可以特异性的鉴别仿刺参,方法的变异系数均小于2%,表明本研究设计的引物和探针具有良好的重复性。本研究所建立的快速检测仿刺参的方法快速、简便,既克服了传统海参鉴别方法的局限性,同时又结合了荧光PCR技术高效率、低污染的优点,为仿刺参真伪鉴别研究提供了有价值的参考意见。     

应用聚合酶链式反应和限制性内切酶酶切技术鉴别鳕鱼

大西洋鳕鱼（Gadus morhua）作为一种具有高营养价值的海洋经济鱼类,常常会被掺入劣质、价格低廉的阿拉斯加狭鳕鱼（Theragra chalcogramma）或白姑鱼（Argyrosomus argentatus）等。通过对大西洋鳕鱼、阿拉斯加狭鳕鱼和白姑鱼的线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ（cytochrome c oxidase subunit Ⅰ,COⅠ）基因序列进行比对分析,分别设计特异性引物。结果表明：通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增得到大西洋鳕鱼和阿拉斯加狭鳕鱼COⅠ 基因扩增产物大小为579 bp,白姑鱼为399 bp;进一步使用BstE Ⅱ限制性内切酶对大西洋鳕鱼和阿拉斯加狭鳕鱼COⅠ 基因的PCR产物进行酶切,大西洋鳕鱼不能被酶切,而阿拉斯加狭鳕鱼被酶切为长度分别为361、218 bp的2 个片段,从而有效区分大西洋鳕鱼、阿拉斯加狭鳕鱼和白姑鱼。     

G-四联体与聚合酶链式反应联用可视化检测沙门氏菌

建立对沙门氏菌的G-四联体与聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）联用可视化检测方法。以沙门氏菌属特异性基因invH为检测目标,设计5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物,通过PCR的特异性识别并扩增目标序列,获得大量含G-四联体的双链DNA,变性后与氯高铁血红素结合生成具有过氧化物酶活性的模拟酶（DNAzyme）,并催化H2O2与2,2’-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐由无色变为绿色,实现G-四联体与PCR联用对沙门氏菌的可视化检测。在优化的检测体系下,沙门氏菌基因组的质量浓度对数与421 nm处的吸光度具有良好的线性关系,其回归方程为y=0.129 9x＋0.217 9,R2=0.994 5,线性范围0.07～771.6 ng/μL,灵敏度为0.07 ng/μL。特异性分析表明：此方法适用于沙门氏菌属的检测,可成功应用于人工污染沙门氏菌牛奶的检测,检出限为1.2×102 CFU/mL。通过检测30 种市售样品,发现其结果与国标检测方法结果一致。本研究为食源性致病菌的检测提供了新的策略。     

Quantitative Determination of Vibrio parahaemolyticus by Polymerase Chain Reaction

Abstract

A method for quantitative detection of Vibrio parahaemolyticus, based on the polymerase chain reaction (PCR), was developed. Several lysis methods were compared and a recently developed lysis solution proved effective. The PCR amplification products were visualized after agarose gel electrophoresis with the nucleic acid stains GelStar and ethidium bromide. The relative fluorescent intensity of the DNA bands was analyzed using the NIH Image 1.61 software program. The GelStar stain was found to be more sensitive than ethidium bromide. The limit of detection by staining DNA bands with GelStar was 16 CFU per PCR and 48 with ethidium bromide. A log-linear relationship between the number of CFU per PCR reaction and the fluorescent intensity of the DNA bands was obtained and calibration curves were generated.     

Quantitative Determination of Vibrio parahaemolyticus by Polymerase Chain Reaction

A method for quantitative detection of Vibrio parahaemolyticus, based on the polymerase chain reaction (PCR), was developed. Several lysis methods were compared and a recently developed lysis solution proved effective. The PCR amplification products were visualized after agarose gel electrophoresis with the nucleic acid stains GelStar and ethidium bromide. The relative fluorescent intensity of the DNA bands was analyzed using the NIH Image 1.61 software program. The GelStar stain was found to be more sensitive than ethidium bromide. The limit of detection by staining DNA bands with GelStar was 16 CFU per PCR and 48 with ethidium bromide. A log-linear relationship between the number of CFU per PCR reaction and the fluorescent intensity of the DNA bands was obtained and calibration curves were generated.     

聚合酶链反应检测食品中的沙门氏菌

参考沙门氏菌侵袭性基因invA的序列,设计合成一对引物扩增其中一段序列,建立了特异性检测沙门氏菌的PCR方法。引物两端分别加了Bam HI和EcoR I切点,扩增片段大小为300bp。对收集的50个血清型123株沙门氏菌及7种23株非沙门氏菌进行PCR检测,结果仅沙门氏菌有300bp的扩增产物,显示了很强的特异性,为下一步克隆而设计的两个酶切位点对引物的特异性没有影响。经琼脂糖凝胶电泳,PCR的检出极限是10pg染色体DNA和10~2 cfu的细菌。将扩增产物经slot—blot与辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的invA基因探针杂交,经增强型化学发光反应(ECL)及化学发光自显影(CPD)检测,可提高检测的敏感性一个数量级,同时增加了特异性。为推广应用,本文试验了8种模拟食品样品对PCR反应的影响,结果除奶酪外,其余都得到较好扩增。对120份污水及食品样品进行检测,该检测系统检出70份阳性结果,检出率高于常规分离。初步应用显示,PCR检测方法敏感、特异、简便、快速,适合于食品卫生检验和临床标本检验的现场应用。     

聚合酶链式反应(PCR)技术鉴定啤酒腐败菌的最新进展

综述了PCR技术在啤酒腐败细菌鉴定方面的应用及最新进展 ;介绍了 3种PCR技术 ,特别讲述了利用这些技术对啤酒中乳酸菌的鉴定 ;并分析了PCR技术的局限性 ,对其应用前景进行了展望。     

食源性变形杆菌属PCR检测方法

建立一种快速、准确检测变形杆菌属的PCR方法.选择tuf基因作为靶基因设计引物,分别对3株变形杆菌属标准菌株、66株变形杆菌属样品分离株及12株非变形杆菌属菌株进行扩增试验,结果3株标准菌株和66株样品分离株均扩增出541 bp的特异性片断,12株非变形杆菌属菌株均未有特异性条带产生,呈阴性.灵敏度试验结果表明:该法检测限可低至1.08×103cfu/mL.该方法可用于食品中变形杆菌属的快速检测.     

利用PCR方法检测转BT基因水稻

应用PCR技术进行转基因水稻检测研究。本文以转基因水稻为材料，以聚合酶链式反应（PCR）方法为基础，选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术，针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒（CaMV35S）启动子、胭脂碱合成酶（NOS）终止子、和转入苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简写为Bt）基因水稻的CrylAc片段进行PCR检测，建立适合转BT基因水稻的检测方法。该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符。