烟草DNA的提取与SRAP反应体系的建立

以10个烟草栽培品种为试验材料,研究了烟草DNA的提取方法以及对建立烟草SRAP-PCR反应体系的影响因子设置梯度实验,筛选和建立可扩增多态性高、重复性好、带型清晰的最佳SRAP-PCR反应条件:在25μL的反应体系中,MgCl22.0mmol、dNTP200μmol,上下引物各30ng、DNA模板40ng、DNA聚合酶1.5U,扩增程序为:在94℃预变性5min,反应前5个循环在94℃1min,33℃1min,72℃1min条件下运行;随后的30个循环复性温度提高到53℃,最后72℃延伸5min。本文还讨论了不同分子标记在烟草中应用的优缺点以及SRAP分子标记在烟草上的应用前景,提出了应用SRAP分子标记构建烟草遗传图谱的可行性。      

新型植物油莎豆DNA提取与SRAP体系优化

以14个不同地理来源的油莎豆品系为实验材料,研究了油莎豆DNA快速提取方法;以SRAP反应体系中DNA模板量、Mg2＋浓度和引物浓度3个因子分别设置3个水平,共配制27个反应体系,对油莎豆SRAP反应体系进行优化。研究结果表明：改良CTAB法可获得较高质量的DNA,参试材料的A260/A280介于1.70～1.98;在27个SRAP反应体系（15μL）中,最优反应体系为DNA模板25ng、Mg2＋1.5mmol/L、引物浓度1μmol/L、dNTPs 0.3mmol/L和Taq酶1U,可扩增出清晰稳定的多态性条带。     

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的：比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法：对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果：市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取;基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取;基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取,该法提取的鲜叶DNA完整性最佳,更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论：基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。     

小麦表面微生物总DNA提取方法的比较与改进

对小麦表面微生物总DNA提取方法进行了探讨，从液氮冻融，裂解剂，蛋白酶K的加入，缓冲液等方面对SDS与SDS／CTAB两种方法加以改进。结果表明，改进后SDS法提取的DNA降解现象与纯度有很大改善，量也有所增加；SDS／CTAB法改进后浓度与提取率明显增加，纯度也较高。两种方法改进后提取的DNA分子量大小都集中在23kb左右，且不经纯化可直接扩增出16SrRNA基因。     

桑黄DNA提取及RAPD反应体系的优化

以桑黄菌丝体为实验材料,采用CTAB法与SDS法提取DNA,并对RAPD反应体系进行优化。结果表明,应用CTAB法提取的DNA纯度和完整性较好,在此方法上建立了桑黄RAPD反应最佳体系(25μL):模板DNA1.0μL,引物0.8μL,dNTPs0.6μL,Taq聚合酶0.3μL,Buffer2.5μL,ddH2O19.8μL,并通过正交实验验证了该反应体系的稳定性和通用性。PCR扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,40℃退火1min,72℃延伸1.5min,45个循环,72℃最终延伸5min。      

桑黄DNA提取及RAPD反应体系的优化

以桑黄菌丝体为实验材料,采用CTAB法与SDS法提取DNA,并对RAPD反应体系进行优化。结果表明,应用CTAB法提取的DNA纯度和完整性较好,在此方法上建立了桑黄RAPD反应最佳体系(25μL):模板DNA1.0μL,引物0.8μL,dNTPs0.6μL,Taq聚合酶0.3μL,Buffer2.5μL,ddH2O19.8μL,并通过正交实验验证了该反应体系的稳定性和通用性。PCR扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,40℃退火1min,72℃延伸1.5min,45个循环,72℃最终延伸5min。     

几种提取转基因木瓜DNA的方法比较

目的 比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果, 以提高转基因木瓜的检测准确率。方法 对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR, 同时对基因表达零件CaMV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR, 以检测提取DNA的质量。结果 分析电泳产物发现, SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求, 其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示, 3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论 比较3种提取方法及3种木瓜材料, 发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

蓖麻饼粕提取氨基酸及酸水解法优化初探

以蓖麻饼粕为原料,采用酸水解法降解其中的蛋白质提取氨基酸并对氨基酸的组分进行了比较和分析。探讨了硫酸浓度、回流时间、料液比、提取方式对氨基酸提取率的影响。结果表明:氨基酸提取的最佳工艺条件为硫酸浓度为4mol/L,回流时间为6h,料液比为1∶6,提取方式为抽滤,氨基酸的提取率为55.692%,其中谷氨酸含量最高为18.5%。     

超声波辅助提取蓖麻蛋白工艺条件优化

本文以蓖麻籽为原料,超声波辅助提取蓖麻蛋白。通过单因素试验和Box-Behnkens试验及响应面分析方法对提取工艺条件进行优化。结果表明;最优提取条件为:超声波时间22min、料液比1:67、pH值7.4和超声波功率160W,在此条件下蓖麻蛋白提取率84.06%。     

蓖麻饼粕提取氨基酸及酸水解法优化初探

以蓖麻饼粕为原料,采用酸水解法降解其中的蛋白质提取氨基酸并对氨基酸的组分进行了比较和分析。探讨了硫酸浓度、回流时间、料液比、提取方式对氨基酸提取率的影响。结果表明:氨基酸提取的最佳工艺条件为硫酸浓度为4mol/L,回流时间为6h,料液比为1∶6,提取方式为抽滤,氨基酸的提取率为55.692%,其中谷氨酸含量最高为18.5%。      

烟草AFLP分析体系的建立与优化

以10份烟草种质资源为试材,对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、MseⅠ/EcoRⅠ以及T4DNA连接酶的浓度、反应时间和反应温度、以及其反应体系的组成等影响因素进行了研究。建立了一种适于烟草AFLP银染技术的优化体系。该体系中各优化因素为模板DNA的用量为400 ng,酶切体系中MseⅠ和EcoRⅠ各加入4U,T4DNA连接酶加入2.8U,采用酶切与连接在同一体系中一步完成,其酶切连接温度为37℃,反应时间为7 h。并对预扩增、选择性扩增和银染的效果进行了检测,以引物E-ACT/M-CAC构建了烟草种质资源的AFLP指纹图谱,该图谱扩增带多,多态性强,且质量好。      

CTAB法提取苏铁基因组DNA的条件优化

采用单因素梯度试验结合正交实验的方法（CTAB法）,优化了苏铁类植物全基因组DNA提取工艺.研究表明：材料量对提取DNA的浓度、提取率和纯度的影响最为明显,但还没有达到显著水平;最佳工艺参数为：20 mg苏铁羽片,65℃水浴处理30 min,抽提后,加入800 μL无水乙醇和5μL饱和NaCl溶液,6 000 r/min离心4 min沉淀DNA;溶解再沉淀后的DNA,质量浓度可达0.241 3 g/L,提取率可达0.483%,｜OD260/OD280-1.8｜＜0.01,可以满足RAPD-PCR分子标记技术应用.     

蓖麻组织培养和植株再生的研究

建立了一种有效的蓖麻植株再生体系。以蓖麻成熟种子胚轴为外植体,在含6-BA（0．5mg／L）的MS培养基上每个外植体均能诱导出由若干不定芽组成的丛生芽,平均每个外植体可产生6．3个不定芽,健壮的不定芽经伸长、生根而发育成完整的再生植株并能全部移栽成活。本实验所用的3个蓖麻品种在产生不定芽的能力和数量上没有明显差异。利用该体系所诱导的不定芽具有生长健壮和易于生长发育等特点。该再生体系的建立为蓖麻遗传转化研究奠定了基础。     

动物肌肉组织DNA的提取方法及实时荧光定量PCR检测

以生鲜羊肉、猪肉、鸡肉、牛肉、鸭肉为实验材料,采用SDS法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和实时荧光定量PCR检测。结果表明,试剂盒法提取的基因组DNA在浓度和纯度方面均优于SDS法和异硫氰酸胍法。通过对三种提取方法建立的标准曲线进行比较,回归系数(R2)按照质量排序为:试剂盒法≥异硫氰酸胍法>SDS法,扩增效率按照质量排序为:试剂盒法>异硫氰酸胍法>SDS法。三种提取方法的羊源性成分灵敏度检测,最低检出限均为80 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.684%,小于异硫氰酸胍法0.734%和SDS法1.075%;猪源性成分灵敏度检测,SDS法的最低检出限为80 pg/μL,异硫氰酸胍法和试剂盒法的最低检出限均为16 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.092%,小于异硫氰酸胍法4.640%;鸡源性成分灵敏度检测,SDS法和异硫氰酸胍法的最低检出限均为3.2 pg/μL,试剂盒法的最低检出限为640 fg/μL,明显高于SDS法和异硫氰酸胍法。综上所述,试剂盒法提取的基因组DNA更有利于运用实时荧光定量PCR技术进行食物掺假和物种鉴别工作。      

提取鼠肠道内微生物基因组DNA的方法研究

通过改进鼠肠道微生物基因组DNA提取方法以期更全面地反映鼠肠道茵群的真实情况.采用CTAB和SDS结合的方法裂解细胞,同时改进了传统的酚/氯仿抽提方法,提取全过程控制在2 h以内.通过紫外分光光度计,细菌通用引物PCR,总菌群实时定量PCR,变性梯度凝胶电泳(DGGE)对改进方法及两种试剂盒法提取DNA的结果进行比较,评价了所建立的高效提取方法.与试剂盒相比,改进的方法DNA得率较高,简便快速,成本低廉.同时后续的PCR鉴定及DGGE菌群多样性分析显示,改进的方法可以更好地揭示鼠肠道菌群分布和特性.     

双孢蘑菇SRAP、ISSR、RAPD标记遗传多样性和菌群分类研究

通过PCR试验,筛选能扩增清晰稳定的DNA条带的53对SRAP引物、10条ISSR引物和56条RAPD引物。SRAP、ISSR和RAPD 3种DNA分子标记扩增位点的平均多态率分别为70.21%、78.33%、61.94%。SRAP、ISSR和RAPD扩增结果用0与1表示,共获得1 046个位点的42 840个数据。采用组间距离法和Jaccard相似性系数,应用SPSS 11.0 for Windows软件进行聚类分析,构建40个双孢蘑菇样品的遗传关系树状图。当组间距离值取16时,40个双孢蘑菇品种可分为6个类群;当组间距离值取13时,40个双孢蘑菇品种被分为9个类群。     

Efficacy of castor bean oil (Ricinus communis L.) against maize weevils (Sitophilus zeamais Mots.) in northwestern Ethiopia

The maize weevil, Sitophilus zeamais Mots. (Coleoptera: Curculionidae), undermines food security. The biocidal activity of castor bean oil (Ricinus communis L.) against S. zeamais, was studied at various doses at Dembecha, northwestern Ethiopia in 2013/14 (November–April). In the castor bean oil efficacy test, weevil mortality steadily increased with castor bean oil dose. According to the results of the ANOVA, number of dead weevils significantly varied between castor bean oil doses 1 h after treatment (F_{10, 21} = 117.6, p < 0.0001). Just 53% of the weevils were killed in one hour by applying 2 ml of the oil while doses higher than 2 ml killed greater than 85% of the weevils. Using Probit analysis, the LD₅₀ of using castor bean oil against maize weevils was calculated to be 2.04 ml. Therefore, 2 ml of castor bean oil was found sufficient to destroy 50% of the weevils. Higher doses of castor bean oil significantly reduced maize seed germination.     

动物肉制品基因组DNA的提取和纯化

以猪肉、牛肉和羊肉3种动物肉制品为原料,采用改良的SDS方法来提取其基因组DNA,细胞用TE(1%SDS)裂解后,用蛋白酶K进行消化,用RNase去除RNA,并用氯仿∶异戊醇(24∶1,v/v)抽提纯化,结果表明可以得到纯度较高,完整性较好的基因组DNA,满足实验和分析的要求。