离子交换层析法分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析初步分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽,采用离子交换层析对凝胶层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱液p H、离子强度、流速三个因素进行研究,确定了最佳分离条件:以p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液为A液、B液为含1mol/LNa Cl的p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液,洗脱流速为0.8m L/min。结果显示:离子交换层析分离得3个组分,其中组分1的活性最高,其IC50值为0.1012mg/m L;再利用凝胶层析将组分1进行脱盐,其峰2的IC50值达到0.0836mg/m L,脱盐率达到86.60%±0.5%。      

离子交换层析法分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析初步分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽,采用离子交换层析对凝胶层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱液p H、离子强度、流速三个因素进行研究,确定了最佳分离条件:以p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液为A液、B液为含1mol/LNa Cl的p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液,洗脱流速为0.8m L/min。结果显示:离子交换层析分离得3个组分,其中组分1的活性最高,其IC50值为0.1012mg/m L;再利用凝胶层析将组分1进行脱盐,其峰2的IC50值达到0.0836mg/m L,脱盐率达到86.60%±0.5%。     

凝胶层析法分离猪股骨降血压肽及其体外稳定性

将猪股骨酶解液超滤分离后,对分子质量小于5 kD的酶解滤液（IC50值为1.362 mg/mL）进行凝胶层析分离,研究洗脱液、流速、上样量3 个因素对猪股骨降血压肽分离纯化效果的影响。结果表明：以去离子水为洗脱液,流速0.6 mL/min,上样量体积分数1%时,能够得到最佳分离效果,其最高活性组分IC50值达到0.401 6 mg/mL。研究凝胶层析分离后抑制率最高的组分的稳定性,发现其有较好的耐热和耐酸碱、耐盐性,在pH 2～6中有良好的溶解性。     

猪皮胶原蛋白抗氧化肽的分离纯化及体外抗氧化活性研究

采用碱性蛋白酶对猪皮胶原蛋白进行酶解,制备抗氧化肽。为了得到抗氧化活性高且纯度高的抗氧化肽,本实验采用多种体外抗氧化评价体系研究超滤获得的各分子质量段猪皮胶原蛋白抗氧化肽的体外抗氧化活性;依次采用离子交换色谱、凝胶色谱对猪皮胶原蛋白酶解液进行分离纯化。结果显示:超滤分离获得5~10ku的抗氧化肽较其他分子量范围的抗氧化肽具有较好的抗氧化活性;采用离子交换色谱、凝胶色谱两种分离方法分步分离能达到较好的分离纯化效果,离子交换色谱分离得到7个组分,其中组分P1对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.85mg/mL时,清除率为46.30%,IC50值为1.24mg/mL;该组分经过凝胶色谱分离后得到2个组分,其中组分P1-B对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.9mg/mL时,清除率为49.43%,IC50值为0.98mg/mL。     

制备型反相高效液相色谱分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析、离子交换层析分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽单体,采用制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)对离子交换层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱条件的优化,确定了最佳分离条件:0~5min 0%~80%A;5~8min 80%~100%A;8~15min 80%~60%A;15~20min 60%~20%A。结果显示:第一步RP-HPLC分离得到三个组分,其中峰Z2的活性最高,其IC50值为0.0437mg/m L;组分Z2进行第二步RP-HPLC分离,其峰Z21的IC50值达到0.0352mg/m L,其纯度达到96.7%。通过分析Z21的氨基酸组成以及LC-MS的分离鉴定,确定其含有6种氨基酸(Glu、Ala、Val、Leu、Phe、Pro),其分子量为764.8。     

河蚌酶解降血压肽的初步分离及性质研究

以酶解河蚌多肽为原料,对其中的降血压肽进行初步分离及性质研究.采用凝胶Sephadex G-50对河蚌酶解多肽进行分离纯化,得到2个组分MPP1和MPP2,其分子质量分别为14 125 Da和1 271 Da.用高效液相色谱(HPLC)测定血管紧张素转化酶(ACE)抑制率,其半抑制浓度(IC50)分别为0.88 mg/mL和0.32 mg/mL.其中,组分MPP2具有明显的降血压作用.对氨基酸组成的分析表明,MPP2中谷氨酸(Glu)含量最高,即14.04 g/100g;疏水性氨基酸含量高达29.76 g/100g,与其较高的降血压活性密切相关.     

牦牛血抗氧化肽制备方法对比及分离纯化研究

为研究牦牛血抗氧化肽最佳制备方法,以牦牛血为原料,分别采用枯草芽孢杆菌发酵法、碱性蛋白酶解法、菌酶联合法制备3种牦牛血抗氧化肽,依次简写为BF、AP、BA。应用羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_2-)清除能力,脂质过氧化抑制能力、还原力4种体外抗氧化实验,对比3种牦牛血抗氧化肽的抗氧化活性。以超滤、凝胶层析法对制备的较高活性产物进行分离。结果表明:3种抗氧化肽活性大小为BABFAP,BA有最大的·O_2-清除能力、脂质过氧化抑制能力及还原力,表明制备牦牛血抗氧化肽的最佳制备方法为菌酶联合法;超滤分离菌酶联合制备产物获得分子量5 kD的抗氧化肽活性高于分子量10 kDa、介于5~10 kDa的抗氧化肽,对·OH的IC50值为1.62 mg/mL;该组分经凝胶层析分离后得到4个组分,其最高活性组分Ⅰ对·OH的IC50值达到0.72 mg/mL。     

猪骨免疫活性肽的分离纯化

为了从猪骨中分离纯化出免疫活性肽,使用超滤、sephadex G-25凝胶层析、SP-sephadex C-25离子交换层析等手段对鲜猪骨的Alcalase碱性蛋白酶的酶解液进行分离纯化,采用MTT法测定各分离产物对小鼠脾淋巴细胞的增殖活性。结果显示:猪骨酶解液经超滤分离获得的分子质量小于2 ku的组分对小鼠脾淋巴细胞增殖率最高;对分子质量小于2 ku的组分采用凝胶过滤层析,对层析后活性最高的组分再进行离子交换层析,最终得到的组分质量浓度为100μg/m L时,对小鼠脾淋巴细胞的增殖率为114.30%。     

制备型反相高效液相色谱分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析、离子交换层析分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽单体,采用制备型反相高效液相色谱（RP-HPLC）对离子交换层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱条件的优化,确定了最佳分离条件:0⁵min 0%⁸0%A;5⁸min 80%¹00%A;8¹5min 80%⁶0%A;15²0min 60%²0%A。结果显示:第一步RP-HPLC分离得到三个组分,其中峰Z2的活性最高,其IC50值为0.0437mg/m L;组分Z2进行第二步RP-HPLC分离,其峰Z21的IC50值达到0.0352mg/m L,其纯度达到96.7%。通过分析Z21的氨基酸组成以及LC-MS的分离鉴定,确定其含有6种氨基酸（Glu、Ala、Val、Leu、Phe、Pro）,其分子量为764.8。      

奶渣蛋白肽的分离纯化及其抗氧化活性研究

以牦牛奶渣为原料,采用贯筋藤蛋白酶酶解制备奶渣蛋白肽,通过超滤、Q-Sepharose FF凝胶层析进行分离纯化,并分别测定各分离组分的体外抗氧化活性值。结果表明:奶渣蛋白肽Q-Sepharose FF凝胶层析分离的最优工艺条件为NaCl洗脱浓度0.1 mol/L,上样量40 mg/mL,洗脱流速2.0 mL/min,共分离出A,B,C三个组分,其中组分A的抗氧化能力最强,对ABTS自由基清除率的IC_(50)为4.379 mg/mL,DPPH自由基的清除率IC_(50)为3.921 mg/mL,还原能力IC_(50)为1.196,羟自由基清除率IC_(50)为5.076 mg/mL。     

核桃蛋白ACE抑制肽分离纯化研究

核桃ACE抑制肽经超滤后,其ACE抑制率由76.58%增至78.43%,再经DA201-C大孔吸附树脂脱盐纯化后,脱盐率达到98.70%,ACE抑制率升高至80.73%;采用Sephadex G-15凝胶分离后,核桃ACE抑制肽被分为三个组分,其中活性最大的G2组分,其ACE抑制率达83.10%,且IC50为1.308 mg/mL,G2组分主要分布在500 Da¹80 Da,系为2180 Da,系为2⁴个氨基酸残基组成小肽。     

燕麦ACE 抑制肽的分离纯化及其活性研究

通过对3 种大孔吸附树脂的比较,选择DA201-C 树脂对燕麦ACE 抑制肽进行纯化。纯化后的燕麦肽产物的ACE 抑制率达到92.86%,利用HPLC 测得纯化后燕麦ACE 抑制肽的分子质量分布在240.10～1292.11D 之间,这部分物质在整个纯化产物中占99.82%。采用SephadexG-15 凝胶分离燕麦ACE 抑制肽得到D峰,其IC50 为0.103mg/mL,分子质量545D。采用大孔吸附树脂及凝胶层析法能够较好地分离纯化燕麦ACE 抑制肽。     

坛紫菜降血压活性肽的分离纯化及分子质量测定

用AS.1398 中性蛋白酶酶解制备坛紫菜(Porphyra haitanesis)ACE 抑制肽,并经超滤膜、Sephadex G-15 凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,纯化产物测定其氨基酸组成,并运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定分子质量。结果显示：坛紫菜酶解液经超滤分离获得分子质量小于2000D 的组分ACE 抑制活性最高,IC50 为0.73mg/mL;该组分进行Sephadex G-15 凝胶层析分离得6 个组分,组分E 的IC50 最小,为0.67mg/mL。组分E 经RP-HPLC 分离得峰6 对ACE 的抑制率最高,达到89.54%;峰6 再次过RP-HPLC,又洗出2 个蛋白峰,说明峰6 并不是单一物质,还需进行多次反复纯化。测定峰6 的氨基酸组成主要含有Tyr、Val 和Phe,同时采用MALDI-TOF-MS 分析发现有8 个主要的质子峰,信号最强的质子峰为m/z 861.17,有4 个峰聚集在m/z 860 左右,说明峰6 平均分子质量大约为860D,推算出紫菜降血压肽含有3 个Val、2 个Phe、1 个Tyr,N 端为Val,可能的排序顺序有18 种。     

三斑海马蛋白ACE抑制肽的制备及其二级结构的研究

以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。     

自然乳酸发酵猪肉蛋白质降解与血管紧张素转化酶抑制肽的分离纯化

对猪肉发酵过程中蛋白质及其降解产物进行分析。结果表明：猪肉在发酵过程中蛋白氮含量随发酵时间延长呈下降趋势,非蛋白氮和氨态氮含量随发酵时间的延长而增加,多肽氮含量呈先升高后降低趋势,在发酵20 d时达最大值（0.227%）;发酵20 d酸肉多肽具有最强的体外血管紧张素转化酶（angiotensin I-converting enzyme,ACE）抑制活性,ACE抑制率达74.35%,IC50为2.75 mg/mL;采用超滤、D101型大孔树脂、葡聚糖凝胶对发酵20 d的酸肉多肽进行分离纯化,分离得到的F3组分有较强的ACE抑制活性,IC50为0.90 mg/mL,肽含量为86.54%,氨基酸组成分析显示水解后增加最多的氨基酸是脯氨酸（7.08 倍）和酪氨酸（3.26 倍）,谷氨酸、组氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸和丙氨酸占全部肽中氨基酸总量的49.09%,构成肽的疏水性氨基酸、芳香族氨基酸和支链氨基酸分别占39.35%、10.69%和13.65%;反相高效液相色谱显示F3组分主要由9 个峰组成,有待进一步的纯化。     

麦胚降血糖肽的分离纯化及鉴定

建立麦胚降血糖肽的分离纯化方法及鉴定活性多肽的结构组成。采用胰蛋白酶酶解麦胚蛋白,得到降血糖多肽,并进行降血糖动物实验。超滤获得高活性组分,离子交换吸附实验选择最佳的树脂,并对麦胚降血糖肽进行离子交换吸附分离,SephadexG-25和SephadexG-15分离,再经过反相高效液相色谱（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）分离高活性成分。最后采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-electrospray ionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS）鉴定活性多肽的结构组成。结果显示酶解麦胚蛋白对α-葡萄糖苷酶的抑制性IC50为10.98?mg/mL,能够缓解糖尿病小鼠的症状。超滤获得分子质量小于5?kDa的高活性组分,IC50为1.60?mg/mL。732型阳离子交换树脂的分离效果最好,2.5%氨水的洗脱率为98.13%,通过动态离子交换吸附分离后,活性显著提高,IC50为0.30?mg/mL。通过SephadexG-25和SephadexG-15分离得到高活性组分,经RP-HPLC分离得到8?个组分（峰）,其中1号峰的活性和含量都最高,IC50为0.098?mg/mL。HPLC-ESI-MS结果显示m/z?274.45的丰度比较高,经离子碎片拼接,共有7?种多肽,其中二肽有1?种,三肽有6?种。本研究对于开发具有降血糖功效的新型功能性食品有一定的作用。     

不同干燥方法对乳源血管紧张素转化酶抑制肽活性的影响

用不同的干燥方法干燥富含血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽的酪蛋白水解物,研究对ACE活性抑制的影响。在研究过程中,采用喷雾干燥法、流化床干燥法和真空冷冻干燥法干燥富含ACE抑制肽的酪蛋白水解产物,以干燥产物的水分含量低于5%为指标,确定干燥条件,以干燥产物的ACE活性半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）值,优化干燥条件。并通过动物实验,评价不同干燥方法所得产物的降血压效果。结果显示,采用喷雾干燥法干燥水解产物优化条件为：进风温度190 ℃、出风温度75 ℃、进料量44 mL/min,其干燥产物的ACE活性抑制的IC50值为0.442 mg/mL;流化床干燥水解物的条件为：进风温度65 ℃、进料量180 mL、悬浮介质添加量30 g,其干燥产物ACE活性抑制的IC50值为0.294 mg/mL;真空冷冻干燥产物的ACE活性抑制的IC50值为0.275 mg/mL。动物实验结果显示,采用真空冷冻干燥方法所得干燥产物,最有利于ACE抑制肽活性的保留,其次是流化床干燥,而喷雾干燥产物的活性损失最大。因此,在富含ACE抑制肽水解产物干燥时,采用冷冻干燥方法较好。