嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和干酪乳杆菌的选择性计数

介绍了干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的选择性计数方法。LC培养基只能计数干酪乳杆菌,MRS-水杨素（或山梨醇）培养基可以计数嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌;而MRS培养基可以计数这3种益生菌,通过减法原则从嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和双歧杆菌混合物中单独计数。另外,MRS-NNLP培养基也可用于选择性计数双歧杆菌。     

益生性植物乳杆菌对切达干酪挥发性风味形成的影响

将分离自西藏灵菇的益生性植物乳杆菌1-2通过在杀菌乳中添加活菌数8.0、9.0（lg（CFU/mL））和在排乳清后添加于凝乳块8.0（lg（CFU/g））的方式分别加入到切达干酪中,考察植物乳杆菌活菌数量、添加方式和成熟时间对干酪挥发性风味物质组成的影响。利用固相微萃取和气相色谱-质谱联用技术检测出对照组干酪的风味物质26种,益生菌干酪组风味物质30种,添加植物乳杆菌1-2可产生乙苯、十二烷、己醇和丙酮4种挥发性风味物质。成熟时间对干酪风味的影响最大,随成熟时间的延长,益生菌干酪组中苯含量显著增加,而对照组干酪在成熟12周时才检测到苯。益生菌添加量和添加方式对干酪挥发性风味的影响相似,丁酸受益生菌活菌数和添加方式的影响最大,益生菌干酪组成熟12周时,丁酸含量最高达对照组的3.96倍（P＜0.05）。在杀菌乳中添加益生菌活菌数8.0（lg（CFU/mL））组和9.0（lg（CFU/mL））组干酪中挥发性风味物质含量有显著差异,但在杀菌乳中添加高活菌数9.0（lg（CFU/mL））和在排乳清后添加低活菌数8.0（lg（CFU/g））于凝乳块中对干酪挥发性风味的形成具有相似的影响。本研究结果为改进益生菌干酪的加工工艺和风味品质提供了实验依据。     

益生菌干酪的工艺研究

将植物乳杆菌MA2及Kefir发酵剂应用于益生菌干酪生产中,并对干酪的理化指标、感官进行了测定、评价,结果显示:成熟45 d后,相比于普通干酪,添加了植物乳杆菌MA2及Kefir的新型益生菌干酪的可溶性氮及不饱和脂肪酸的含量显著升高;并且具有良好的风味和质地,其中MA2干酪具有明显的酸奶味,提高了干酪的适口性,更加符合国人的口味习惯,具有良好的生产开发前景;而Kefir干酪具有Kefir发酵乳的特有风味,带有适宜的酒香味,可以被开发成个性化干酪,丰富了干酪的品种。     

不同发酵剂对切达干酪成熟期间品质的影响

应用乳酸乳球菌乳酸亚种LA、乳酸乳球菌乳脂亚种LC以及不同比例混合菌(LA∶LC=1∶1,LA∶LC=1∶2,LA∶LC=2∶1)制作切达干酪,研究这5种发酵剂在干酪成熟过程中对其质构、感官、风味物质形成及蛋白水解程度等方面的影响。结果表明:3种不同比例组合菌株发酵剂的蛋白水解能力适中,生产出的干酪口味清淡,其中按1∶1接种制作的干酪具有良好的成熟度、质地和风味,具有一定的商业应用价值,可将其用于切达干酪的生产。     

辅助发酵剂加速Provolone干酪成熟的研究

将瑞士乳杆菌6024作为辅助发酵剂添加到Provolone干酪中,加速Provolone干酪成熟,研究了其对干酪游离氨基酸、游离脂肪酸、质构特性、电镜、风味物质的影响。结果表明,瑞士乳杆菌6024作为辅助发酵剂对干酪中游离脂肪酸质量分数没有显著影响,但能显著增加干酪游离氨基酸质量分数,60 d时达到对照组90 d时的质量分数,此时干酪的质构特性、微观结构、风味物质与对照组90 d时差异不显著。由此可知,瑞士乳杆菌6024作为辅助发酵剂可加速Provolone干酪的成熟,缩短成熟时间。     

不同方法促熟干酪成熟期间微生物及氨基酸研究

以0、15、30、45、60、75、90 d促熟干酪中主要微生物（乳杆菌、乳球菌、肠球菌、微球菌）和游离氨
基酸含量为指标,研究添加复合处理发酵剂和中性蛋白酶促熟干酪成熟过程对游离氨基酸和微生物菌落数的影响。
结果表明,添加处理发酵剂和中性蛋白酶可增加干酪中游离氨基酸含量,添加处理发酵剂可不同程度降低干酪中微
生物菌落数,添加中性蛋白酶对干酪成熟过程中微生物影响不明显（P＞0.05）。     

干酪乳杆菌LC-15冻干发酵剂制备条件研究

在益生菌发酵乳制品的开发与应用研究中,益生菌发酵剂的制备具有重要的研究价值。对一株具有降低胆固醇作用的益生菌干酪乳杆菌LC-15（Lactobadllus casei LC-15）进行冻干发酵剂制备研究。通过正交优化得到最佳冻干保护剂组合为：脱脂奶粉100g／L,甘油30mL／L,麦芽糊精100g／L,海藻糖150g／L,L-谷氨酸钠10g／L。将此冻干保护剂应用于干酪乳杆菌LC-15冷冻干燥,其存活率达到82．2％,活菌数达4．4×10^10g^-1。在此基础上,对冻干过程中干酪乳杆菌LC-15的预培养条件和预冻条件进行考察,得到的优化结果为：在37℃预培养60min后以-40℃预冻3h,存活率最高可达到84．8％,活菌数达4．9×10^10g^-1,凝乳时间为13h。     

地衣芽孢杆菌凝乳酶对切达干酪成熟过程中蛋白水解的影响

利用地衣芽孢杆菌凝乳酶制作切达干酪和切达干酪类似物,分析干酪成熟过程中各蛋白水解指标的变化规律,以揭示地衣芽孢杆菌凝乳酶对切达干酪成熟过程中蛋白水解的影响。结果表明,CDF组（添加地衣芽孢杆菌D3.11凝乳酶所制切达干酪）、CD3组（添加地衣芽孢杆菌D3.11凝乳酶但未添加发酵剂制成的干酪类似物）和CCF组（添加商品凝乳酶所制切达干酪）干酪蛋白含量、pH 4.6-可溶性氮、12%三氯乙酸-可溶性氮、5%磷钨酸-可溶性氮、总游离氨基酸含量均随着成熟时间延长呈显著增加趋势,并且成熟期间CDF组干酪均显著高于CCF组干酪（P＜0.05）;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明,CDF组干酪α-酪蛋白水解程度较大;pH 4.6-可溶性肽段分析表明,随着干酪的成熟,总肽含量呈先增加后下降趋势,但疏水性肽与亲水性肽的比值呈持续下降趋势,在成熟第6个月时,CDF组、CD3组和CCF组干酪疏水性肽与亲水性肽比值分别为2.668、2.822、3.788。主成分分析表明,3 组干酪的蛋白水解程度与成熟度呈正相关,与疏水性肽和亲水性肽的比值呈负相关。以上结果表明,利用地衣芽孢杆菌凝乳酶制作的干酪蛋白水解度更高,但其疏水性肽比例较小,研究结果可为地衣芽孢杆菌凝乳酶在干酪生产中的应用提供理论依据。     

不同发酵剂对半硬质干酪品质影响研究

利用筛选的一种单一菌株(乳酸乳球菌)和两种混合菌株(乳酸乳球菌干酪乳杆菌(1:1)、瑞士乳杆菌:干酪乳杆菌(1:1))制作发酵剂,然后用于加工半硬质干酪,通过测定成熟干酪的性能指标,研究它们对干酪品质的影响.结果表明,瑞士乳杆菌:干酪乳杆菌(1:1)制作的干酪感官评定值最高,且与另外两种菌株制作的干酪差异显著;结合其他性能指标,确定适于半硬质干酪加工的最佳发酵剂菌株为瑞士乳杆菌:干酪乳杆菌(1:1).     

干酪乳杆菌纯种发酵水苏糖合生元酸奶的菌种筛选与工艺

针对目前我国合生元功能性乳制品研发水平低,大多采用益生菌与传统酸奶菌混种发酵的现状,以分离自天然发酵食品、保健品和微生物制剂等的18株新型益生菌和3种商品化发酵剂中所含益生菌为试验菌株,以传统酸奶发酵菌株保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌为对照菌株,研究菌株发酵牛乳的凝乳时间、产酸能力、感官品质,分析菌株利用水苏糖的增殖效果,筛选能利用水苏糖作为益生元生产合生元酸奶的益生菌菌株;测定了菌株在纯牛乳基础培养基中的生长曲线;研究了益生元增殖培养基中水苏糖的最适添加量;优化了水苏糖合生元酸奶产品的发酵工艺条件;检测了0 d和贮藏21 d合生元酸奶产品的质量。结果表明：新型益生菌干酪乳杆菌07-211具有发酵牛乳的能力,可利用水苏糖进行显著增殖,活菌数由3.19×108 CFU/mL增至2.05×109 CFU/mL;益生元增殖培养基中水苏糖的最适添加量为0.8%;干酪乳杆菌07-211纯种发酵水苏糖合生元酸奶的最佳工艺条件是：接种量3%,蔗糖添加量4%,发酵温度42 ℃,合生元酸奶凝乳时间4.15 h,pH 4.65,滴定酸度64.27 °T,活菌数3.96×109 CFU/mL,感官品评得分8.78分（10分制）。其中,0 d和贮藏21 d的合生元酸奶的质量均优于国标。本研究结果为工业化生产干酪乳杆菌纯种发酵水苏糖合生元酸奶产品提供理论依据,也为其它功能性合生元乳制品的研发提供借鉴。     

Viability of commercial probiotic cultures (L. acidophilus, Bifidobacterium sp., L. casei, L. paracasei and L. rhamnosus) in cheddar cheese

Six batches of cheddar cheese were manufactured containing different combinations of commercially available probiotic cultures from three suppliers. Duplicate cheeses contained the organisms of each supplier, a Bifidobacterium spp. (each supplier), a Lactobacillus acidophilus (2 suppliers), and either Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, or Lactobacillus rhamnosus. Using selective media, the different strains were assessed for viability during cheddar cheese maturation over 32 weeks. The Bifidobacterium sp. remained at high numbers with the three strains being present in cheese at 4 x 10(7), 1.4 x 10(8), and 5 x 10(8) CFU/g after 32 weeks. Similarly the L. casei (2 x 10(7) CFU/g), L. paracasei (1.6 x 10(7) CFU/g), and L. rhamnosus (9 x 10(8) CFU/g) strains survived well; however, the L. acidophilus strains performed poorly with both decreasing in a similar manner to be present at 3.6 x 10(3) CFU/g and 4.9 x 10(3) CFU/g after 32 weeks. This study indicates that cheddar cheese is a good vehicle for a variety of commercial probiotics but survival of L. acidophilus strains will need to be improved.     

PCR-DGGE分析东北传统发酵酸菜中乳酸菌多样性

以传统自然发酵的酸菜为研究对象,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（polymerase chain reactiondenaturedgradient gel electrophoresis,PCR-DGGE）技术监测酸菜发酵过程中细菌的动态变化,计算不同发酵时间细菌的多样性指数,并对图谱特异性条带进行克隆、测序、构建系统发育树。结果表明：酸菜发酵第40天多样性指数达最高值,说明此时细菌种群多样性最高;发酵过程中含丰富的乳酸菌,主要的优势菌群为乳杆菌属,包括植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、短乳杆菌、干酪乳杆菌、棒状乳杆菌、戊糖乳杆菌、唾液乳杆菌以及Iwatensis乳杆菌。其中发酵前期的优势菌群为乳酸乳球菌和戊糖乳杆菌,而植物乳杆菌为发酵中后期的优势菌种。     

Microbiological study of semi-hard goat's milk cheese (Majorero)

The development of microbial flora in industrially produced semi-hard cheese made from pasteurized goat's milk was studied during manufacture and over a 90-day ripening period.
Estimates of total count, streptococci, lactobacilli, leuconostocs, coliforms, micrococci and staphylococci, Staphylococcus aureus and yeasts and moulds were carried out at various stages of the ripening process; streptococci and lactobacilli were identified by species.
Initially, the total count increased rapidly, primarily as a result of the growth of mesophilic lactic streptococci mainly Streptococcus lactis and Strep, cremoris. Subsequently, both these counts stabilized or decreased. Lactobacilli increased, and by the end of the ripening period were the predominant microorganisms. Most common were Lactobacillus casei var. casei. , especially at the end of storage; L. casei var. rhamnosus , L. casei var. plantarum and L. cellobiosus were also isolated. Leuconostocs were not found in any of the cheeses, and hence no eye formation took place. Coliforms, enterococci, yeasts and moulds remained below 10²–10³ c.f.u. g⁻¹. Maximum levels of micrococci and staphylococci were found after 15–30 days of ripening and decreased gradually towards the end of the ripening period. Neither the milk curd, nor cheese contained Staph. aureus.     

产细菌素乳酸菌的筛选及对农家干酪保质期的影响

从实验室保存的7 株乳酸菌中,经分离纯化,以金黄色葡萄球菌为指示菌,筛选获得1 株高产细菌素的菌株KLDS 1.0338,排除有机酸和过氧化氢的干扰以及蛋白酶敏感性实验,确定抑菌作用是由细菌素产生的。通过菌株形态学分析,生理生化及16S rDNA分析鉴定菌株KLDS 1.0338为干酪乳杆菌ATCC 334。进一步利用该菌株制作农家干酪,考察4 ℃贮藏期间干酪的变化,添加KLDS 1.0338干酪乳杆菌的实验组抑菌活性显著大于未添加KLDS 1.0338干酪乳杆菌组（P＜0.01）,实验组的pH值下降平缓,可以有效延长农家干酪的货架期,并保持产品原有的色泽、风味、质构等感官特性。     

处理发酵剂对促熟干酪中生物胺和游离氨基酸的影响

以0、30、60、90 d促熟干酪中生物胺（组胺、色胺、苯乙胺、尸胺、酪胺）和游离氨基酸含量为指标,研究了添加复合处理发酵剂对干酪产生游离氨基酸和生物胺量的影响。结果表明：不同处理发酵剂添加量对各种生物胺产生的影响不同;添加处理发酵剂干酪中生物胺和游离氨基酸含量增加,其含量随着复合处理发酵剂添加量增加而增加。     

Antioxidant activity of Cheddar cheeses at different stages of ripening

The aim of the study was to evaluate the changes in the antioxidant properties of Cheddar cheese at different stages of ripening using different assays: 2, 2'-azinobis (3 ethyl benzothiazoline)-6-sulphonic acid, 2, 2-diphenyl 1, picryl hydrazyl and superoxide radical scavenging activity. Cheddar cheese was prepared with Lactobacillus casei ssp. casei 300 and Lactobacillus paracasei ssp. paracasei 22 and without adjunct cultures. The antioxidant activity of water-soluble extracts of Cheddar cheese was dependent on the ripening period. The changes in the antioxidant activity were related to the rate of formation of soluble peptides (proteolysis) in all the samples of cheeses up to fourth month of ripening.     

Cheddar干酪附属发酵剂筛选及其应用

为了筛选能够促进Cheddar干酪成熟,从泡菜、腐乳及不同产地的Cheddar中筛选具有高肽酶活力和自溶度的乳杆菌作为Ched-dar干酪附属发酵剂,并应用于Cheddar干酪的制作中.结果表明,从美国Cheddar干酪中筛选出1株Lactobacillus plantarum OD具有较高的肽酶活力和自溶度,运用于Cheddar千酪的制作中能显著提高其游离氨基酸浓度,改善其风味,有利于加快干酪的成熟.     

酪蛋白降解对牦牛乳硬质干酪苦味的影响

针对牦牛乳硬质干酪的苦味缺陷,分别以小牛皱胃酶、微生物凝乳酶和木瓜蛋白酶制作的牦牛乳硬质干酪为研究对象,利用尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳,研究牦牛乳硬质干酪pH 4.6水不溶性酪蛋白的降解程度,且对成熟过程中的牦牛乳硬质干酪苦味进行感官评价,探究牦牛乳硬质干酪pH 4.6水不溶性酪蛋白降解对其苦味的影响。结果表明：牦牛乳硬质干酪在成熟期间酪蛋白发生了明显的降解,且αs-酪蛋白均比β-酪蛋白降解速率快。经尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,发现木瓜蛋白酶制作的牦牛乳硬质干酪pH 4.6水不溶性酪蛋白在Pre-αs-酪蛋白区域有较强的蛋白带。木瓜蛋白酶制作的牦牛乳硬质干酪pH 4.6水不溶性酪蛋白中αs-酪蛋白和β-酪蛋白降解程度均显著或极显著高于微生物凝乳酶和小牛皱胃酶制作的牦牛乳硬质干酪（P＜0.05或P＜0.01）,木瓜蛋白酶制作的牦牛乳硬质干酪的苦味值极显著高于微生物凝乳酶和小牛皱胃酶制作的牦牛乳硬质干酪的苦味值（P＜0.01）,通过主成分分析得出3 种凝乳酶制作牦牛乳硬质干酪的苦味值和未降解β-酪蛋白和αs-酪蛋白含量成极显著负相关。这为控制牦牛乳硬质干酪品质提供了理论参考。     

PCR-DGGE法分析西藏传统发酵乳制品中乳酸菌的多样性

目的：运用聚合酶链式反应和变性梯度凝胶电泳（polymerase chain reaction- denatured gradient gelelectrophoresis,PCR-DGGE）技术分析西藏传统发酵乳制品中乳酸菌的生物多样性。方法：从西藏8个牧区采集19份样品,提取样品总DNA,用巢式和降落PCR扩增16S rRNA的V3区段,对扩增产物做变性梯度凝胶电泳,用NTsys 2.10e软件分析条带的相似性,切胶回收条带并测序,鉴定菌种并构建系统进化树、分析优势菌种。结果：19份样品中的乳酸菌菌群组成包括Lactobacillus paracasei、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus crispatus、Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus buchneri、Lactococcus raffinolactis、Leuconostocmesenteroide、Lactobacillus plantarum、Pediococcus pentosaceus、Lactococcus lactis、Streptococcus thermophilus。综合样品和牧区的乳酸菌分布情况,确定Lactobacillus delbrueckii为优势菌种。结论：PCR-DGGE技术能够有效分析西藏地区发酵乳制品中乳酸菌的多样性。     

Effects of Mentha longifolia L. essential oil on viability and cellular ultrastructure of Lactobacillus casei during ripening of probiotic Feta cheese

The effects of Mentha longifolia L. essential oil during ripening and storage probiotic Feta cheese were studied, in relation to viability and cellular ultrastructure of Lactobacillus casei. The addition of the essential oil in the concentrations from 0.0 to 0.03% was trialled: the 0.03% treatment resulted in the highest viability of L. casei and the lowest pH value compared with other treatments (P < 0.05). Electron microscopy showed that essential oil caused no harm to L. casei. This study demonstrated the favourable effects of M. longifolia on optimal maintenance of L. casei at the end of cheese storage period.