二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L．）品种浙双758为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0．5—1．5mg／L2,4-D的MS培养基上预培养3d或7d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3mg／LBA和0．15mg／LNAA及添加或不添加2．5mg／LAgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96．1％,96．7％和96．7％。     

基因工程方法抗甜菜丛根病病毒育种的研究(Ⅰ)甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因转化甜菜及植株再生

采用含有甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白(BNYVV CP)基因的农杆菌, 分别以不同甜菜品系的叶柄、下胚轴及子叶为外植体材料进行基因转化研究.含有BNYVV CP 基因和卡那霉素抗性筛选基因(Kanr)的农杆菌与甜菜组织不同外植体共培养后,经过诱导分化培养,在含有卡那霉素(kanamycin)的培养基上,从叶柄及下胚轴分别直接诱导出抗卡那霉素再生芽,而从子叶上只诱导出紧密型绿色愈伤组织,未分化出不定芽.从叶柄及下胚轴诱导再生芽的诱导培养基分别为:MS+BA0.5+TIBA0.2+3%蔗糖+Kan200+Cb500、MS+BA0. 15+NAA0.2+3%蔗糖+Kan100+Cb500.甜菜再生植株诱导频率与甜菜品系、外植体类型、苗龄、温度、TIBA、预处理等因素有关.再生植株生根培养基为:MS+IBA2.0+2%蔗糖+Kan50.     

蓖麻组织培养和植株再生的研究

建立了一种有效的蓖麻植株再生体系。以蓖麻成熟种子胚轴为外植体,在含6-BA（0．5mg／L）的MS培养基上每个外植体均能诱导出由若干不定芽组成的丛生芽,平均每个外植体可产生6．3个不定芽,健壮的不定芽经伸长、生根而发育成完整的再生植株并能全部移栽成活。本实验所用的3个蓖麻品种在产生不定芽的能力和数量上没有明显差异。利用该体系所诱导的不定芽具有生长健壮和易于生长发育等特点。该再生体系的建立为蓖麻遗传转化研究奠定了基础。     

基因工程方法抗甜菜丛根病病毒育种的研究：（Ⅰ）甜菜坏死黄脉病毒外 …

采用含有甜菜坏互黄脉病毒外壳蛋白（ＢＮＹＶＶ ＣＰ）基因的农杆菌，分别以不同甜菜品系的叶柄、下胚轴及子叶为外植体材料进行基因转化研究。含有ＢＮＹＶＶ ＣＰ基因和卡那抗性筛选基因的农杆菌与甜菜组织不同外植体共培养后，经过诱导分化培养，在含有卡那霉素的培养基上，从叶柄及下胚轴分别直接诱导出抗卡那霉素再生芽，而从子叶上只诱导出紧密型绿色愈伤组织，未分化出不定芽。从叶柄及下胚轴诱导两生芽的诱导培养基分别为     

亚麻高效再生体系的优化研究

为了优化亚麻再生体系,对基因型、外植体的选择部位、基本培养基、植物生长调节剂等影响亚麻植株再生的因素进行了优化,建立了亚麻下胚轴高效组织培养再生体系.结果表明,亚麻种子消毒采用75%乙醇处理3min,再用0.1%升汞灭菌3min效果最好;亚麻下胚轴的下部是最佳外植体;在Y4培养基下（MS1＋NAA0.02mg/L＋6-BA1mg/L）,亚麻愈伤组织的诱导率和分化率最高,分别达到98.89%和95.56%;最佳生根培养基是1/2MS＋NAA0.001mg/L,生根率达90%;同时可以看出,不同基因型再生能力不同.与派克斯和华星009相比,再生能力最强的品种是中亚2号.通过再生体系优化使亚麻愈伤组织的诱导率和分化率以及再生植株的生根率都有所提高.     

培养条件对紫苏下胚轴外植体再生的影响

以紫苏下胚轴为材料,研究紫苏外植体芽再生的影响因素。结果表明：苗龄、黑暗时间、激素浓度及配比对紫苏芽再生均有较大影响。取13d苗龄的下胚轴先在分化培养基（MS＋3.0mg/L BA＋0.3mg/L NAA）黑暗预培养8d后转为14h/d光照条件培养可获得较高的再生频率。诱导芽苗生根最佳培养基为1/2MS＋1.0mg/L BA＋0.3mg/L IAA。     

激素对甜菜愈伤组织不定芽再生的调节作用

2，4－D能促进胚珠愈伤组织形成，但对不定芽再生有抑制作用，而IAA无此抑制作用。6BA和KT单独或组合使用在胚珠分化芽的愈伤组织诱导上，是不可缺少的。胚珠意伤组织不定芽可在附加IAA与KT（或再附加6BA）的诱导培养基上一步形成。0．5mg／L的6BA与NAA或IAA在一定浓度下的组合能诱导叶柄产生愈伤组织，分化培养后获得了再生芽。无论胚珠或叶柄，愈伤组织不定芽的再生，主要与前期诱导培营基的激素组合与浓度有关。     

黑麦草组织的快速繁殖

为加快草坪草无性系的选择、推广和应用,以黑麦草成熟种子为外植体进行组织培养,筛选出较理想的愈伤组织分化、芽分化、增殖和生根培养基,即愈伤组织培养基选用MS+2.0 mg/L2,4-D+0.5 mg/L6-BA,愈伤率可达80.0%;芽分化、增殖培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+1.0mg/L6-BA,芽分化率可达44.8%;生根培养基为1/2MS+0.5 mg/LNAA,生根时间短,生根率可达到88.2%以上.     

甘蔗不定芽人工种子的初步研究

以紫（黑）皮果蔗诱导胚状体前发的幼苗为材料，研究了两种有机物对甘蔗不定芽人工种子前发的影响。结果表明：在人工胚乳中加入500mg／L的水解乳蛋白和20N番茄提取对对甘蔗不定芽人工种子的萌发和成苗有一定的促进作用。此外，在甘蔗不定芽人工种子前发培养基中加入ling／LNAA也有利于提高人工种子前发率和）老苗率。甘蔗不定芽人工种子的初步研究     

葡萄等果树胚乳植株的诱导及幼胚上器官的再分化

山东农学院于一九七六年开始进行果树胚乳培养工作,现已在葡萄等八种果树上诱导出胚乳愈伤组织。在葡萄上获得两个小植株,其中一株具有2枚子叶,10个真叶和较发达的根系,植株生长正常。在苹果、杏和枣可以明显地看出,不定芽是从子叶部位长出外,其他分化的植株,不定芽或胚状体起源正在进行细胞分析鉴定。     

花生胚小叶的离体再生及筛选压力选择

以花生胚小叶为外植体优化离体再生条件,通过对再生苗进行筛选,为外源基因的遗传转化提供实验依据。研究表明,不同基因型胚小叶的再生能力差异显著,在供试基因型中以中花8号不定芽诱导率和成苗率最高,且外植体状态最好。中花8号胚小叶再生的最佳诱导培养基为MSB（MS无机盐＋B5有机成分）＋6-BA（4.5mg/L）＋NAA（1mg/L）＋AgNO3（2mg/L）,最佳诱导培养时间为21d。对中花8号再生苗进行筛选浓度实验,草丁膦（PPT）为20mg/L时,可筛选出抗性苗;300mg/L的卡那霉素（Km）可用于较小幼苗筛选,而对较大幼苗则需将Km的浓度提高至400mg/L以上。     

紫苏细胞悬浮培养生产迷迭香酸条件研究

通过诱导紫苏下胚轴和子叶外植体产生愈伤组织,建立细胞悬浮培养体系,以提高细胞产量及细胞中迷迭香酸含量。结果表明,在MS液体培养上添加3.0mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)＋0.3mg/L萘乙酸(NAA)培养基上,下胚轴愈伤组织呈嫩黄色松散状态,出愈时间短,出愈率可达100%。紫苏细胞悬浮培养产生迷迭香酸的最佳条件为培养时间7d、接种量鲜质量浓度20g/L、摇床转速110r/min、蔗糖30g/L、L-苯丙氨酸0.15g/L,此条件下可获得高达2.283mg/g的迷迭香酸。     

An Efficient Regeneration System and Optimization of the Transformation from the Cotyledonary Node of Jute (Corchorus capsularis L.)

The purpose of this study was to use cotyledonary nodes as explants to establish an efficient regeneration protocol for jute (Corchorus capsularis L.) on Murashige and Skoog (MS) basal medium. Research into the different growth regulators using the orthogonal design L16 (4⁵) revealed that the best shoot induction medium is MS medium containing 8% (w/v) agar and 3% (w/v) sucrose supplemented with 1.0 mg/L 6BA and 0.25 mg/L NAA. The average number of shoots per explant and the explant induction rate were 9.8 and 100%. After 3 weeks, 2–3 cm shoots were rooting on 1/2 MS medium containing 8% (w/v) agar and 3% (w/v) sucrose supplemented with 1.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA. Moreover, we optimized Agrobacterium-mediated transformation using the GUS gene transient expression system. The best condition for obtaining higher transformation rate consisted of the use of fresh explants to which 100 μM acetosyringone was added for a co-culture time of 10 min, the OD value of Agrobacterium liquid is 0.5 at 600 nm. These data provide an important basis for the application of other trait gene in the improvement of jute fiber quality.     

预防组培中蓖麻子叶节玻璃化的研究

为了预防蓖麻子叶节在组织培养过程中的玻璃化现象,以建立其高效的遗传转化体系,本实验对影响子叶节生长状态的几个因素进行了初步研究。结果表明,在胚轴、子叶均为淡黄色的时期切取蓖麻子叶节,接种在1/8MS、内含10g/L琼脂粉、20g/L蔗糖、8.0mg/LZT、1.0mg/LNAA的培养基中进行培养,能有效地预防蓖麻子叶节玻璃化。     

大豆子叶节再生中植物生长调节剂浓度及基因型筛选

以黑农35为实验材料,对大豆子叶节再生过程中种子的灭菌方法、萌发培养基中植物生长调节剂的浓度、丛生芽分化、生根培养与驯化等过程中植物生长调节剂的浓度进行研究,确定了大豆组培过程中最适合的种子灭菌方法是氯气灭菌法,确定了萌发培养基中的6-BA浓度为2mg/L,丛生芽分化培养基中6-BA浓度为1.70mg/L,GA3浓度为0.5mg/L时,分化率最高（78.1%）。生根培养基中添加0.37mg/L NAA更适合根的生长。采用此方法对北方37个主要栽培大豆品种进行了基因型筛选,确定了合丰25、黑农35、合丰35、绥农10、绥农14等5个比较适合的大豆基因型。     

云烟87烤烟品种突变株的离体快繁技术研究

以云烟87烤烟品种突变巨型株的休眠芽为试材,对其进行了打破休眠促使萌芽、愈伤组织诱导、丛生芽增殖和生根培养的研究。结果表明:打破休眠促使其萌芽的最佳培养基配方为MS+2.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA;诱导产生愈伤组织效果最佳的培养基配方为MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;丛生芽增殖效果最佳的培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;MS+0.6mg/L NAA对根系的生长最为有利。      

Study on Flax Genetic Transformation Mediated by Agrobacterium tumefaciens

Abstract

Flax is an important natural material for the linen spinning industry and as an oil crop in China. Flax products worth US $100 million are exported every year. Recently, with the development of a market economy and China's entry into the WTO, farmers and flax factories have shown a need for new varieties that have a short vegetation period, are resistant to herbicides and lodging, and have a high fiber content. In order to resolve these problems quickly, we have studied flax genetic transformation since 1998.

The paper is about flax genetic transformation by Agrobacterium tumefaciens strain EHA105. The explants were hypocotyl segments from 5-7 day old seedlings. The segments cannot form a callus when the concentration of kanamycin is 30 mg/L and 50 mg/L. Therefore, 50 mg/L of kanamycin was selected as an efficient concentration to select the transgenic plants. The segments of hypocotyl were treated with EHA105 and then were inoculated in different media (Ms, B5, N6). The experiment showed that Ms is a preference medium for flax genetic transformation. Agrobacteriumtieated segments of hypocotyl were cultured on the surface of modified Ms medium (Ms agar medium supplemented with 3.5 mg/L IAA, 2 mg/L KT, 150 mg/L LH). Callus was formed by 71.4%-81.6% of the hypocotyls. Callus inoculated in a regenerative medium of Ms with little BA and NAA could regenerate at the rate of 31.8%-40.2%, and 87.4% of regenerative plants could root in the medium of 1/2 Ms supplemented with 0.001 mg/L NAA. This transformation system has been tested by the GUS-INT gene. After co-cultivation of the segments of hypocotyl and GUS-INT, the segments of hypocotyl were moved to callus medium. After 3 days, the transformation rate of new callus was 72.0%; after 4 weeks the transformation rate of callus was 24.0%; the transformation rate of regenerative plants was 7.5%. The experiment allowed for the establishing of a flax genetic transformation system mediated by Agrobacterium tumefaciens.     

杜仲疏松愈伤组织诱导条件的优化筛选

杜仲愈伤组织生长过于致密从而导致难以实现悬浮培养,因此获得疏松、生长快速愈伤组织是实现杜仲细胞悬浮培养的前提.本文研究了不同外植体、激素和培养基对杜仲愈伤组织诱导率、疏松程度以及褐化率的影响,结果表明：上胚轴和子叶更容易被诱导为疏松愈伤组织,MS培养基是最适诱导培养基;适当增加6-BA浓度有助于褐化的减轻且提高愈伤组织疏松程度,杜仲疏松愈伤组织诱导最适激素配比为1.0mg/L 2,4-D＋1.0mg/L NAA＋1.0mg/L 6-BA.