IDENTIFICATION OF uvrA GENE MUTATION SITES IN TWO MITOMYCIN-SENSITIVE Deinococcus radiodurans STRAINS

抗辐射菌Ｄｅｉｎｏｃｏｃｕｓｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ具有显著的ＤＮＡ损伤修复能力,包括对丝裂霉素（ＭＣ）,紫外线（ＵＶ）及电离辐射等所致的损伤。在用对ＤＮＡ损伤因子具有抗性的野生型抗辐射菌ＫＤ８３０１的基因组ＤＮＡ构建的基因文库中,有四个克隆能够通过其ＤＮＡ转化,使二株对ＭＣ敏感的Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ的突变体－２６２１和３０２１回复对ＭＣ的抗性。克隆了二株突变体中受突变（ｍｔｃＡ或ｍｔｃＢ）影响的基因,并测定了该基因的核苷酸序列。理论上推定抗辐射菌ｕｖｒＡ基因产物的氨基酸序列是由１０３６个氨基酸组成,与许多细菌的ＵｖｒＡ蛋白质具有同源性。用ＰＣＲ技术扩增二株突变体基因组中相应的ＤＮＡ片段,并对其加以测序分析,确定了突变发生的位点。对于突变体３０２１,其ｕｖｒＡ基因中发生了１４４个碱基对（ｂｐ）的缺失突变（缺失部分包括ｕｖｒＡ的起始密码）,造成了３０２１的ｕｖｒＡ基因的失活。对于２６２１突变体,其ｕｖｒＡ基因内却发生了一个插入突变,造成了该基因的插入失活。该插入序列由１３２２ｂｐ组成,侧面与１９ｂｐ组成的末端反转重复（ＩｎｖｅｒｔｅｄＴｅｒｍｉｎａｌＲｅｐｅａｔｓ,ＩＴＲ）相连接,并产生     

抗辐射菌Deinococcus radiodurans的DNA结合蛋白的检测及分析

抗辐射菌Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ是微小球菌属的一种,它对电离辐射、紫外线及其他的化学诱变剂所诱导的ＤＮＡ抽伤都具有极强的修复能力,故倍受放射生物学界的关注。本研究旨在检测抗辐射菌的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＮＡ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉ,ＤＢＰ）,并有选择地对其氨基酸序列加以分析,以进一步研究ＤＢＰ在抗辐射菌的辐生中的作用和意义。主要研究方法：分离提取抗辐射菌染色体ＤＮＡ并用地高     

二株丝裂霉素敏感的抗辐射菌Deinococcus radioduran …

抗辐射菌Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ具有显著的ＤＮＡ损伤修复能力，包括对丝裂霉素（ＭＣ），紫外线（ＵＶ）及电离辐射等所致的损伤。在用对ＤＮＡ损伤因子具有抗性的野生型抗辐射菌ＫＤ８３０１的基因组ＤＮＡ构建的基因文库中，有四个克隆能够通过其ＤＮＡ转化，使二株对ＭＣ敏感的Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ的突变体ＫＤ２６２１和３０２１回复对ＭＣ的抗性。克隆了二株突变体中受突     

抗辐射菌Deinococcus radiodurans一种新的DNA修复基因pprA的分子克隆测序及特性研究(英文)

抗辐射菌Ｄｅｉｎｏｃｏｃｕｓｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ具有显著的ＤＮＡ修复能力，包括对丝裂霉素（ＭＣ），紫外线（ＵＶ）及γ射线。通过化学诱导野生型菌株ＫＤ８３０１而得到的突变体ＫＨ３１１１，对ＭＣ，ＵＶ及γ射线敏感，对链霉素（Ｓｍ）具有抗性。ＫＨ３１１１的辐射抗性能够通过转染野生型抗辐射菌ＫＤ８３０１基因组中一个已被克隆的ＤＮＡ片断而得到恢复。转染实验表明，突变体具有很好的自然转化能力，即不缺乏重组修复能力。本研究确定了ＫＨ３１１１内发生突变的基因及其核苷酸序列，该基因（ｏｒｆ１４４ｂ）所编码的蛋白质由２８４个氨基酸组成，与其它已知的蛋白质不具有同源性，即它是一种新的蛋白质。通过ＤＮＡ测序分析，ＫＤ８３０１和ＫＨ３１１１的ｏｒｆ１４４ｂ序列只是一个碱基的改变，即由Ｇ突变为Ａ，所编码的第１４９位氨基酸由甘氨酸变为谷氨酰胺。说明甘氨酸是ＤＮＡ修复基因ｏｒｆ１４４ｂ所编码的蛋白质中的一个重要残基。用ＫＤ８３０１的ｏｒｆ１４４ｂ基因转染ＫＨ３１１１，得到转染体ＫＨ３１１２，其对ＭＣ，ＵＶ及γ射线都具有同母本（ＫＤ８３０１）一样的抗性。在抗辐射菌中，这种对多种ＤＮＡ损伤剂产生抗性所需要的基因（ｏｒｆ１４４ｂ），我们命名为     

抗辐射菌Deinococcus radiodurans一种新的DNA修复 …

抗辐射菌Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ具有显著的ＤＮＡ修复能力，包括对丝裂霉素，紫外线及γ射线，通过化学诱导野生型菌株ＫＤ８３０１而得到的突变体ＫＨ３１１１，对ＭＣ，ＵＶ及γ射线敏感，对链霉素具有抗性，ＫＨ３１１１的辐射抗性能通过传染野生型抗辐射菌ＫＤ８３０１基因组中一个已被克隆的ＤＮＡ片断而得到恢复。     

PIXE AND IXX ANALYSIS OF MUSEUM PAPERLIKE OBJECT

ＰＩＸＥＡＮＤＩＸＸＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＭＵＳＥＵＭＰＡＰＥＲＬＩＫＥＯＢＪＥＣＴＳＷｕＸｉａｎｋａｎｇ（邬显慷）（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＮｕｃｌｅａｒＲｅｓｅａｒｃｈ，ｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｇａｉ２０１８０...     

辐射防护中常用缩略语(二)

ＮＥＡ　　　　ＮｕｃｌｅａｒＥｎｅｒｇｙＡｇｅｎｃｙ（核能机构）ＮＥＳＨＡＰＳ　　　　ＮａｔｉｏｎａｌＥｍｉｓｓｉｏｎＳｔａｎｄａｒｄｓｆｏｒＨａｚａｒｄｏｕｓＡｉｒＰｏｌｌｕｔａｎｔ（空气中危险污染物排出量国家标准）ＮＰＤＥＳ　　　　ＮａｔｉｏｎａｌＰｏｌｌｕｔｉｏｎＤｉｓｃｈａｒｇｅＥｌｉｍｉｎａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（国家污染物排放消除系统）ＮＲＰＢ　　　　ＮａｔｉｏｎａｌＲａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＢｏａｒｄ（国家放射防护委员会,英国）ＮＲＣ　　　　Ｕ．Ｓ．ＮｕｃｌｅａｒＲ…     

ON ATMOSPHERIC RADIO-ACTIVITY AND PEIPING WEATHER

ＯＮＡＴＭＯＳＰＨＥＲＩＣＲＡＤＩＯ┐ＡＣＴＩＶＩＴＹＡＮＤＰＥＩＰＩＮＧＷＥＡＴＨＥＲＢｙＫ．Ｃ．Ｗａｎｇ（王淦昌）ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｃｓＳｉｎｃｅｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅｅｍａｎａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅａｔ...     

ION BEAM AND SIMS ANALYSIS ON DAMAGE OF GaAs DOPED WITH N^＋

ＩＯＮ　ＢＥＡＭ　ＡＮＤ　ＳＩＭＳ　ＡＮＡＬＹＳＩＳ　ＯＮ　ＤＡＭＡＧＥ　ＯＦ　ＧａＡｓ　ＤＯＰＥＤ　ＷＩＴＨ　Ｎ~＋ＷｕＸｉａｏｓｈａｎ；ＬｉｎＺｈｅｎｊｉｎ；ＪｉＣｈｅｎｇｚｈｏｕ；ａｎｄＹａｎｇＸｉｚｈｅｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｃ?..     

EFFECT OF THE RATIO Th/U ON TL DATING ACCURACY

ＥＦＦＥＣＴＯＦＴＨＥＲＡＴＩＯＴｈ／ＵＯＮＴＬＤＡＴＩＮＧＡＣＣＵＲＡＣＹ￥Ｐ．Ｌ．Ｌｅｕｎｇ（梁宝鎏）；ＭｉｃｈａｅｌＪ．Ｓｔｏｋｅｓ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｃｓａｎｄＭａｔｅｒｉａｌｓＳｃｉｅｎｃｅ，ＣｉｔｙＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃｏ...     

抗辐射菌lexA基因对受γ射线照射和MMC作用的大肠杆菌敏感性的影响

研究抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中的表达对其γ射线辐射抗性和丝裂霉素(MMC)敏感性的影响。应用电穿孔技术将携带有抗辐射菌lexA基因的重组质粒PZA172转入大肠杆菌JM109，其启动子为lacZ，用异丙基-硫代-β—D半乳糖苷(IPTG)诱导，(十二烷基磺酸纳)聚炳烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶电泳检测LexA蛋白的表达。经受不同剂量γ射线照射和不同浓度的MMC作用，平板菌落计数，绘制存活曲线。抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中，经IPTG诱导能稳定地表达，lexA基因的显著表达降低了大肠杆菌经γ射线照射和MMC作用后的存活率。抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌中的显著表达降低了大肠杆菌对γ射线和MMC的抗性，其作用机理还有待于进一步的研究。     

耐辐射奇球菌pprM DNA结合域功能分析预测与基因敲除重组体的构建

通过生物信息学分析发现,pprM基因含有冷休克DNA结合域。利用Overlap PCR方法获得pprM基因DNA结合域缺失的基因片段pprMACSD后,酶切扩增的片段和自杀质粒空载体pkl8mobsacB,并将目的基因片段与自杀质粒载体连接构建重组载体pkl8mobsacB-pprMACSD,将重组子转化大肠杆菌JM109感受态,筛选出阳性克隆,酶切及测序鉴定。成功构建pprMDNA结合域基因敲除重组体,且生物信息学分析预测结果显示pprMDNA结合域与耐辐射奇球菌抗辐射功能相关。     

耐辐射奇球菌DR_2327和DR_2328基因克隆及功能分析

通过生物信息学分析耐辐射奇球菌DR_2327和DR_2328基因及编码蛋白的基本性质,利用PCR方法克隆DR_2327和DR_2328的全基因,连接至p GEM-T载体上,转化至大肠杆菌JM109中,并进行双酶切鉴定。生物信息学分析结果表明,DR_2327和DR_2328基因位于同一操纵子中,且DR_2328蛋白具有组氨酸激酶活性,DR_2327蛋白具有反应调节子功能,提示两者很可能组成一对双组分系统。体外实验表明,DR_2327和DR_2328基因的外源表达在一定程度上提高了大肠杆菌对紫外辐照和H2O2的耐受能力。     

耐辐射球菌Deinococcus radiodurans辐射抗性的研究进展

耐辐射球菌（Deinococcus radiodurans）是迄今为止发现的对电离辐射、紫外线、过氧化氢等一些DNA损伤剂都具有极强抗性的微小球菌，研究表明，这种独特抗性归因于其具有高效而准确的DNA修复系统。公认的耐辐射球菌有3种DNA修复方式：碱基切除修复、核苷酸切除修复和重组修复。对于耐辐射球菌是否具有SOS易错修复尚存争议，染色体DNA的降解和排除细胞外有利于DNA修复的正确和顺利进行，但DNA修复过程的分子柚是了解却甚少。     

Proteomic analysis of the gene DR1709 mutant in Deinococcus radiodurans

DR1709 is a predicted Mn~(2+) transporter in Deinococcus radiodurans(D.radiodurans). The mensuration method to evaluate protein viability with two-dimensional electrophoresis in D.radiodurans and the mutants was established in this study. The results showed that after DR1709 was disrupted, the expressions of DR1120(acetokinase), DR1691 (heat shock protein), DR1485 (putative lipase), DR2095 (putative c-type cytochrome) and other three hypothetical proteins (DR0124, DR0047 and DR2474) were repressed. However the expression of DR1794 (putative nosX) was induced. Phenomena above suggested that the increased radiation-sensitivity of the mutant cells may be attributed to not only the protection of gene DR1709, but also the proteins' different expressions between the wild type and the mutant might also play important roles in protecting D.radiodurans from irradiation.Although DR2095 was a homologue of c-type cytochrome, it has no realitic functions.     

耐辐射基因工程菌Deinococcus radiodurans及其在环境修复中的应用

耐辐射球菌(Deinococcus radiodurans)是一种革兰氏阳性微球菌,非致病菌,可以应用于放射性核素污染环境的生物修复。由于一般的微生物对辐射非常敏感,因此不能用于既存在放射性核素,又存在有机污染物的复合污染场所。利用物理化学方法清除这类污染,其价格非常昂贵。利用微生物修复这类环境是一种具有活力的替代技术。基因工程手段可以解除微生物固有的一些物理、化学和生理方面的限制。在辐射成为限制微生物生存和发挥其功能的情况下,利用基因改造的Deinococcus radiodurans进行环境修复是一种具有实用潜力的手段。     

耐辐射奇球菌的辐射损伤修复机制研究进展

耐辐射奇球菌是地球上目前发现的最耐辐射的生物之一,它对于电离辐射、紫外线、H2O2以及其他一些因素所导致的DNA和蛋白质的损伤都具有极强的耐受与抵抗能力。目前已知耐辐射奇球菌的高效DNA损伤修复能力是其具有超强辐射抗性的关键,但是对于该修复能力的具体作用机制,目前尚未有定论。本工作将就耐辐射奇球菌DNA辐射损伤修复主要机制研究进展作一综述。     

耐辐射球菌PprI蛋白质表达及其纯化的实验研究

为了在大肠杆菌中高效表达耐辐射球菌PprI融合蛋白并进行纯化,本研究以PCMV-HA-pprI质粒为模板,PCR扩增pprI基因全序列,经NcoI和EcoRI双酶切后定向克隆到pET-28a表达载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a-His-pprI,并转入E.coli BL21(DE3)RP.IPTG诱导融合蛋白...