纳豆菌原生质体制备与再生条件的研究

研究了菌体培养时间、溶菌酶作用条件(酶作用温度、浓度和时间)对纳豆菌BNK菌株原生质体制备和再生的影响。在此基础之上,考察了不同再生培养基、渗透压稳定剂及原生质体保护剂对再生率的影响。确定了菌株BNK原生质体制备和再生最佳条件为:菌体培养9h收集,0．8mg/ml溶菌酶,30℃作用40min制备原生质体,将原生质体液涂布于以甘露醇为渗透压稳定剂、添加有淀粉的PYG培养基中再生,此时原生质体制备率达98．2%,再生率为28．4%。     

冬虫夏草原生质体制备与再生条件的研究

采用正交分析方法,对影响冬虫夏草菌株原生质体制备与再生的主要因素进行研究。结果表明,最佳条件组合为培养3d 的菌丝体,在2.0% 溶壁酶+1.0% 蜗牛酶的酶液中,0.6mol/L 的KCl 作为原生质体制备的渗稳剂,0.6mol/L 的甘露醇作为再生培养基的渗稳剂,32℃酶解2h。在此条件下,原生质体得率可达到2.98 × 108/ml,再生率可达到42.09 × 10-2。     

黄色短杆菌原生质体制备与再生条件的研究

目的 研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的最佳条件.方法 用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后,用溶菌酶酶解,研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响.结果 原生质体制备和再生的最佳条件为:预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌,青霉素最适浓度0.4 u/mL,甘氨酸浓度2％,预处理时间2h,酶浓度1 mg/mL,酶解时间12h,酶解温度37℃.结论 在最佳条件下原生质体形成率达99.71％,再生率达16.52％.     

酒精酵母原生质体制备与再生条件研究

对南阳酒精酵母(Saccharomycescerevisiae)1308原生质体制备和再生条件进行了研究。结果表明,取对数中期的酵母细胞,用0.1%-β巯基乙醇进行预处理后,再用5mL内含4mg/mL蜗牛酶和4mg/mL纤维素酶的混合酶液酶解1.5h,酒精酵母1308的原生质体制备率达93.6%,再生率达15.9%。     

黑曲霉原生质体的制备、再生及转化条件

为了建立原生质体介导的黑曲霉转化系统，研究了菌龄、酶系统、渗透压稳定剂、酶解时间对葡萄糖淀粉酶生产菌株黑曲霉CICIMF0410原生质体形成与再生的影响。结果表明，培养4d的幼嫩菌丝体最适于制备原生质体；综合考虑原生质体形成与再生的情况，作者选用1mol／L山梨醇为最适渗透压稳定剂，1g／dL蜗牛酶-1g／dL纤维素酶-0．1g／dL溶壁酶为最适裂解酶组合，30℃酶解2．5～3h，最适合的原生质体的再生培养基为含0．6mol／LMgSO4的TZ培养基。在PEG和CaCl2存在条件下，以潮霉素B为选择性标记，质粒pBC-Hygro转化原生质体，每微克DNA可获得4～5个转化予。     

微生物原生质体制备及再生的影响因素

原生质体的制备及再生,是原生质体技术的前提和基础.本文较全面地介绍了影响微生物原生质体制备及再生的因素,以期在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,为进一步实验打下良好的基础.     

安琪超级酿酒酵母原生质体制备与再生条件研究

应用正交试验研究预处理剂、酶种类和浓度、渗透压稳定剂和酶解时间对安琪超级酿酒酵母(Saccharimyces cerevisiae)原生质体形成率和再生的影响.结果表明,渗透压稳定剂在上述4种因素中对原生质体的形成和再生影响最大.最优组合为:使用β-巯基乙醇作预处理剂,0.4%蜗牛酶加0.4%纤维素酶,使用0.53 M蔗糖做渗透压稳定剂,28℃酶解1 h.安琪超级酿酒酵母原生质体的形成率为98.6223%,再生率为19.9904%.     

酒酒球菌SD-2a原生质体制备的研究

通过单因素和正交试验,研究了菌龄、酶浓度、酶解温度及渗透压稳定剂等因素对酒酒球菌原生质体制备及再生的影响.确定其制备与再生的最佳条件为:菌龄34h,酶浓度1mg/mL,酶解温度37℃,0.8mol/L KCI为渗透压稳定剂,再生培养基也添加0.8mol/L KCI,在此条件下,其原生质体形成率与再生率之积为10.65%.     

罗伊氏乳杆菌原生质体的制备与再生条件的研究

研究细胞培养和溶菌酶酶解条件对罗伊氏乳杆菌原生质体形成率的影响以及罗伊氏乳杆菌原生质体在多种再生培养基中的再生条件,结果表明罗伊氏乳杆菌05-1和05-2原生质体形成的最适条件:在MRS培养基中接种量5%(两菌株活菌数分别为4.96×108 cfu/mL和8.04×107 cfu/mL),37℃静置培养至OD600值1.0(两菌株活菌数分别为2.36×1012 cfu/mL和6.56×109 cfu/mL)左右,酶解pH8.0、酶质量浓度20 mg/mL、酶解时间45min。在此最适条件下,两菌株原生质体形成率分别为90.2%和92.8%;在最适再生培养基RM1中,罗伊氏乳杆菌05-1和05-2原生质体的再生率分别为30.6%和23.2%;RM1中,胎牛血清(BSA)是罗伊氏乳杆菌原生质体再生不可获缺的物质。本研究为构建益生乳杆菌食品级基因克隆和表达系统,实现原生质体的转化及细胞融合育种与基因组洗牌分子育种,提供理论依据。     

丝状真菌三孢布拉霉原生质体制备及再生条件的研究

丝状真菌三孢布拉霉原生质体形成和再生的条件;培养７ｈｒ的幼龄菌丝体,用１％溶壁酶和１％纤维素酶混合酶液处理,以０．６Ｍｏｌ／Ｌ蔗糖作为渗透压稳定剂,２８℃酶解３ｈｒ。形成原生质体量达到８．０＊１０＾６个／ｍｌ原生质体的固体法再生率为１．４％,液体法再生率为４０％。     

酿酒酵母和酒类酒球菌原生质体制备与再生的条件优化

应用正交设计，研究酶解时间、酶浓度和酶解温度对酿酒酵母和酒类酒球菌原生质体制备和再生的影响。实验结果表明，酶解浓度对原生质体制备和再生的影响最大。最优组织条件为当蜗牛酶浓度为20g/L，酶解温度为37℃和酶解时间为20min时，酿酒酵母原生质体的制备率为88.4%。再生率为32.5%。当溶菌酶浓度为1mg/mL、酶解温度为37℃和酶解时间为20min时，酒类酒球菌原生质体的制备率为87.5%，再生率为31.2%。     

2株酵母菌单倍体原生质体形成与再生条件的研究

对酒精高产酿酒酵母GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成与再生条件进行了研究.结果表明,在菌龄8h、o.2％p-巯基乙醇和0.1％ EDTA-Na2预处理20min、1.5％的蜗牛酶37℃处理30min以及使用浓度170g/L的蔗糖作为渗透压稳定剂的条件下,GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成率和再生率均达到最大.形成率分别是98.14％和97.19％,再生率分别是17.29％和15.78％.     

双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合子筛选方法的探讨

目的:探讨双歧杆菌(Bifidobacterium)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)原生质体融合子的筛选方法。方法:将双歧杆菌和酿酒酵母原生质体进行原生质体融合,采用10%乳糖中性红培养基进行融合子的初筛,并分析融合子传代稳定性、生物学特性,采用双歧杆菌属特异性寡核苷酸探针对亲本菌和融合子进行了荧光原位杂交检测比较。结果:结果表明,筛选得到的融合子具有双歧杆菌的特异性序列和亲本菌的生物学特性。结论:双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合,实现了厌氧菌和酵母的跨界融合,为双歧杆菌生物学功能的开发提供新思路、新途径。     

产2,3-丁二醇的酿酒酵母菌的筛选及其鉴定

酿酒酵母在自然界中广泛分布,尤其在发酵食品等领域应用广泛。2,3-丁二醇作为其利用葡萄糖发酵的产物之一,也有着极大地发展潜力。该研究利用肌酸显色法,对39株W系列菌株以及在六种不同地点分离出的菌株进行筛选,测定其乙偶姻产量,并结合形态学与分子生物学鉴定优选菌株。结果表明,菌株W141被鉴定为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,发酵72 h时,2,3-丁二醇脱氢酶酶活力最高为0.025 7 U/mg,2,3-丁二醇产量最大为1.6 g/L,可作为2,3-丁二醇的生产菌株。     

刺葡萄园土壤酿酒酵母的筛选及耐受性分析

从铜仁市刺葡萄园采集土样,采用涂布平板法、平板划线法、酵母浸出粉胨葡萄糖（YPD）培养基分离、纯化酵母,通过WL营养琼脂培养基筛选酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,并对其乙醇、糖、酸、温度及SO2耐受性进行分析。结果表明,共获得10株酵母菌株,其中菌株TR-2、TR-3、TR-6、TR-7、TR-10为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,且菌株TR-6、TR-10耐受性较好,均分别能在乙醇体积分数为16%、葡萄糖质量浓度为500 g/L、柠檬酸质量浓度为30 g/L、SO2质量浓度为250 mg/L的YPD液体培养基和高温45 ℃、低温5 ℃条件下生长繁殖。     

冰梨酒酿酒酵母的筛选

以鸭梨为原料,榨汁后经冷冻浓缩制成浓缩梨汁（即冰梨汁）,接入酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,在15 ℃下进行低温酒精发酵酿制成冰梨酒。通过比较8株酿酒酵母的发酵性能,及其所酿冰梨酒的理化指标、有机酸含量和感官品质,最终确定酿酒酵母R2为酿制冰梨酒的适宜菌种。该酵母生长繁殖快、降糖和产酒精能力强、发酵性能优良;酿出的冰梨酒酒香和谐,果香纯正,口感甜美醇厚、柔和爽口,具有冰梨酒特有的风味。     

WL培养基在酿酒酵母筛选中的应用

从葡萄果皮自然发酵液中分离酵母菌株。利用WL琼脂培养基及赖氨酸培养基筛选酿酒酵母,结果显示,在葡萄果皮自然发酵的早期不存在酿酒酵母,酿酒酵母最初出现在发酵中期即发酵后第4d。经过生理生化和分子鉴定结果表明,WL培养基对酿酒酵母的筛选可信度达到100%。     

甘蔗汁酿酒酵母的筛选及特性

为了筛选适宜于甘蔗果酒的酿酒酵母,综合采用了富集培养、平板分离、产酒与产香实验、起酵实验及耐乙醇特性实验等方法,从自然发酵甘蔗渣中筛选获得1株优良的酿酒酵母G05.菌株G05具有起酵快、耐乙醇性较强、产酒率高、香气明显等特点,最适发酵温度28℃和发酵最适pH值为5.0,在含糖200g/L的甘蔗汁培养基中的乙醇产量、总酯产量分别为10.8％vol和1.2g/L.