人心肌酸性铁蛋白与肝癌关系的研究

从人心肌组织中提纯了酸性铁蛋白,免疫家兔产生抗血清,氯胺-T法制备了~(125)Ⅰ-酸性铁蛋白和~(125)Ⅰ-抗酸性铁蛋白H亚基单抗。分别采用平衡法和顺序饱和法建立了酸性铁蛋白放射免疫分析和酸性铁蛋白H亚基免疫放射测量分析。它们的批内CV分别为1.65％和2.44％,批间CV为9.71％和10.16％,回收率为102％和92.29％,ED_(50)为27.50μg/L和23.05μg/L。前者的可测范围为7.0～369.6μg/L,后者的灵敏度为0.736μg/L。两方法与甲胎蛋白、癌胚抗原和乳铁蛋白均无交叉反应,与铁蛋白的交叉反应分别为1.74％和3.13％。分析各年龄组正常人血清酸性铁蛋白含量发现其受性别和年龄影响;酸性铁蛋白分析肝癌的敏感度为73.05％,基本不受非癌性肝病的干扰;八种恶性肿瘤诊断试验评价结果显示,酸性铁蛋白含量对肝癌的诊断价值最高。酸性铁蛋白H亚基分析表明:在肝癌患者血清中的含量显著高于正常参考值。建议将上述两种方法与甲胎蛋白分析进行平行试验,提高肝癌的诊断水平。     

蛋白C系统的放射免疫分析

蛋白C系统是机体重要的凝血反应调节系统,该文组合生化和免疫化学技术分别从人尿中提纯了血栓调节素和从利凡诺去白蛋白人血浆中纯化了蛋白C、蛋白S和蛋白C抑制物。免疫家兔产生抗血清。用氯胺T法制备了~(125)Ⅰ-蛋白C和~(125)Ⅰ-蛋白S,Iodogen法制备了~(125)Ⅰ-蛋白C抑制物,Bolton-Hunter法制备了~(125)Ⅰ-血栓调节素。采用平衡法分别建立了上述四种化合物的放射免疫分析。蛋白C、蛋白S、蛋白C抑制物和血栓调节素的分析灵敏度分别为3.94μg/L、9.87μg/L、2.58μg/L和6.16μg/L;批内和批间CV为4.40％和9.68％、4.99％和13.14％、2.73％和8.62％、5.10％和10.94％;平均回收率为104.28％、94.30％、101.89％和105.22％;工作范围为6.25～1024μg/L、21～700μg/L、4.8～1024μg/L和8.1～560μg/L。四种方法与其检测的相似化合物均无交叉。初步应用效果满意,该方法可为血栓栓塞性疾病的诊疗提供有效手段。     

~(125)I-6-酮-前列腺素F_(1α)放射免疫分析试剂盒的研制

研制了~(125)I标记的PGI_2稳定的代谢产物6-酮-PGF_(1α)RIA试剂盒。以碳化二亚胺法将6-酮-PGF_(1α)与BSA联接免疫家兔制备抗血清,其效价为1:32000,平衡常数为6.26×10~9L/mol,与其它前列腺素的相对百分交叉反应<1%。用氯胺T法制备~(125)I-组织胺-6-酮-PGF_(1α)标记物,比放射性活度>14.8MBq/μg(400μCi/μg),最高结合率>80%,二月内无脱碘现象。放免测定按常规法,最低检出值为2,2pg/管,检出率为97.2～102.3%,精密 度为6.62%,批内和批间C.V.分别为7.17、8.41%,Cerceo“效点系统”评分为31分,属优良。直接测定健康成人血浆6-酮-PGF_(1α)浓度为22.9±6.3pg/mL。     

血清结合甘胆酸放射免疫分析药盒研制(阻断法)

人血清中结合甘胆酸含量测定,采用阻断法放射免疫分析药盒,达到直接测定血样中结合甘胆酸的含量。本药盒以~(125)I-甘胆酸组胺为标记抗原,放化纯>90%。用去激素正常人血清配制系列标准,标准浓度分别为0.25.100.250.1000.4000μg/dl。兔抗血清,16~#兔抗血清亲和常数K=2.6×10~8l/mol。以0.5%ANS(8-苯胺-1-萘磺酸)磷酸盐缓冲溶液为阻断剂。PEG(聚乙二醇)为分离沉淀剂。本药盒分析灵敏度10μg/dl。批内批间精密度分别为4.7%和12.5%。平均回收率109%。     

CA125时间分辨荧光免疫分析

以CA125单克隆抗体固相包被,用平衡饱和法与CA125、Eu^3 标异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸－CA125单抗形成三层夹心,以β－二酮体为增强液,建立CA125的时间分辨荧光免疫分析法。数据采用Logit-Log函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。方法的批内和批间CV分别为4．5％和4．0％,平均回收率96．7％,灵敏度3．3μg/L,可测范围为16－2062μg／L。本法与CEA无交叉,与AFP有4．6％交叉,与β－HCG有12．4％交叉。测定结果与进口IRMA试剂盒相比较,相关系数为0．999,结果呈高度相关。     

甲状腺球蛋白抗原固相放免法的建立及初步临床应用

利用自制的甲状腺球蛋白(Tg)单克隆抗体,建立了Tg固相放射免疫分析方法,其灵敏度为0.35μg/L,回收率达98%,批内CV4.1%,批间CV8.7%.50例健康人的Tg测定值为11.12±4.83μg/L,检测范围为2.99～20.16μg/L;同时对140例各种甲状腺疾病患者的血清Tg含量进行检测,并与Tg双抗法进行对比,结果表明固相法检测范围明显较双抗法宽.     

3H11的~(123)I标记及其生物分布

采用Iodogen氧化法对胃癌单克隆抗体3 H11进行了123I标记,用PD-10层析柱分离纯化标记物,纸层析法测定标记物的标记率和放化纯度,评价标记物的体外稳定性,并观察了标记物在正常小鼠体内的生物分布。标记结果显示,123I-3 H11的优化标记条件为:Iodogen 10μg、3 H11 30μg、Na123I溶液20μL(13.3 MBq)、磷酸盐缓冲溶液100μL(pH7.4、0.2 mol/L)、常温下反应8 min,123I-3 H11标记率70%~80%;稳定性结果显示,标记物在4℃人血清中的体外稳定性较好,放置48 h后放化纯度92%;正常昆明鼠体内生物学分布显示,全抗3 H11血液半清除时间为12.25±0.25 h,胃组织有明显摄取。以上结果提示,123I-3 H11是一种很有前景的肿瘤放射免疫显像剂。     

~(125)I-DNA的制备

~(125)I-DNA是个重要的标记化合物,在生物学、免疫学、病理学和某些疾病的临床诊断、愈后观察等方面都具有十分重要的意义。因此,寻找简便的方法制备~(125)I-DNA是急需解决的问题。最初,人们用一氯化碘法制备~(125)I-DNA,需把DNA转化成溶于有机溶剂的盐,从而导至DNA降解,影响了产品质量;继后采用N-典丁二酰亚胺法制备~(125)I-DNA,但~(125)I-DNA的比放射性很低。近期,人们采用生物标记法即~(125)I-脱氧尿嘧啶核苷(~(125)I-UdR)由大肠杆菌转化生成~(125)I-DNA。用这种方法制得的~(125)I-DNA具有较好的生物活性和纯度,其缺点是操作十分繁杂,~(125)I的利用率低,~(125)I-DNA的比放射性也很低。另外,还用三氯化铊法制备~(125)IDNA,虽然方法简便,~(125)I-DNA的比放射性也较高,但是三氯化铊不稳定,必须新鲜配制,使用十分不便。本文采用三氧化二铊制备~(125)I-DNA,克服了上述缺陷。~(125)I利用率达30～60％,~(125)I-DNA的比放射性达10μCi/μg,放射性杂质小于1％。方法十分简便,利于推广使用。     

蛋白C系统的放射免疫分析

蛋白C系统是机体重要的凝血反应调节系统,该文组合生化和免疫化学技术分别从人尿中提纯了血栓调节素和从利凡诺去白蛋白人血浆中纯化了蛋白C、蛋白S和蛋白C抑制物。免疫家兔产生抗血清。用氯胺T法制备了~(125)I-蛋白C和~(125)I-蛋白S,Iodogen法制备了~(125)I-蛋白C抑制物,Bolton-Hunter法制备了~(125)I-血栓调节素。采用平衡法分别建立了上述四种化合物的放射免疫分析。蛋白C、蛋白S、蛋白C抑制物和血栓调节素的分析灵敏度分别     

~(125)I-SOD氯胺T法和Iodogen法标记条件的研究

选用正交设计L_(16)(4~5)表对影响~(125)I-SOD氯胺T标记法的5个影响因素(即标记温度、氯胺T加入量、标记反应时间、PB缓冲溶液的浓度和体积),每个因素分4个水平进行了研究。标记产物~(125)I-SOD用Sephadex G25色层柱进行分离,并测定了标记率和相对活性,仅做16组试验就得出了最佳标记条件。在此基础上又用正交设计L_9(3~4)表对~(125)I-SOD Iodogen因相标记法进行了研究。取Idosen加入量、标记温度和反应时间3个因素,每个因素3个水平,仅做9组试验,就确定了最佳标记条件:对20μg SOD而言,Iodogen为50μg,标记温度为15℃,反应时间为15min时,~(125)I的标记率可达79.0％,~(125)I-SOD的放化纯度达95.7％,相对活性达98.2％,比活度达2.92×10~5Bq/μg,明显优于氯胺T法。     

~(125)I-SOD氯胺T法和Iodogen法标记条件的研究

选用正交设计L_(16)(4~5)表对影响~(125)I-SOD氯胺T标记法的5个影响因素(即标记温度、氯胺T加入量、标记反应时间、PB缓冲溶液的浓度和体积),每个因素分4个水平进行了研究。标记产物~(125)I-SOD用Sephadex G25色层柱进行分离,并测定了标记率和相对活性,仅做16组试验就得出了最佳标记条件。在此基础上又用正交设计L_9(3~4)表对~(125)I-SOD Iodogen固相标记法进行了研究。取Iodogen加入量、标记温度和反应时间3个因素,每个因素3个水平,仅做9组试验,就确定了最佳标记条件:对20μg SOD而言,Iodogen为50μg,标记温度为15℃,反应时间为15min时,~(125)I的标记率可达79.0％,~(125)I-SOD的放化纯度达95.7％,相对活性达98.2％,比活度达2.92×10~5Bq/μg,明显优于氯胺T法。     

消脂素的间接碘标记法与直接碘标记法的对比研究

间接碘标记法是先以氯胺T（ch-T）法标记对羟基苯丙酸琥珀酰亚胺脂（Bolton-hunter试剂,BH试剂）,制备125I-BH,然后于冰浴中与LEP联结,得到125I-LEP;直接碘标记法是以ch-T法按常规对LEP直接进行标记。结果显示,间接碘标记法标记的125I-LEP放射性比活度为1．43MBq／μg,125I的总标记率为37．8％,所建立的RIA的灵敏度为0．25μg/L,在45天内标准曲线（0．5-30μg／L）稳定,B：Bo位于92．7％-17．5％到94．6％-22．8％之间。直接法制备的125I-LEP,放射性比活度为1．79MBq／μg,125I的总标记率为41．4％,方法灵敏度为0．37μg/L。在44天内标准曲线（0．5～30μg／L）亦较稳定,B：B0位于87．7％～23．7％到91．4％-35．2％之间。表明两方法的标准曲线稳定性在45天内差异不大,均能满足临床工作的需求。     

癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分析

采用了两株CEA单克隆抗体(McAb),一株用于固相包被,另一株用于标记制备125I-CEAMcAb,研制了一步法CEA免疫放射分析(IRMA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.5μg/L,批内变异系数＜10.0%,批间变异系数＜15.0%,回收率为97.4%～108.9%,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参考值＜10.0μg/L.     

癌胚抗原(CEA)固相包被管法免疫放射分析

采用了两株CEA单克隆抗体(McAb),一株用于固相包被,另一株用于标记制备125I-CEAMcAb,研制了一步法CEA免疫放射分析(IRMA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.5μg/L,批内变异系数＜10.0%,批间变异系数＜15.0%,回收率为97.4%～108.9%,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参考值＜10.0μg/L.     

Iodogen法~(125)I标记单克隆抗体10D9

采用Iodogen法,选择最佳标记条件进行12525I标记单克隆抗体10D9.标记产物用Sephadex G-50分离纯化,三氯醋酸(TCA)法测定标记率和放化纯,并对标记物的免疫活性及稳定性进行分析.结果显示,125I标记10D9的最佳条件为Iodogen用量10μg、10D9用量20μg、加入Na125I22.2MBq、室温反应8min,125I-10D9的标记率为(84.10±3.18)%,放化纯为(98.49±1.14)%,比活度为933.51 MBq/mg;125I-10D9与Daudi细胞的特异性结合率为(23.21±1.14)%;标记物加到含1%BSA的PBS中放置3W后放化纯度仍>90%.结果表明:Iodogen法125I标记10D9标记率和放化纯高,方法简便,标记物的稳定性好且能较好地保持其免疫活性.     

~(125)I-白三烯B_4放射免疫分析药盒的研制及临床应用

用高效液相层析法从猪血PMNL中提取白三烯B_4(LTB_4)。将LTB_4与牛血清白蛋白联接后免疫家兔制备抗血清。抗体效价1:7000;抗体的亲和常数为2.1×10~9L/M;与LTA_4、 LTC_4、LTD_4及其它花生四烯酸代谢物的交叉反应率为0.4％～6.4％。用氯胺T法制备~(125)I-LTB_4示踪剂。放免测定的最低检出值为25pg/管;检出率为84.2％～113％,批内CV与批间CV分别为5.2％与9.7％。正常人多形核白细胞经钙离子载体A23187与花生四烯酸刺激后生成的LTB_4量为695.5±329.7pg/10~6细胞。各种急性白血病与慢性粒细胞白血病病人的PMNL产生血栓烷B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(1a)(6-附-PGF_(1a))与LTB_4的能力均有不同程度的增加。急性脑血栓与急性心肌梗塞PMNL的LTB_4生成也有增加的趋势,但脑溢血与非梗塞冠心病无明显改变。     

~(125)I-白三烯B_4放射免疫分析药盒的研制及临床应用

用高效液相层析法从猪血PMNL中提取白三烯B_4(LTB_4)。将LTB_4与牛血清白蛋白联接后免疫家兔制备抗血清。抗体效价1:7000;抗体的亲和常数为2.1×10~9L/M;与LTA_4、LTC_4、LTD_4及其它花生四烯酸代谢物的交叉反应率为0.4％～6.4％。用氯胺T法制备~(125)I-LTB_4示踪剂。放免测定的最低检出值为25pg/管;检出率为84.2％～113％,批内CV与批间CV分别为5.2％与9.7％。正常人多形核白细胞经钙离子载体A23187与花生四烯酸刺激后生成的LTB_4量为695.5±329.7pg/10~6细胞。各种急性白血病与慢性粒细胞白血病病人的PMNL产生血栓烷B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(lα)(6-酮-PGF_(lα))与LTB_4的能力均有不同程度的增加。急性脑血栓与急性心肌梗塞PMNL的LTB_4生成也有增加的趋势,但脑溢血与非梗塞冠心病无明显改变。     

^125I—雌二醇？6—肟—碘代组胺的制备

文章介绍了以17β-雌二醇(17β-E_2)为底物,合成制备雌二醇-6-肟-组胺,用~(125)I碘化后,经一步硅胶GF_(254)薄板层析(TLC)分离,即可得到~(125)I-雌二醇-6-肟-碘代组胺的方法。用自身置换法测定比活度约74MBq/μg。并对其免疫活性进行了实验。与过量抗体(10倍)结合率平均82.5%(n=3)。认为是建立17β-雌二醇放射免疫分析方法比较理想的试剂。     

几种核素放射性标准溶液的研制(英文)

放射性标准溶液属标准物质类,它是一种重要的标准器具,可用于量值和比对工作中。文中介绍了按制备放射性标准溶液的要求研制的~(60)Co,~(90)Sr-~(90)Y,~(137)Cs,~(134)Cs,~(63)Ni,~(241)Am,~(125)I,~(131)I等8个核素的标准溶液。选择溶液的介质条件为20～50μg稳定载体/g溶液,酸度为0.1mol/L的盐酸。碘的放射性溶液调成碱性并加入适当量的稳定剂。溶液经过长期的考察是均匀和稳定的,量值准确可靠。给出的上述核素标准溶液不确定度分别为:0.10％,0.27％,0.18％,0.12％,0.24％,0.18％,0.20％,0.22％(1σ)。     

几种核素放射性标准溶液的研制

放射性标准溶液属标准物质类,它是一种重要的标准器具,可用于量值和比对工作中。文中介绍了按制备放射性标准溶液的要求研制的~(60)Co,~(90)Sr-~(90)Y,~(137)Cs,~(134)Cs,~(63)Ni,~(241)Am,~(125)Ⅰ,~(131)Ⅰ等8个核素的标准溶液。选择溶液的介质条件为20～50μg稳定载体/g溶液,酸度为0.1 mol/L的盐酸。碘的放射性溶液调成碱性并加入适当量的稳定剂。溶液经过长期的考察是均匀和稳定的,量值准确可靠。给出的上述核素标准溶液不确定度分别为:0.10％,0.27％,0.18％,0.12％,0.24％,0.18％,0.20％,0.22％(1σ)。