广谱性抗体的制备及其在食品安全快速检测中的应用进展

“民以食为天,食以安为先”,在追求效益的时代背景下,危害物的高通量高效率检测成为食品安全快速检测领域发展的新趋势。基于广谱性抗体的免疫检测法凭借其检测通量高、检测时间短、样品消耗少、总成本低等优点为多危害物同时快速检测提供了一种新思路。该文指出了广谱性抗体的3种主要制备方法及优缺点,分析了提高广谱性抗体广谱性及亲和力的常用策略,并对其在毒素类、农兽药类残留及其他常见食品危害物检测中的应用现状进行综述。该文对广谱性抗体目前存在的制备盲目性和检测灵敏性较差两大主要限制因素进行总结分析,并展望了广谱性抗体在食品安全领域的发展趋势。     

基于核酸适配体建立的小分子危害物检测技术研究进展

食品中小分子危害物污染是重要的食品安全问题之一,加强其污染水平监测十分必要,通常采用的仪器法和免疫分析法均无法实现对其的快速简便检测。核酸适配体作为抗体的替代分子,有制备周期短、易改造、亲和力高等优点,在食品中小分子危害物监测领域有着十分广阔的应用前景。目前基于核酸适配体建立的快速检测食品中小分子危害物的方法主要包括纳米金/荧光比色法、电化学传感法、酶联适配体法、时间分辨荧光法、荧光偏振荧光法、荧光共振能量转移法。本文综述了上述各方法的研究进展,并列出了各方法的优缺点,可作为实际检测中选择最合适方法的参考。     

适体在抗生素残留检测中的应用

目前虽然已有氯霉素、新霉素等抗生素抗体应用于食品检测中,但作为半抗原,抗生素抗体制备困难。抗生素种类繁多,抗体使用成本高,大样本筛查困难,灵敏度低等缺陷限制了抗体在检测中的应用。而DNA 或RNA 适体被称作化学抗体,可以高特异、高亲和力地同靶分子结合。与传统免疫抗体相比,在筛选制备、稳定性及应用等方面都显示出独特的优势。本文对适体的发现、特点及筛选方法进行综述,介绍适体在抗生素及其他小分子检测中的主要应用技术,并对适体的检测应用进行展望。     

美拉德反应对产品风味品质的影响及其衍生危害物研究进展

在食品加工过程中,美拉德反应虽然对提升食品的风味和品质具有重要作用,但也会衍生一些化学危害物。本文综述了美拉德反应对食品风味和色泽等品质的影响,以及美拉德反应产物的抗氧化和抗突变等特性,同时也探讨了美拉德反应产生的丙烯酰胺(acrylamide,AA)、杂环胺(heterocyclic amines,HAs)和晚期糖基化末端终产物(advanced glycation end products,AGEs)等化学危害物的生成机制、分析和抑制方法。由于3类危害物在食品中的含量较低(ng/g~μg/g)且基质非常复杂,因此其检测均需要采用固相萃取等方法进行分离富集,随后可采用超高效液相色谱串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)等方法进行定性定量分析。危害物的抑制主要通过采用更加温和的加工方法、调整工艺参数和添加香辛料及酚类等天然抗氧化物质来实现。     

环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定

通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星- 牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA),用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物。利用制备的CIP-BSA 偶联物作为免疫原,免疫Balb/c 小鼠,用杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体,并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定。结果表明：CIP-BSA 的偶联比为30:1。经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选,共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2)。这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12 × 106、2.56 × 106,亲和力常数分别为2.88 × 109、2.46 × 109L/mol,两抗体均为IgG1a,取亲和力高的JY-1 进行竞争抑制测定,IC50 值可以达到9.83ng/mL。该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为95%。通过验证得到的JY-1 细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测。     

真菌毒素免疫分析中新型检测元件的研究进展

真菌毒素免疫分析是基于抗体与真菌毒素间的相互作用 . 虽然具有高亲和力及特异性的抗体制备技术已非常成熟,但代替传统抗体或真菌毒素的新型检测元件越来越受到人们的关注.这些元件分为以重组抗体片段为代表的重组类检测元件,如单链抗体,以化学法人工合成的合成类检测元件,如分子印迹聚合物,及其他用于取代真菌毒素标准品的检测元件,如抗独特型抗体.本文重点综述了新型真菌毒素检测元件的研究进展,及其在真菌毒素免疫分析中的应用前景.     

核酸适配体在食品危害物多靶标检测中的应用进展

文章总结了已报道筛选获得的致病菌、生物毒素、抗生素、兽药、农药、重金属等食品危害物核酸适配体现状,重点综述了近年来利用核酸适配体技术实现食品危害物多靶标检测研究进展,并展望了其未来发展方向。     

SELEX技术及其应用研究

配体指数级富集系统进化技术(SELEX)是一种新型的体外筛选技术,其筛选的核酸配基具有靶分子范围广、亲和力和特异性高、稳定性好、制备方便等优点.适配子的功能类似于抗体但明显优于抗体,预测在临床治疗和药物开发等方面具有广泛的应用前景.     

多重免疫层析检测技术在食品安全快速检测中的研究进展

随着农业及食品行业突飞猛进地发展，随之产生的多种有毒有害物质共存于食品样品中的问题日趋严重，对人类健康及经济发展造成巨大威胁，开发同时检测多重危害物的高效快速检测平台对于保障食品安全具有重要的现实意义。基于抗原抗体特异性反应的多重免疫层析快速检测技术因具有成本低廉、便携快速等特点，且可进一步提高检测效率，同时能够提供更为丰富准确的样品信息，为食品中多种危害物的同时检测提供了技术保障。文章首先综述了不同标记材料在多重免疫层析检测技术中的应用，并就多重免疫层析检测技术于食品中有毒有害物质如真菌毒素、食源性致病菌、农兽药残留等的检测应用进行总结与分析，最后对其在食品安全快速分析检测中面临的挑战和发展前景做出讨论，以期为食品安全多重快速检测方法的建立提供参考。     

肉类休闲食品品质提升与安全控制研究进展

随着经济的快速发展与人民消费水平的不断提升,肉类休闲食品产业也随之快速发展。肉类休闲食品属于零食的一种,是人们在闲暇时所享用的食品,也是快速消费食品中重要的组成部分之一。肉类休闲食品种类繁多,在味道、便利、营养、口感和健康方面备受人们青睐。与此同时,随着消费理念不断更新,肉类休闲食品品质与食品安全问题日益受到关注。肉类休闲食品在目前的发展面临诸如肉制品的品质较低等问题,因此需要提升其品质,尤其是在减盐、减糖、减脂、增鲜等方面。在食品加工中存在一些危害物等安全隐患,如化学性、物理性及加工伴生危害物等,需要建立起检测技术和控制技术以做到安全控制。基于此,文章系统性总结了肉类休闲食品品质提升的方法及安全控制领域近十年来的研究进展,以期为肉类休闲食品品质安全保证及产业升级提供借鉴与参考,进而促进肉类休闲食品产业的高质量发展。     

黄曲霉毒素新型抗体制备研究进展

免疫学检测方法具有快捷、灵敏、特异性高的特点,在毒素的定量和定性方面已获得了快速的发展,成为毒素检测方法的研究热点。而高质量抗体的制备是建立特异性强、灵敏度高的免疫分析方法关键。目前主流研究和应用的抗体是单克隆抗体,其性质稳定,特异性强,灵敏度高。随着抗体技术的发展,重组抗体在免疫检测领域也逐渐应用。与多克隆抗体、单克隆抗体相比较而言,重组抗体具有独特的优势,可以在原核表达体系里短时间内大量生产且生产费用低廉,对黄曲霉毒素的低成本、大规模检测有重要的应用价值。本文重点阐述和分析了黄曲霉毒素单克隆抗体、重组抗体制备过程中存在的影响因素及问题,并对未来黄曲霉毒素抗体的发展前景进行了展望。     

Comparative Study of Monoclonal and Recombinant Antibody-Based Immunoassays for Fungicide Analysis in Fruit Juices

A comparative study of the analytical performance of enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), based on monoclonal and recombinant antibodies, for the determination of fungicide residues in fruit juices has been carried out. To this aim, three murine hybridoma cell lines secreting specific monoclonal antibodies against (RS)-2-(2,4-dichlorophenyl)-3-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)propyl-1,1,2,2-tetrafluoroethyl ether (tetraconazole), 2-(4-triazolyl)benzimidazole (thiabendazole), and (RS)-1-(β-allyloxy-2,4-dichlorophenylethyl)imidazole (imazalil) were used as a source of immunoglobulin gene fragments for the production of single-chain variable fragment (scFv) and fusion scFv-pIII recombinant antibodies in Escherichia coli. Selected recombinant antibodies displayed cross-reactivity profiles very similar to those of the parent monoclonal antibodies. Imazalil and tetraconazole recombinant antibodies showed one order of magnitude lower affinity than their respective monoclonal antibodies, whereas the thiabendazole recombinant antibodies showed an affinity similar to that of their parent monoclonal antibody. On the other hand, scFv-pIII fusion fragments showed similar analytical properties as, and occasionally better than, scFv recombinant antibodies. Finally, ELISAs developed from each antibody type showed similar analytical performance when applied to the analysis of the target fungicides in fruit juices.     

基于人工模拟抗体的酶联检测技术在食品安全检测中的应用

广义人工模拟抗体包括适配体、重组受体、分子印迹聚合物及多肽。人工模拟抗体与传统抗体相比优势显著,其具有易实现工业化生产、成本低、保存方便、可反复使用等特点。酶联检测技术是人工模拟抗体在食品安全检测中应用最为广泛的技术。本文综述了人工模拟抗体的特点以及基于人工模拟抗体的酶联检测技术在食品安全检测中的应用。     

The biomimetic immunoassay based on molecularly imprinted polymer: a comprehensive review of recent progress and future prospects

Immunoassay, based on a selective affinity of the biological antibody for its antigen, is one of the most usual analytical methods in food safety and environmental chemistry. However, it presents several drawbacks because of the nature of the antibody. Molecular imprinting technique, due to its high selectivity and stability, ease of preparation and low cost, has shown great potential in producing artificial antibodies in biomimetic immunoassays. This article focuses on the recent states, advantages, current problems and outlooks of molecularly imprinted radio, fluoro, enzyme-linked and chemiluminescent immunoassays, and biomimetic immunosensor, with special emphasis on the challenges in developing biomimetic enzyme-linked immunosorbent assays (BELISAs). The biomimetic immunoassay method will provide an important new analysis platform in food safety, although the sensitivity and specificity is relatively low. PRACTICAL APPLICATION: As a new simple analysis method, the biomimetic immunoassay has attractive prospect, although some limitations were existed in real-sample assay. In this critical review, some promising solutions for overcoming its drawbacks were put forward, which may promote the more quick development and extensive application of this method in food safety.     

抗生物被膜材料在食品微生物安全领域的应用研究进展

生物被膜的形成给食品安全造成了巨大的影响,严重威胁到人们的身体健康,是全球公认的食品安全危害之一。抗生物被膜材料具有降低微生物危害、减少食品生产及加工过程中交叉污染等优点,已逐渐应用于食品微生物安全领域。基于此,本文首先概述了抗生物被膜材料的定义及制备方法,根据活性物质的种类对抗生物被膜材料进行了详细的分类,并进一步描述了抗生物被膜材料在食品工业的应用现状,最后对抗被膜材料的未来发展进行了展望。本文可为抗生物被膜材料的进一步研究提供理论参考,以促进此类材料在食品微生物安全领域的应用,并为保障食品安全与人类健康提供有效的技术策略。     

赭曲霉毒素A单克隆抗体的体外制备及其重组抗体的构建研究

目的 实现抗赭曲霉毒素A(ochratoxinA,OTA)单克隆抗体的体外制备及其重组抗体表达载体的构建与瞬时转染表达。方法 以前期获得的OTA杂交瘤细胞株(O16)为研究对象,通过无血清驯化培养的方式开展OTA单克隆抗体的体外制备研究;采用简并引物法获取OTA杂交瘤细胞的单克隆抗体编码基因,在此基础上构建OTA重组全长抗体表达载体以及OTA重、轻链可变区基因片段与人源恒定区片段连接的重组嵌合抗体表达载体,并基于哺乳动物细胞系,开展两种重组抗体的瞬时转染表达研究。结果 通过缓降血清浓度的方式对OTA杂交瘤细胞进行无血清驯化,实现了体外培养制备OTA单克隆抗体;在此基础上测得OTA单克隆抗体的重链和轻链基因序列,并成功构建了OTA重组全长抗体表达载体(pCDNA3.4-OTA-H/L)和重组嵌合抗体表达载体(p FUSE-OTA-H/L),通过共转染实现了两者在哺乳动物细胞系中的瞬时转染表达;经间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)确定体外培养制备的OTA抗体、OTA重组全长抗体和嵌合抗体均具备特异性结合抗原的能力,三者的...     

基于HTS-ELISA的单克隆抗体分泌 杂交瘤细胞筛选技术进展

基于单克隆抗体的各类免疫分析技术是现代食品安全快速检测技术发展的主要方向之一,因此,高活性单克隆抗体的制备方法自然为众多研究者所关注。通常单克隆抗体的制备过程涉及到很多技术环节,包括抗原制备、免疫剂量设计、细胞融合、活性杂交瘤细胞筛选以及抗体纯化等,其中分泌单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选环节是单克隆抗体制备的关键一环。 为此,本文主要介绍了一种基于HTS-ELISA的高活性单克隆抗体分泌杂交瘤细胞的筛选技术,重点是对融合细胞的低密度培养、特殊仪器设备和在筛选过程中如何依据拖孔数(Trailing)来判断杂交瘤细胞的活性等相关的原理和技术进行了介绍,旨在为我国高活性单克隆抗体制备技术的发展及加快食品安全快速检测技术的发展提供一个参考方法。     

Broad-specificity immunoassay of low molecular weight food contaminants: new paths to Utopia!

Immunochemical analysis is now a well-established technique that has answered many analytical problems relevant to the agri-food sector, particularly by allowing an increase in sample throughput for assessing food safety and quality. However, to advance the technique beyond relatively simple examples and applications there is a need for antibodies with novel properties, since it is the availability of such antibodies that is the rate limiting step. This short review examines some of the more recent methods that have been adopted by immunochemists to manipulate antibody properties during the development of broad-specificity immunoassays for low molecular weight contaminants of food. These novel approaches include the use of anti-idiotype antibodies, molecular modelling and recombinant antibodies.     

抗黄曲霉毒素B1单链抗体的表达载体的比较

目的：比较4 种不同的pET 载体在表达抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的单链抗体(scFv)克隆的特点,确定用以表达scFv-H4 的合适载体。方法：将目的基因H4 分别克隆到载体pET20b、pET22b、pET28a 和pET32a 上,分别转入大肠杆菌BL21(DE3)或Origami(DE3)中,比较诱导过程中细胞的生长状况和诱导结束后细胞破碎液中scFv-H4的生物活性以及细胞各部分包涵体。结果：pET20b 和pET22b 能表达具有生物活性的scFv-H4,这些具有生物活性的蛋白主要存在于周质中;pET28a 和pET32a 不能表达有生物活性的scFv-H4,而pET32a 仅能在细胞质中产生大量的包涵体。结论：pET22b 可能是表达AFB1 的单链抗体较优的表达载体。