亚硒酸钠在SGC-7901细胞生长中的抑制作用

目的：研究亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长的影响。方法：应用细胞培养和SRB实验探讨了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长曲线的影响：应用集落形成试验、分裂指数试验研究了亚硒酸钠对SGC-7901细胞集落形成和分裂指数的影响；应用流式细胞仪检测了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长周期的影响；应用电镜、TUNEL染色及流式细胞仪观察了亚硒酸钠诱导SGC-7901细胞凋亡的作用。结果：亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长曲线、集落形成、分裂指数有明显的抑制作用，其抑制作用与其作用浓度和作用时间呈正相关。流式细胞仪检测显示亚硒酸钠作用SGC-7901细胞24h后，细胞周期发生改变，G1期细胞百分率减少，S期细胞百分率增加，与对照组相比有显著性差异（p〈0．05）：电镜下，细胞核固缩，染色质凝集呈新月形紧贴于核膜周边，核膜扭曲；DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”；TUNEL染色法检测细胞凋亡指数在10．4％～33．4％。结论：亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长具有抑制作用，其抑制作用程度与其作用浓度和时间呈正相关：亚硒酸钠通过阻滞细胞S期抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡可能是其抑制SGC-7901细胞生长的机理之一。     

酶处理异槲皮苷对辣椒红素光稳定性的影响

目的考察酶处理异槲皮苷(enzymatically modified isoquercitrin,EMIQ)对辣椒红素光稳定性的影响。方法使用氙灯光照老化箱对pH 3、4和5(柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系)下的EMIQ和辣椒红素混合溶液进行光照实验(340 nm,0.4±0.1 W/m~2,(55±5)℃),检测光照4 h中连续取得样品的Lab值和OD464。根据计算得到的总色差△E*和色素分解率评价色素的光稳定性,通过250~800 nm的光谱扫描图分析EMIQ能作为辣椒红素护色剂的原因。结果在排除温度对辣椒红素的稳定性影响后,氙灯老化箱的光照实验表明光是引起辣椒红素褪色的主要原因,溶液p H对辣椒红素的稳定性影响不大,EMIQ能够提高辣椒红素的光稳定性,用量越高效果越好。结论 EMIQ不能对辣椒红素的热稳定性造成影响,但能够显著提高辣椒红素的光稳定性,与以辅色苷的形式提高花青素的光稳定性不同,EMIQ主要通过吸收UV-A对辣椒红素进行保护。     

RP-HPLC法测定桑叶中的芦丁和异槲皮苷含量

目的：建立HPLC法测定桑叶中芦丁、异槲皮苷含量的定量分析方法。方法：HPLC外标法。采用色谱柱：Agilent TC-C18柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相：乙腈．甲醇．水．磷酸（100：10：340：0．3,V／V）;检测波长365nm;流速1．0ml／min;进样量20u1;柱温：室温。结果：在上述色谱条件下,芦丁、异槲皮苷获良好分离,浓度分别在7．5～150μg／ml（R2=0．9995）、7．1～142μg／ml（R2=0．9998）范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98．79％、99．01％,RSD分别为3．37％、2．43％,重复性实验RSD分别为0．0133％和0．0214％。结论：该方法分离度好,简便快速,为桑叶生药及其制剂的质量控制提供可借鉴的分析方法。     

细香葱提取物对人胃癌细胞SGC7901抑制作用

通过四甲基偶氮唑蓝比色法和流式细胞术研究不同细香葱提取物对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用及其对细胞周期、凋亡率的影响。结果显示,细香葱抗胃癌活性成分主要集中在75%乙醇提取部位,同一区域不同品种细香葱抑制胃癌细胞增殖作用存在显著性差异(P0.05),其中3号细香葱75%乙醇提取物的抑制作用最强,其24、48、72 h时IC50值分别为(0.88±0.07)、(0.45±0.08)、(0.21±0.03)mg/m L;SGC7901细胞经1.0、2.0 mg/m L的细香葱75%乙醇提取物处理48 h后,S期细胞所占比例显著增多(P0.05),细香葱75%乙醇提取物阻碍人胃癌细胞SGC7901由S期向G2期的转化,将细胞周期阻滞于S期;同时,实验组细胞相比对照组凋亡率显著上升(P0.05),存在量效关系。综上,细香葱75%乙醇提取物能够阻滞人胃癌细胞SGC7901由S期向G2期转化、促进其凋亡并抑制细胞增殖,细香葱具有开发成为抗胃癌功能食品的潜力。     

响应面分析法优化黄蜀葵花中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素提取工艺的研究

采用响应面优化黄蜀葵花中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的提取工艺。在超声功率、提取时间、乙醇浓度、提取温度、料液比的单因素实验基础上,固定提取温度50℃、料液比0.1∶15 g/m L,利用响应面分析法优化,建立二次多项式回归方程模型,确定最佳提取工艺为:超声功率340 W、提取时间60 min、乙醇浓度为60%。经工艺验证,金丝桃苷得率为4.97 mg/g,异槲皮苷得率为4.84 mg/g、槲皮素得率为2.02 mg/g,与理论值的相对误差分别为2.5%、4.5%、6.9%。采用响应面设计分析得到最佳提取工艺条件具有较高的实用价值,可为工业化提取提供理论参考。      

水生蔬菜提取物抑制人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC7901细胞的增殖

为探究水生蔬菜不同部位提取物对人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC7901细胞增殖的影响。本研究对菱角、芡实、莲藕、水芋头、茭白、荸荠和慈姑等7种常见的水生蔬菜的不同部位进行醇提和水提获得15种醇提物、15种水提物。采用CCK-8法检测不同提取物对人肝癌HepG2、人胃癌SGC7901细胞增殖的影响。结果表明菱角壳醇提物、芡实壳醇提物及水提物对HepG2的增殖具有明显的抑制作用及剂量效应,其浓度在400 μg/mL时抑制率分别为70.20%、83.52%、71.89%,相同浓度下阳性药五氟尿嘧啶（5-Fu）的抑制率为73.19%。菱角壳醇提物及水提物、芡实壳醇提物与水提物、芡实肉醇提物、藕节醇提物和荸荠皮醇提物对SGC7901的增殖有较好的抑制作用及剂量效应,其浓度在400 μg/mL时抑制率分别为58.86%、46.79%、41.27%、67.11%、49.93%、57.3%、58.96%,相同浓度下阳性药五氟尿嘧啶（5-Fu）的抑制率为49.33%。Pearson相关性分析表明水生蔬菜提取物对肿瘤细胞增殖的影响与其黄酮、多酚的含量有关。     

芡实壳醇提物抑制人胃癌SGC7901细胞和人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡

为明确芡实壳醇提物对SGC7901及HepG2细胞体外抑制作用及机制。该研究采用75%乙醇对芡实壳超声提取,采用福林酚法测定醇提物总酚含量,采用CCK-8法检测醇提物对SGC7901和HepG2细胞的增殖作用抑制率并计算IC50值,使用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期、细胞线粒体膜电位及胞内钙离子浓度。结果表明,醇提物对SGC7901和HePG2细胞具有增殖抑制作用,浓度为200 μg/mL的醇提物作用细胞48 h后,抑制率分别为92.63%和72.40%。细胞周期检测表明,浓度为200~800 μg/mL的醇提物可使SGC7901细胞阻滞于G0/G1期;浓度为50~200 μg/mL的醇提物可使HepG2细胞阻滞于S期。细胞线粒体膜电位测定表明,醇提物可使SGC7901和HePG2细胞线粒体膜电位下降且具浓度依赖性,醇提物浓度为200 μg/mL时,细胞线粒体膜电位相较对照组分别下降21.92%和53.81%。细胞钙离子浓度测定表明,醇提物可使SGC7901和HePG2细胞内钙离子浓度升高且具浓度依赖性,醇提物浓度为200 μg/mL时,胞内钙离子浓度相较对照组分别上升21.85%和14.14%。实验表明芡实壳醇提物可抑制SGC7901和HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与细胞线粒体膜电位降低及胞内钙离子浓度升高有关。     

HPLC法同时测定甘薯叶中5种酚酸和异槲皮苷

咖啡酸、绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和异槲皮苷是甘薯叶中的主要活性成分,本研究建立高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）同时测定这6种成分的方法。通过对检测波长、色谱柱、洗脱溶剂、洗脱流速等参数优化得到的最佳分析条件为:ZORBAX SB-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）为分析柱,以0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B）为流动相,采用梯度洗脱:0～12 min,10%~25% B;12～18 min,25% B,流速0.8 mL/min,检测波长326 nm,柱温30 ℃。咖啡酸、绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和异槲皮苷的线性范围分别为0.25~25.0、0.5~50.0、5.0~100.0、10.0~200.0、5.0~100.0和0.5~50.0 μg/mL。该方法分析时间短（18 min）,线性度（R2≥0.998）、稳定性（RSD≤1.97%）、精密度（RSD≤1.56%）和加标回收率（95.14%~103.22%）好。对江西10个不同产地甘薯叶目标成分分析发现,宜春丰城的甘薯叶具有最高的总酚含量。     

HPLC法测定不同种源辣木叶花茎中异槲皮苷和新绿原酸的含量

采用高效液相色谱法同时测定不同种源辣木叶、花、茎中的异槲皮苷及新绿原酸的含量,并进行多重比较分析和聚类分析。结果表明,辣木叶花茎中均存在异槲皮苷及新绿原酸,2种活性成分含量分布特征均为:叶花茎(叶中含量显著高于花及茎)。异槲皮苷在辣木花(2.43 mg/g～0.70 mg/g)和茎(1.89 mg/g～0.64 mg/g)中的含量高于新绿原酸(分别为1.28 mg/g～0.69 mg/g、0.68 mg/g～0.26 mg/g),特别是在辣木茎中表现尤为明显。17份辣木样品依据异槲皮苷及新绿原酸的含量特征聚类为5种类群。不同来源地的辣木样品中,来源于古巴的YLM-3叶、花、茎3个部位异槲皮苷和新绿原酸含量均较高(异槲皮苷含量分别为5.94、1.61、1.92 mg/g,新绿原酸含量分别为5.28、1.06、0.49 mg/g),YLM-3的叶片可作为辣木产品开发及利用的理想材料。     

超高效液相色谱法测定山楂原料、提取物和相关食品中金丝桃苷和异槲皮苷的含量

目的 建立超高效液相色谱法测定山楂原料、提取物和相关食品中金丝桃苷和异槲皮苷的分析方法。方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18柱, 以甲酸乙腈-甲酸水为流动相进行梯度洗脱分离金丝桃苷和异槲皮苷, 在紫外检测波长360 nm下进行检测, 外标法定量。结果 金丝桃苷和异槲皮苷的检出限(limit of detections, LODs, S/N=3)均为2 mg/kg, 定量限(limit of quantifications, LOQs, S/N=10)均为5 mg/kg; 在0.5~10.0 mg/L的浓度范围内线性关系良好, 相关系数均为0.999; 在原料、提取物和相关食品中, 金丝桃苷和异槲皮苷的平均回收率分别为83.0%~108.0%和86.2%~105.0%, 相对标准偏差(relative standard deviations, RSDs)分别为1.6%~5.7%和1.1%~3.9%。结论 本方法操作简便、快速、分离度和准确度高, 可用于山楂原料、提取物和相关食品的质量控制。     

山楂原花青素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响。方法：体外培养SMMC-7721细胞,噻唑蓝法检测不同质量浓度山楂原花青素对细胞增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法观察细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达;检测每组细胞中过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、Na＋K＋-ATP酶活力和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果：山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2呈时间和质量浓度依赖性地显著抑制SMMC-7721细胞的增殖（P＜0.05）,促进细胞凋亡;与对照组相比,SMMC-7721细胞中SOD、CAT、GSH-Px、Na＋K＋-ATP酶活力降低,MDA含量升高;细胞凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-3、Bcl-2相关X蛋白表达量和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶片段化增加,Bcl-2表达量降低。结论：山楂原花青素可通过影响抗氧化酶活力和细胞凋亡相关蛋白来抑制SMMC-7721细胞增殖,促进细胞凋亡。     

灵芝多糖联合5-FU对人结肠癌HCT-116细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨灵芝多糖(GLP)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人结肠癌HCT-116细胞增殖抑制及凋亡的影响。方法：采用MTT法测定单独和联用GLP与5-FU对人结肠癌HCT-116细胞的协同抑制作用,应用联合指数法分析两药物之间相互作用,Hoechst33258荧光染色观察细胞的形态学改变,碘化吡啶(PI)标记流式细胞术(FCM)检测GLP联合5-FU对HCT-116细胞周期和凋亡抑制率的变化。结果：MTT法测定结果显示GLP和5-FU单独用药均能显著抑制HCT-116细胞增殖。GLP(＞659μg/mL)联用5-FU(＞1.6μg/mL)联用呈协同效应(CI＜1),与5-FU单独用药组相比有极显著差异(P＜0.01),并呈时间依赖性。给药48h后,Hoechst33258荧光染色可见典型的凋亡形态学特征。FCM检测凋亡显示两药联合作用24h后,5mg/mL GLP联合50μg/mL 5-FU的凋亡率为36.14%,高于5-FU(50μg/mL)单独用药组(26.07%);1.25mg/mL GLP联合12.5μg/mL 5-FU、2.5mg/mL GLP联合25μg/mL 5-FU、5mg/mL GLP联合50μg/mL 5-FU作用48h后,凋亡率分别为20.95%、32.87%、30.01%,均高于5-FU(50μg/mL)单独用药组(14.51%)。联合用药组可使HCT-116细胞阻滞于S期。结论：较高质量浓度的GLP与5-FU联用具有协同抑制人结肠癌细胞株HCT-116细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期作用。     

番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞生长抑制作用及其机理研究。方法:番茄红素及不同浓度番茄汁作用于人前列腺癌PC-3细胞48h;采用生长曲线及噻唑蓝(MTT)法检测番茄汁、番茄红素对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用,通过原位(缺口)末端标记法(TUNEL)法观察凋亡细胞的形态结构变化,流式细胞仪检测细胞凋亡峰。结果:番茄汁、番茄红素能显著抑制人前列腺癌PC-3细胞生长;TUNEL方法检测呈阳性;流式细胞仪分析图上出现典型的凋亡细胞峰。以上各指标中,番茄汁随着浓度增大其作用加强;低剂量组的作用虽比番茄红素组差,中剂量组的作用与番茄红素组相比无差别,高剂量组的作用比番茄红素组强。结论:番茄汁对抗人前列腺癌PC-3细胞的作用,除番茄红素外,可能还存在其他抗癌成分的交互作用。番茄汁、番茄红素对PC-3细胞生长抑制作用的机理可能与其诱导人前列腺癌PC-3细胞细胞凋亡有关。     

霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用

研究霍山石斛多糖对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,探讨多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因表达之间的相关性。胃癌细胞SGC-7901生长的MTT检测表明,霍山石斛总多糖(DHP)、阴离子交换色谱水洗组分(DHP-1)及0.05 mol/L盐洗组分(DHP-2)能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,并呈时间和剂量依赖性,其中以DHP-2效果最好。光学及激光共聚焦显微镜观察发现,DHP-2处理过的胃癌细胞形态固缩,凋亡显著。荧光定量RT-PCR技术检测表明,DHP-2不仅能明显下调原癌基因c-myc的表达,其表达仅为对照的42.34%,而且能显著提高抑癌基因野生型p53的表达,其表达比对照高1.04倍。结果表明:霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用与其组分、浓度及作用时间相关,其可能的作用机制是多糖通过下调c-myc基因和上调p53基因的表达来发挥抑制效果。     

玉米黄色素对人卵巢透明癌细胞ES-2侵袭、迁移、凋亡及周期的影响

从玉米蛋白粉中提取、纯化得到玉米黄色素,研究其对人卵巢透明癌细胞ES-2的侵袭、迁移、凋亡及周期的影响。MTT法检测玉米黄色素作用于MDA-MB-231、PC-3、ES-2和A549细胞后的细胞活性;分别通过transwell体外侵袭试验、transwell体外迁移试验、流式细胞术检测玉米黄色素干扰对人卵巢透明癌细胞ES-2的侵袭能力、迁移能力、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果显示,玉米黄色素对上述几种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,其中对ES-2影响最为显著。当给药浓度达到100μg/mL时,对细胞的侵袭和迁移抑制率分别为52.59%和55.76%;流式细胞术检测结果表明,玉米黄色素浓度增加至100μg/mL时,G1期、S期和G2期细胞分别为85.33%、11.64%、3.21%,更多的ES-2细胞被阻断在G1期,且细胞凋亡率增加到13.85%。综上所述,玉米黄色素能够诱导ES-2细胞发生凋亡,阻断细胞周期,并抑制细胞的侵袭和迁移。