硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞及肿瘤细胞内游离Ca2+的影响

目的：研究硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞、SGC7901胃癌细胞及海拉细胞（Hela cells）内游离Ca2+的影响。方法：分离制备小鼠腹腔巨噬细胞,利用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM及激光共聚显微镜测定加药后10 min细胞内Ca2+浓度的变化。结果：添加硒化多糖后,巨噬细胞内Ca2+浓度缓慢升高,而胃癌细胞与Hela细胞内Ca2+水平均有不同程度的下降。结论：通过对乳酸菌胞外多糖进行硒化修饰可增强其刺激巨噬细胞的能力,因而发挥其免疫功效。硒化多糖与肿瘤细胞表面受体结合后引起细胞内Ca2+内流的减少,提示硒化后的多糖可引起肿瘤细胞不同程
度的细胞凋亡。     

黑灵芝多糖对S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞cAMP/PKA、IP_3/Ca~(2+)及DAG/PKC信号通路的影响

目的:探讨黑灵芝多糖(polysaccharide from Ganoderma atrum,PSG-1)对S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)/Ca2+及甘油二酯(diacylglycerol,DAG)/蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路的影响。方法:将S-180细胞接种于BALB/c小鼠体内建立荷瘤小鼠模型,成模后收集腹腔巨噬细胞进行体外培养,用不同浓度的PSG-1干预;ELISA法分别检测巨噬细胞培养上清液中的IP3、DAG和AMP含量;流式细胞仪测定细胞内Ca2+含量;Western blotting测定细胞PKA及PKC蛋白表达。结果:PSG-1在20~160μg/mL质量浓度范围能促进S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞产生cAMP、IP3和DAG,同时能增加细胞内Ca2+含量,并显著增强PKA及PKC蛋白表达量。结论:PSG-1能有效激活S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞cAMP/PKA、IP3/Ca2+及DAG/PKC信号通路。由此推测,PSG-1可能通过cAMP/PKA、IP3/Ca2+及DAG/PKC信号通路促进S-180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤作用。     

阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用

利用巨噬细胞体外培养体系,研究阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用。无菌获得小鼠腹腔巨噬细胞,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;荧光探针标记和Griess反应分别检测细胞内外NO的含量,酶联免疫吸附法检测细胞内一氧化氮合成酶(NOS)、培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素12(IL-12)的含量。结果表明,与空白组相比,25~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著增强巨噬细胞的吞噬活性(p0.05),增加细胞因子IL-1(p0.05)和IL-12(p0.05)的分泌量;50~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著提高细胞NOS(p0.05)和NO(p0.05)的含量以及TNF-α的分泌量(p0.05)。因此,一定浓度阿魏侧耳胞外多糖对体外培养的小鼠巨噬细胞具有激活作用。     

硒化乳酸菌胞外多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞分泌NO、IL-4及IL-12的影响

目的:研究硒化乳酸菌胞外多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞分泌NO,IL-4及IL-12的影响。方法:分离制备了小鼠脾淋巴细胞,用Griess法检测NO含量,双抗体夹心酶联免疫法检测IL-4和IL-12含量。结果:当多糖质量浓度为400μg/mL时,硒化EPS对ConA刺激的T淋巴细胞NO分泌量高于EPS。培养4 h后上清液中NO浓度显著升高,培养8 h达到最高。硒化EPS可抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IL-4,400μg/mL硒化EPS对于ConA刺激的小鼠T淋巴细胞IL-12生成量影响最为显著。结论:硒化EPS在一定程度上影响小鼠脾淋巴细胞免疫功能,这可能是其免疫调控机理之一。     

乳酸菌胞外多糖硒化修饰及其抗氧化活性研究

探讨了乳酸菌胞外多糖硒化修饰的最佳工艺条件,以及硒化胞外多糖的抗氧化活性。通过单因素试验确定反应温度、反应时间、硒化剂添加量的取值范围,再用响应面设计法确定最佳硒化修饰条件。试验结果表明:反应温度、反应时间、硒化剂添加量显著影响乳酸菌胞外多糖硒化的程度,当反应温度50℃、反应时间13.5h、硒化剂添加量0.55mg时硒含量和硒转化率达到最大值。在此条件下,所得硒多糖硒含量169.228μg/g,硒转化率32.37%;硒化后的多糖总抗氧化能力及对羟自由基的清除能力显著增强,而对超氧阴离子自由基的清除能力变化不大。     

芦笋多糖对肿瘤小鼠红细胞离子通道活性的影响

目的:研究芦笋多糖对肿瘤小鼠红细胞离子通道活性的影响。方法:建立了肿瘤动物模型,分高、中、低剂量腹腔给予芦笋多糖7 d,采集并制备红细胞悬液,用试剂盒结合分光光度计测定肿瘤小鼠红细胞膜Na+,K+-ATPase、Ca2+,Mg2+-ATPase活性,采用Fluo-3/AM、MQAE、BCECF-AM荧光探针染色,使用激光共聚焦显微镜和荧光分光光度计分别测定小鼠红细胞内[Ca2+]、[CI-]、[H+]浓度的变化。结果:芦笋多糖能升高肿瘤小鼠红细胞膜Na+,K+-ATPase、Ca2+,Mg2+-ATPase活性,降低肿瘤小鼠红细胞内[Ca2+]浓度,增强红细胞阳离子通道转运活性。芦笋多糖能够降低肿瘤小鼠红细胞内[CI-]浓度,增强红细胞阴离子通道转运活性。芦笋多糖还能够降低肿瘤小鼠红细胞内的[H+]浓度,升高红细胞内pH,维持红细胞酸碱平衡。结论:芦笋多糖通过提高肿瘤小鼠红细胞膜离子通道的功能,稳定细胞内环境,从而有助于保护红细胞膜结构,维持红细胞发挥正常功能。     

鸡腿蘑多糖免疫功能的初步研究

对鸡腿蘑发酵液胞外多糖和胞内多糖进行分别提取,做其对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和过氧化物酶活性的影响的研究,发现具有一定的刺激作用。其中各不同剂量组的胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性有明显的增强作用,并且在实验剂量范围内呈随剂量增加而上升的趋势。另外,胞内多糖也有增强作用,但效果不明显,其中16mg/kg•d剂量组效果最好。胞内、外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞过氧化物物酶活性也都有增强作用,并且效果与剂量关系呈倒“U”型,其中胞内多糖8mg/kg•d剂量组的增强作用最明显,胞外多糖16mg/kg•d剂量组最明显。     

硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考 察硒化低聚氨基多糖、Na2SeO3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红 法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子 （tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6及IL-10细胞因子的分泌量及其mRNA表达水平。 结果表明：硒质量浓度为100～1 000 μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2SeO3的硒 质量浓度超过200 μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性, 显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其mRNA表达水平,且效果比Na2SeO3处理组、低聚氨基多糖 处理组及Na2SeO3＋低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一 定的免疫调节作用。     

阿魏侧耳胞外多糖对荷瘤小鼠免疫能力的影响

通过皮下注射小鼠腹水瘤细胞构建荷瘤小鼠模型,灌胃法给药,采用血液分析仪、细胞培养、酶联免疫吸附等设备和方法测定血液中白细胞和淋巴细胞数量、腹腔巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞增殖能力、免疫器官指数、血浆中肿瘤坏死因子-α含量等来研究阿魏侧耳胞外多糖对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。结果显示：与荷瘤对照组相比,灌胃100、200 mg/kg的阿魏侧耳胞外多糖可显著降低荷瘤小鼠瘤体质量（P＜0.05）、提高血液中白细胞和淋巴细胞数量（P＜0.05）、促进脾淋巴细胞的增殖（P＜0.05）,增加免疫器官指数（P＜0.05）和血浆中肿瘤坏死因子-α的含量（P＜0.05）;灌胃200 mg/kg的阿魏侧耳胞外多糖可以显著增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力（P＜0.05）。因此,一定浓度的阿魏侧耳胞外多糖可提高荷瘤小鼠的免疫能力。     

蜜环菌对硒的富集及多糖中硒的分布

采用不同的硒浓度对蜜环菌进行了补硒培养,研究了蜜环菌对硒的积累和存胞内外多糖中的分布.结果表明:菌丝体硒含量与多糖硒含量随着硒处理浓度的增加而增加,但硒积累量达到20mg/L后趋于稳定,胞内多糖的硒积累量达到10mg/L后趋于稳定,而胞外多糖硒积累量在硒处理浓度超过5mg/L后仍有增长趋势.     

乳酸菌胞外多糖增强小鼠免疫功能的研究

研究乳酸菌胞外多糖在增强小鼠免疫功能方面的作用。将200 只昆明种小鼠(雌雄各半)随机分为5 组,分别灌喂生理盐水及高、低剂量的乳酸菌胞外多糖纯多糖和粗多糖15d,测定小鼠的细胞免疫、体液免疫及单核- 巨噬细胞的吞噬能力。结果表明,与NS 组相比,多糖组可以显著提高小鼠脾脏、胸腺的重量,提高小鼠单核- 吞噬细胞碳廓清的能力,降低小鼠的血清溶血值;粗多糖高剂量组可以使小鼠足跖肿胀度明显增加;纯多糖高剂量组和粗多糖高剂量组可以显著地提高T 淋巴细胞的增殖(p ＜ 0.05 或 p ＜ 0.01)。因此,乳酸菌胞外多糖具有增强小鼠免疫力的功能。     

滑子菇多糖的免疫活性及抗肿瘤作用

本文选用豚鼠血清为补体的模型进行体外抗补体实验的检测、采用体外对小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7的毒性试验、腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性能以及刺激巨噬细胞产生NO和H2O2的能力来研究滑子菇多糖的免疫活性;通过对人体前列腺癌22Rv.1细胞和人体肝癌Hep 2B细胞增殖的抑制作用试验对滑子菇多糖的抗肿瘤活性进行研究。实验显示,滑子菇多糖具有较好的抗补体活性,并且活性随多糖浓度增大而增强,多糖浓度达到12.5 mg/mL活性变化不大,多糖浓度在0.005-0.5 mg/mL范围在一定程度上能够促进巨噬细胞的增殖,能增强腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性能,并且促进巨噬细胞分泌NO和H2O2能力,表明滑子菇多糖具有较好的免疫活性;对人体前列腺癌细胞和人体肝癌细胞这两种癌细胞具有较强的抑制作用,并且活性与浓度呈现量效关系。     

虫草与富硒虫草多糖的体外抗氧化活性

采用Fenton法和邻苯三酚自氧化法测定虫草和富硒虫草多糖对.OH、O2-.和H2O2的清除率。结果表明:虫草多糖对O-2.和H2O2的清除能力依次为富硒虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞外多糖>虫草胞内多糖,而对.OH的清除能力依次为:富硒虫草胞外多糖>虫草胞外多糖>富硒虫草胞内多糖>虫草胞内多糖;当100mg/L多糖溶液添加量分别高于80、40、90μL时,各组多糖对.OH、O2-.和H2O2 3种自由基的抑制率均可高于50%。     

胶红酵母CICC 33013胞外多糖抑制肝癌细胞活性研究

采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法对胶红酵母胞外多糖组分(Rhodotorula mucilaginosa exo-polysaccharide2-A,REPS2-A)抑制10种常见癌细胞(血癌细胞K562、胃癌细胞BGC823、胃癌细胞SGC7901、胃癌细胞MKN28、肝癌细胞HepG2、BEL7402、Hep3B、胰腺癌细胞HS66T、乳腺癌细胞SKBR3、宫颈癌细胞HeLa)能力进行了筛选,结果证明胞外多糖组分REPS2-A对肝癌细胞HepG2有较好的抑制效果。通过胞外多糖组分REPS2-A对HepG2细胞抑制作用最佳浓度及时效性的研究,探讨胞外多糖组分REPS2-A对肝癌HepG2细胞的生长抑制及其作用机制。结果表明:当胞外多糖组分REPS2-A的浓度为1mg/mL时,肝癌细胞HepG2的抑制率高于IC50时的抑制率,抑制效果明显优于其他浓度。肝癌细胞HepG2的自发凋亡率为0.40%,当胞外多糖组分REPS2-A浓度为1mg/mL,分别处理24,48,72h,肝癌细胞HepG2的凋亡率依次为77.70%,88.18%,97.08%。胞外多糖组分REPS2-A能有效抑制肝癌细胞的增殖,使肝癌细胞HepG2阻滞发生在G1/S期,并诱导肝癌细胞HepG2凋亡,且存在剂量效应。     

乳酸菌富硒及产胞外多糖条件的研究

试验以实验室保藏的6株乳酸菌为研究对象,筛选出最佳试验条件下富硒率和产胞外多糖含量最优的菌株,以期为生产富硒调味品提供一定的理论依据.通过测定其生长曲线确定各菌的加硒时间,对比6株乳酸菌在不同亚硒酸钠质量浓度下的颜色变化、富硒率变化和胞外多糖含量变化,选定鼠李糖乳杆菌作为最佳试验菌株;通过测定鼠李糖乳杆菌在不同培养时间...     

不同衰老程度青菜电导率和4种主要离子溶出特性研究

目的:探究不同衰老程度青菜细胞内外主要离子的分布及水中溶出特性,从而了解青菜细胞膜对离子阻隔,及细胞壁对离子吸附的特性。方法:测定常温贮藏0,3,7 d的青菜外叶在流动水中电导率和钾(K+)、钙(Ca2+)、钠(Na+)和氯(Cl-)离子浓度变化。结果 :发现水浸泡2～19 min时,贮藏3 d青菜的电导率高于7 d和0 d青菜。此后,贮藏7 d青菜的电导率显著高于3 d青菜,后者显著高于0 d青菜。青菜K+、Cl-溶出量显著高于Na+和Ca2+,其对电导率变化贡献较大。青菜中Ca2+和Na+在开始20 s迅速溶出,且衰老7 d的青菜快速溶出持续到40 s,说明细胞外K+和Ca2+浓度比细胞内显著增高。贮藏3 d青菜的Ca2+含量显著低于0 d和7 d青菜,这可能与细胞壁吸附能力变化有关。结论:测定青菜相对电导率需要流动水浸泡30～60 min。青菜细胞外Ca2+和Na+浓度显著高于细胞内,细胞内外K+和Cl-浓度差异很小。测定Cl-和K+浓度能判断细胞膜完好程度,测定Ca2+浓度能反映细胞壁成分变化。     

香乳菇多糖对Hela细胞凋亡及对RAW264.7细胞免疫活性的影响

为研究香乳菇多糖(LC-1)的抗肿瘤和免疫调控活性,将人的宫颈癌Hela细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7体外培养,分别通过CCK-8法、流式细胞术和ELISA技术检测不同浓度LC-1对Hela细胞增殖和凋亡周期的影响,对RAW264.7细胞增殖、吞噬的影响,及对RAW264.7细胞分泌NO、IL-6和TNF-α的影响。结果表明:香乳菇多糖对体外培养的Hela细胞有明显的抑制作用,且影响Hela细胞的形态及凋亡周期,当LC-1浓度为10μg/mL时,Sub峰含量可达19.4%;同时,LC-1能调控巨噬细胞的免疫活性,当LC-1浓度为10μg/mL时,巨噬细胞增值率和吞噬活性分别为67.48%和87.09%,亦能促进巨噬细胞从G0/G1期向G2期和S期转化,同时刺激巨噬细胞产生IL-6和TNF-α,且呈现出明显的剂量依赖性,但对NO生成没有明显的促进作用。综上,在体外试验中,香乳菇多糖LC-1能抑制宫颈癌Hela细胞生长,促进RAW264.7细胞增殖和吞噬活性,刺激巨噬细胞产生免疫因子。     

硒对蜜环菌的作用规律及其在多糖中的积累

采用不同硒浓度对蜜环菌进行了补硒培养,研究了硒对蜜环菌生长、蜜环菌多糖产率的影响以及蜜环菌对硒的积累。结果表明:浓度为10mg/L以下的硒能够促进蜜环菌的生长,超过该浓度之后,硒对蜜环菌的生长产生阻碍;在所设计的浓度范围内,硒能够促进蜜环菌胞内外多糖的合成和分泌。蜜环菌胞内外多糖中硒质量分数都随着硒处理浓度的增加而增加,但硒积累量变化趋势不尽相同。胞内多糖的硒积累量在硒处理浓度为10mg/L时后趋于稳定;胞外多糖硒积累量在硒处理浓度超过5mg/L后仍有增长趋势。     

盐胁迫对发菜胞外多糖抗肿瘤活性以及免疫活性的影响

对液体培养的发菜细胞进行盐胁迫处理,研究盐胁迫对发菜胞外多糖抗肿瘤活性以及免疫活性的影响。醇沉法提取0.1 mol/L Na Cl、0.3 mol/L Na Cl盐胁迫培养的发菜胞外多糖0.1M-YEPS、0.3 M-YEPS,研究其对人结肠癌细胞HT-29、Lo Vo增殖的抑制活性,以及对小鼠巨噬细胞RAW 264.7增殖、中性红吞噬能力和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力的影响。结果表明,相比于无盐胁迫的发菜胞外多糖(NEPS),0.1 M-YEPS、0.3 M-YEPS对肿瘤细胞的增殖抑制作用显著提高,并且呈剂量依赖性。此外,0.1 M-YEPS、0.3 M-YEPS能有效促进RAW 264.7细胞的增殖,增强巨噬细胞吞噬中性红能力,提高RAW 264.7细胞内的SOD活力。与NEPS和0.1 M-YEPS相比,0.3 M-YEPS对肿瘤细胞的抑制作用、对巨噬细胞的增殖作用、吞噬中性红能力以及SOD活力的提高更为显著。     

嗜热链球菌S131对巨噬细胞的免疫调节作用研究

该实验旨在研究嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)S131调节免疫力的功能，并对其提升免疫力的作用机制进行解析。首先，对菌株定殖肠道和产胞外多糖的能力进行评价；然后，通过细胞实验检测菌株对巨噬细胞RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)的增殖、吞噬及对其分泌细胞因子的影响。结果表明，嗜热链球菌S131具有较好的黏附能力，可以高产胞外多糖。其处理RAW264.7细胞后其相对增殖率和吞噬率分别为131.11%和115.13%,且可促细胞分泌肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和IL-12细胞因子。综上所述，嗜热链球菌S131可黏附于肠道，可高产胞外多糖，同时可激活巨噬细胞，引起生理性炎症反应，提高机体免疫，能够用于提升免疫力功能食品的开发。