鲶鱼骨酶解物抑菌性能研究

以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌3种菌为受试菌,研究了鲶鱼骨酶解物的抑菌性能,并初步探讨了鲶鱼骨酶解物抑菌作用的稳定性。结果表明,鲶鱼骨酶解物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌都有明显的抑制作用,其中对藤黄微球菌抑制作用最强,其最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)分别是6 mg/mL和8 mg/mL,鲶鱼骨酶解物的抑菌活性具有较好的热稳定性和pH不稳定性。     

黄粉虫抗菌肽的分离纯化及生物活性研究

本研究以黄粉虫为试材,采用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备获得了抗菌肽,并对其进行分离纯化,比较了不同组分及纯化后抗菌肽的抑菌活性、热稳定性及分子量。结果表明:大孔吸附树脂对蛋白酶酶解液动态吸附并梯度洗脱后得到5个组分,抑菌试验表明无水乙醇洗脱组分的抑菌活性最强。采用制备型HPLC对无水乙醇洗脱组分进一步纯化,得到两个组分(H-1,H-2),其中组分H-2对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均表现出较强的抑菌活性,且其最小抑菌浓度(MIC)为0.512 mg/m L。热稳定性试验表明,H-2具有较好的热稳定性,121℃加热20 min仍能保持较高活性。液质联用(LC-MS)结果表明,H-2的分子量为756.82u。本研究为黄粉虫抗菌肽的高效分离和纯化提供了科学依据,为黄粉虫抗菌肽在食品防腐中的应用提供了基础数据。     

海洋链霉菌GB-2抗细菌物质的溶解性质和分离纯化

本实验主要对海洋链霉菌株GB-2产生的抗菌物质的溶解性进行了研究,并将其分离纯化.通过对GB-2的发酵液中抗菌物质的溶解性测定,可推知是一种极性较大的水溶性物质.超滤实验发现,抗细菌组分能通过截留分子量(COMW)≤1kD的超滤膜.Sephadcx LH-20色谱柱分离后,经抗菌活性检测发现两个活性峰,其中第1个峰对蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌活性最强.将第1个峰的收集液进一步用高效液相色谱(HPLC)纯化,在图谱上出现两个峰,其中第2个峰具有抑菌活性,表明该物质得到了纯化.     

牛骨胶原蛋白源抑菌肽的分离纯化及成分分析

牛骨胶原蛋白经中性蛋白酶水解,采用超滤技术和凝胶层析技术对酶解液进行分离纯化并测定对大肠杆菌的抑菌活性;借助反向高效液相色谱和基质辅助激光解析/离子化串联飞行时间质谱仪对抑菌肽进行分析.结果表明:经超滤分离后,分子质量小于10kD的组分对大肠杆菌的抑菌活性强;Sephadex G-25柱分离得到的峰Ⅰ和峰Ⅳ组分有较强的抑菌活性.经反向高效液相色谱和基质辅助激光解析/离子化串联飞行时间质谱仪分析,峰Ⅰ组分中含有的多肽种类多,分子质量集中在850～1550D之间.峰Ⅳ组分含有的多肽种类较少,分子质量集中在700～900D之间.     

藤黄微球菌过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的重组与表达

目的应用基因重组技术在大肠杆菌中高效表达藤黄微球菌过氧化氢酶(catalase,CAT)。方法从藤黄微球菌DNA中获得CAT编码基因,并应用pProEx-HTa质粒构建融合表达载体并表达和检测活性。结果通过融合表达获得可溶性带6×His标签重组蛋白,该蛋白经过Ni-NTA纯化后可获得活性物质。结论从大肠杆菌表达体系中表达了具有生物活性的CAT。     

藤黄微球菌过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的重组与表达

目的应用基因重组技术在大肠杆菌中高效表达藤黄微球菌过氧化氢酶（catalase,CAT）。方法从藤黄微球菌DNA中获得CAT编码基因,并应用pProEx．HTa质粒构建融合表达载体并表达和检测活性。结果通过融合表达获得可溶性带6×His标签重组蛋白,该蛋白经过Ni-NTA纯化后可获得活性物质。结论从大肠杆菌表达体系中表达了具有生物活性的CAT。     

鲫鱼鱼鳞抗菌多肽的制备纯化及其抑菌活性

以鲫鱼鱼鳞为原料,对其预处理后采用柠檬酸浸提酶解等工艺得到鱼鳞抗菌多肽粗酶解液,经透析后,再依次经Sephadex G-15、Sephadex G-50凝胶过滤层析和纤维素DEAE-52阴离子交换层析对其进行分离纯化,最后得到具有较强抑菌活性的鲫鱼鱼鳞抗菌多肽,并对其进行分子质量分析以及对多种细菌、霉菌的抑菌活性和最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）测定。结果表明：经分离纯化后得到的具有抑菌活性的蛋白组分AcIII,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示为单一条带,表明其已达到电泳级纯,其分子质量约为20.1 kDa,抑菌活性测定结果表明鲫鱼鱼鳞抗菌多肽具有很好的广谱抗菌活性,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、副溶血性弧菌、假单胞菌和希瓦氏菌的MIC为16 μg/mL,对大肠杆菌和沙门氏菌的MIC为32 μg/mL。     

猪血红蛋白酶解液的抑菌性研究

研究了利用碱性蛋白酶水解血红蛋白酶解液的抑菌性。利用琼脂扩散法分别对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、黑根霉及啤酒酵母五种指示菌进行了抑菌性研究,考察了酶解时间、牛津杯加液量、酶解液的浓度、酶解液的放置时间几个因素对抑菌效果的影响。结果表明,血红蛋白酶解液对黑根霉及啤酒酵母有一定的抑菌效果,而对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌的抑菌效果更明显。     

荸荠英提取物抑菌活性及其应用研究

为了提高荸荠的深加工附加值,本实验从荸荠加工废弃物荸荠皮中提取抑菌物质,研究其抑菌活性及其应用。结果表明,荸荠英提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌均有抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,且持续性好。荸荠英提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌的抑制作用高于1%的山梨酸钾溶液,而对枯草芽孢杆菌的抑制作用与其比较接近;利用荸荠英提取物能有效防止彩色水果番茄贮藏过程中由根霉和链格孢引起的腐烂,与根霉相比,荸荠英提取物对链格孢的抑制效果更好。     

泡菜中植物乳杆菌的鉴定及其发酵液抑菌活性研究

从山东烟台家庭自制泡菜中分离得到1株产抑菌物质的乳酸菌菌株。综合菌株的形态学特征、生理生化特征和16SrDNA序列分析,鉴定该菌为植物乳杆菌并命名为Lactobacillus plantarum QYL-1。该菌株发酵上清液对短小芽孢杆菌(CMCC 63202)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、藤黄微球菌(CMCC28001)、大肠杆菌(ATCC 25922)等有较好的抑菌作用,其中对大肠杆菌(ATCC 25922)的抑菌性最强,表现出广谱抑菌活性。研究对于纯种发酵及乳酸菌的抑菌活性,具有一定的启发和借鉴价值。     

玉米芯功能性低聚糖分级纯化及抗氧化活性研究

探究玉米芯功能性低聚糖分级纯化前后不同组分的组成、理化性质和抗氧化活性。以玉米芯为原料,采用活性炭柱层析法对玉米芯功能性低聚糖进行分级纯化,对纯化前后组分的聚合度、相对分子质量、阿魏酸基团以及红外光谱特性进行分析,并对酶解低聚糖粗提物(EH)及其纯化组分的自由基清除能力和抑制脂质过氧化能力进行比较分析。结果表明：活性炭水洗脱低聚糖组分(WO)、醇洗脱低聚糖组分(EO)均主要由木糖和阿拉伯糖组成,其中WO含有结合态阿魏酸,为阿魏酰阿拉伯低聚木糖;EO不含结合态阿魏酸,为阿拉伯低聚木糖。EH及其纯化组分WO、EO均具有一定的清除自由基(DPPH·、·OH、ABTS⁺·)能力和抑制脂质过氧化能力,且随浓度的增加而增加,WO抗氧化活性最强,EH次之,EO抗氧化活性较弱。     

黄酒酿造浸米水中抑菌物质的分离纯化鉴定及其活性的测定

以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为指示菌来标记跟踪黄酒浸米水中的抑菌物质,并将除杂后的样品经G-25凝胶柱分离纯化,收集不同的洗脱峰组分,用药敏片法筛选具有抑菌作用的组分,并用高效液相色谱（HPLC）法对抑菌物质进行鉴定。结果表明,浸米水中的抑菌物质为乳酸链球菌素（nisin）,对其抑菌活性进行测定,表明浸米水中的乳酸链球菌素具有良好的抑菌活性。     

海参酶解产物的分离及其体外抗氧化作用的研究

从海参酶解产物中分离制备海参肽.并研究其体外抗氧化作用。采用超滤、冷冻干燥方法分离不同分子质量范围的海参肽;采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH),研究海参肽的抗氧化活性;经Sephadex G-25和反相高效液相色谱对抗氧化海参肽进行进一步分离。结果表明,分子质量在1000～3000u的海参肽表现出很强的抗氧化作用,对DPPH自由基的清除能力强于V_E,其再经Sephadex G-25分离得到海参肽Ⅰ的抗氧化活性最强,对DPPH自由基的清除率达56.3%(1mg/mL),海参肽Ⅰ经反相高效液相色谱将分离得到2个海参多肽组分.     

Electroseparation of an antibacterial peptide fraction from snow crab by-products hydrolysate by electrodialysis with ultrafiltration membranes

Recently, a snow crab by-products hydrolysate has demonstrated antibacterial properties due to a peptide with a molecular weight of about 800 Da, but only at high concentration. Consequently, peptide hydrolysate has been fractionated to obtain peptides in a more purified form. The aim of this work was to separate a snow crab by-products hydrolysate by electrodialysis with ultrafiltration membranes (EDUF). EDUF, which allows separation of molecules according to their charges and molecular weights, was used to recover and concentrate the active antibacterial fraction. Two different ultrafiltration membranes (20 and 50 kDa) and two electrical field strengths (2 and 14 V/cm) were used as separation parameters. After EDUF separation, the 300-600 Da peptide molecular weight range was the most recovered with an abundance of 94%. Moreover, fractionation at 14 V/cm with ultrafiltration membranes of 50 kDa allowed the recovery of an anionic fraction which showed antibacterial properties on Escherichia coli ATCC 25922 and Listeria innocua HPB 13.     

蚕豆蛋白酶解物分离纯化及降胆固醇活性

采用凝胶过滤色谱对经过大孔吸附树脂纯化的蚕豆蛋白酶解物进行分离纯化,以期得到高降胆固醇活性的酶解物组分。结果表明:单因素试验得到蚕豆蛋白酶解物凝胶过滤色谱最佳分离纯化工艺条件为Sep G-10、G-25葡聚糖凝胶为柱填充材料,10 mg/m L的酶解液上样量4 m L,洗脱剂为去离子水,洗脱流速1 m L/min。凝胶过滤色谱分离纯化后得到F1~F6 6个蚕豆蛋白酶解物组分;与10 mg/m L考来烯胺散阳性对照比较,F3、F6组分对3种胆酸盐(胆酸钠、甘氨胆钠酸、牛磺胆酸钠)抑制率均高于阳性对照,其中F6组分的相对抑制率最高,分别为(274.98±0.19)%、(140.22±0.20)%、(130.99±0.22)%。     

棉籽抗菌活性肽的分离纯化及鉴定

通过体外模拟消化系统对棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI)进行酶解,得到具有抗菌活性的酶解产物,并采用超滤(ultrafiltration,UF)、阴离子交换色谱(anion exchange chromatography,AEC)、半制备高效液相色谱(semi-preparation high performance liquid chromatography,semi-P-HPLC)分离技术对棉籽抗菌活性肽进行分离纯化,用电喷雾串联质谱(electrospray ionization-tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)鉴定棉籽抗菌肽的氨基酸序列。在抗菌活性肽分离纯化过程中,用UF对具有抗菌活性的CPI酶解产物进行分离,得到3个组分U-Ⅰ~U-Ⅲ。抗菌活性检测表明U-Ⅲ的抗菌能力最强;用AEC分离U-Ⅲ得到3个组分QF-Ⅰ~QF-Ⅲ,其中QF-Ⅱ抗菌能力最强;进一步采用semi-P-HPLC分离QF-Ⅱ得到4个组分PF-Ⅰ~PF-Ⅳ,其中PF-Ⅲ的抗菌能力最强,经HPLC检测为单一峰,ESI-MS/MS检测分析得到该肽的氨基酸序列为ISGLIYEETR(Ile-Ser-Gly-Leu-Ile-Tyr-Glu-Glu-Thr-Arg)。     

发酵对小根蒜挥发性物质、有机硫化合物及其抗氧化活性的影响

为了研究新鲜小根蒜经发酵后,其挥发性物质变化情况及有机硫化物抗氧化活性变化。采用GC-MS方法检测了新鲜小根蒜及其发酵产品中的挥发性物质,并对比了分离纯化后的主要挥发性物质—有机硫化物组分抗氧化活性。结果显示,共检测到了39种挥发性物质,主要由醛、醇、酯、酸及有机硫化物组成,其中新鲜小根蒜含有27种,发酵小根蒜中仅含有23种。小根蒜发酵后挥发性物质消失了16种,主要有1,3-二噻烷、丙醛、丙烯基甲基硫醚、戊醛、己醛、二甲基四硫醚、甲基丙烯基二硫醚等;新增12种,主要有乙酸、2-丁醇、1,2-丙二醛等;10种挥发性物质减少,主要有甲醇、二甲基三硫醚、二甲基二硫醚等硫醚类物质。将新鲜小根蒜及其发酵产品中的有机硫化物进行分离纯化并对纯化后的各组分进行了DPPH自由基清除能力、Fe2+螯合能力、·OH清除能力、总还原能力4个方面的抗氧化活性研究,发现新鲜小根蒜分离纯化液的第2个组分,其·OH清除能力及总还原能力较强。而发酵小根蒜分离纯化液的第1个组分,其DPPH自由基清除能力和总还原能力较强。     

麦胚降血糖肽的分离纯化及鉴定

建立麦胚降血糖肽的分离纯化方法及鉴定活性多肽的结构组成。采用胰蛋白酶酶解麦胚蛋白,得到降血糖多肽,并进行降血糖动物实验。超滤获得高活性组分,离子交换吸附实验选择最佳的树脂,并对麦胚降血糖肽进行离子交换吸附分离,SephadexG-25和SephadexG-15分离,再经过反相高效液相色谱（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）分离高活性成分。最后采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-electrospray ionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS）鉴定活性多肽的结构组成。结果显示酶解麦胚蛋白对α-葡萄糖苷酶的抑制性IC50为10.98?mg/mL,能够缓解糖尿病小鼠的症状。超滤获得分子质量小于5?kDa的高活性组分,IC50为1.60?mg/mL。732型阳离子交换树脂的分离效果最好,2.5%氨水的洗脱率为98.13%,通过动态离子交换吸附分离后,活性显著提高,IC50为0.30?mg/mL。通过SephadexG-25和SephadexG-15分离得到高活性组分,经RP-HPLC分离得到8?个组分（峰）,其中1号峰的活性和含量都最高,IC50为0.098?mg/mL。HPLC-ESI-MS结果显示m/z?274.45的丰度比较高,经离子碎片拼接,共有7?种多肽,其中二肽有1?种,三肽有6?种。本研究对于开发具有降血糖功效的新型功能性食品有一定的作用。     

辣木叶蛋白质酶解产物的制备及其抗菌活性研究

为了研究辣木叶蛋白及其酶解产物的抗菌活性,利用碱提酸沉法提取辣木叶中的蛋白质,并分析其氨基酸组成;分别采用6种单酶和3种复合酶对辣木叶蛋白进行酶解,考察辣木叶蛋白及其酶解产物的抑菌活性,确定最佳蛋白酶。通过二倍稀释法,研究有效抑菌组分对不同菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。结果显示:辣木叶蛋白提取率为32.67%±0.45%,必需氨基酸占氨基酸总量的39.27%。抑菌活性研究表明辣木叶蛋白仅对金黄色葡萄球菌显示抑菌活性,抑菌圈大小为(7.67±0.24) mm;胃蛋白酶结合胰蛋白酶分步酶解蛋白所得酶解产物抑菌能力均高于其他几种蛋白酶,酶解产物对化脓性链球菌的抑菌活性最强,抑菌圈大小为(10.83±0.62) mm,且其对金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌及化脓性链球菌的MIC分别为5、10、2.5 mg/mL。说明辣木叶蛋白及其酶解产物均有抗菌活性,双酶酶解法制备的酶解产物具有较强的抑菌性及广抑菌谱。     

溶菌酶酶解物的抗菌活性研究

目的:考察溶菌酶酶解物的抑菌能力,为扩展溶菌酶的应用提供理论依据。方法:采用胃蛋白酶对溶菌酶进行酶解,得到溶菌酶酶解物(Lysozyme hydrolysate,LH);采用二倍稀释法检测LH对几种常见食品腐败菌的抑菌能力;以金黄色葡萄球菌为受试菌种,通过抑菌圈实验探讨LH的抑菌活性,并与溶菌酶和乳酸链球菌素作比较。结果:LH对几种常见阳性菌都有很强的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;未经热处理时,LH的抑菌活性略低于溶菌酶,而高于乳酸链球菌素;经热处理后,LH的抑菌活性高于溶菌酶和乳酸链球菌素。菌酶酶解物有望被开发成一种天然的食品防腐剂。