碳酸铵对柑橘酸腐病菌的抑制效果及作用机制

由酸腐病菌引起的酸腐病是柑橘重要的采后病害,目前缺少有效控制酸腐病的杀菌剂.本研究分析了碳酸铵作为通常认为安全的药剂对酸腐病菌的抑菌活性和可能的作用机制.结果显示:碳酸铵可以抑制孢子萌发和芽管伸长,抑制菌丝生长,并且抑制效应与质量浓度呈正相关,在0.8 g/L条件下完全抑制孢子萌发和菌丝生长.进一步分析表明,碳酸铵抑制...     

ε-聚赖氨酸对柑橘酸腐菌的抑菌活性及作用机制

聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)是一种高安全性、可生物降解的天然食品防腐剂,对环境和人体健康无毒性。为探究ε-PL对柑橘酸腐菌(Geotrichum citri-aurantii)的抑菌活性,并分析其抑菌作用机制,本实验测定ε-PL处理对柑橘酸腐菌的菌丝体生长抑制率及孢子萌发抑制率,ε-PL作用下的胞外相对电导率、A_{260 nm}的变化,并采用激光共聚焦显微镜与扫描电子显微镜观察ε-PL处理对细胞膜完整性及菌丝体形态的影响。结果表明:ε-PL对柑橘酸腐菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为400 mg/L,对菌丝生长和孢子萌发抑制的半最大效应浓度分别为128.79 mg/L和214.77 mg/L;质量浓度为1 600、3 200、6 400 mg/L的ε-PL处理可显著降低柑橘果实酸腐病的损伤接种发病率和病斑直径(P<0.05);经1×MIC和2×MIC的ε-PL处理后的柑橘酸腐菌胞外相对电导率、A_{260 nm}和红色荧光强度显著上升(P<0.05),表明其细胞膜...     

柑橘酸腐病菌PacC的生物信息学分析及其响应pH值的表达模式

酸腐病菌（Geotrichum citri-aurantii）可调节侵染位点的pH值增强其致病性,pH值信号转导途径关键转录因子PacC在真菌响应环境pH值变化中发挥重要功能,但PacC在酸腐病菌中的作用尚不清楚。从酸腐病菌基因组中注释到2个PacC候选基因,对其进行生物信息学分析,并研究不同pH值条件下的表达模式。结果表明,PacC1与PacC2属于C2H2蛋白家族成员,且与指状青霉（Penicillium digitatum）PacC的亲缘关系较近。PacC1与PacC2在染色体位置、蛋白质分子质量和等电点等方面存在差异。离体条件下,酸腐病菌具有广泛的pH值适应性,最适pH值为3.0。PacC1和PacC2的表达均受pH值调控,且两个基因的表达趋势具有一定相似性。活体条件下,pH>3.0的宫川蜜橘果实组织中,酸腐病发病部位pH值随着发病进程显著下降,而pH<3.0的尤力克柠檬果实组织中,发病部位pH值显著上升,同时PacC1与PacC2的相对表达量均呈上升趋势。综上可知,环境pH值对酸腐病菌的生长有一定影响,酸腐病菌也对环境pH值有一定调节能力。由于基因结构和理化性质的...     

银杏叶提取物对柑橘青霉病菌的抑菌效果

研究银杏叶乙醇提取物(EGb)对储藏期柑橘青霉病菌的抑菌作用.采用95%乙醇提取银杏叶,用针刺伤柑橘后以青霉病菌菌液和EGb处理柑橘进行药效试验,测试EGb对柑橘青霉病菌的抑菌效果.结果表明,EGb对储藏期柑橘青霉病菌具有较强的抑菌作用,且随着EGb浓度的增大抑菌作用增强,随着储藏时间的延长,EGb的抑菌作用降低.     

桂枝主要抑菌活性成分对柑橘青霉病菌的作用机制研究

以意大利青霉菌(Penicillium italicum)为供试菌,研究桂枝主要抑菌活性成分肉桂醛、肉桂酸的抑菌机制。通过测定肉桂醛、肉桂酸对供试菌的孢子萌发、菌丝生长形态、细胞膜通透性、可溶性糖和蛋白质含量以及代谢关键酶活性的影响,以阐明二者的作用机理。研究发现,肉桂醛溶液对供试菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MFC)分别为0.025 mg/m L和0.1 mg/m L,肉桂酸溶液分别为0.1 mg/m L和0.4 mg/m L;与对照组相比,经处理的菌体,其孢子萌发率降低,菌丝扭曲膨大或断裂,细胞膜渗透率增强,菌体内可溶性糖及蛋白质含量减少,琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)和苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase,MDH)活性降低。试验结果表明,肉桂醛和肉桂酸能有效抑制意大利青霉菌的孢子萌发,阻碍菌体生长,破坏细胞膜致使通透性增加,内含物外渗,且能有效破坏三羧酸循环(Tricarboxylic acid cycle,TCA)过程,菌体能量代谢途径受阻,从而抑制其正常的生长发育。     

松针提取物对柑橘青霉病菌的抑制作用及活性成分分析

本试验研究了马尾松松针提取物对柑橘青霉病菌意大利青霉的抑制作用及其活性成分。采用孢子萌发的方法测定了马尾松不同溶剂提取物对意大利青霉抑制作用,结果表明马尾松松针提取物的抑菌活性因提取溶剂的极性而异,其强弱顺序依次是乙酸乙酯提取物乙醇提取物二氯甲烷提取物水提取物石油醚提取物;选取乙酸乙酯提取物进行气质联用分析,发现样品中主要包括α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、β-石竹烯、莰烯、β-荜澄茄油烯等20种化学成分。其中含量最多的α-蒎烯和β-蒎烯抑制柑橘青霉菌的活性最强,是马尾松松针抑制柑橘青霉病菌的主要活性成分;其次为月桂烯;莰烯、罗勒烯、3-蒈烯、β-石竹烯对柑橘青霉病菌的孢子抑制作用最弱。因此,α-蒎烯和β-蒎烯作为安全、高效的熏蒸型柑橘采后抑菌剂具有进一步研究与开发的意义。     

表达豌豆防御素基因的重组酵母对采后柑橘酸腐病的生物防治

抗菌肤(Antimicrobial peptides,APMs)是一类对细菌、真菌等微生物及某些昆虫和动植物细胞具有抑制作用的小分子多肽.将碗豆防御素基因Psd1插入甲醇酵母Pichia pastoris的分泌表达质粒pPIC9K中,并将含有目的基因的重组质粒电转化P.pastoris GS115 (his4),得到重组酵母GS 115/PSD菌株.试验结果表明,重组酵母菌株经扩大培养,诱导表达的菌体被破碎后,酵母悬浮液含量达到5×108细胞/mL时,可以很好地抑制采后柑橘的酸腐病.     

柑橘精油对致草莓腐烂的菌种的抑菌效果研究

从自然腐烂的草莓中分离纯化得到两株革兰氏阳性细菌（标记为B1和B2）及一株青霉菌,研究了柑橘精油对这三种菌株的抑制效果,并分析了三种菌株的最低抑菌浓度,以及不同贮存时间和pH对柑橘精油的抑菌效果影响。结果表明,柑橘精油对细菌B1、B2和青霉菌均有抑制作用;柑橘精油对三种菌株的最低抑菌浓度为1.25%;贮存时间对柑橘精油的抑菌效果有一定影响,在贮存6 d后柑橘精油的抑菌作用趋于稳定;pH对柑橘精油的抑菌效果影响较大,最佳的作用pH值为5。     

壳聚(寡)糖对柑橘酸腐、黑腐病菌的抑制作用及对采后病害的防治

通过体外实验测定不同浓度的壳聚糖和壳寡糖对酸腐和黑腐病菌孢子萌发、芽管长度和菌丝生长的抑制作用;采用刺伤接种方法评价壳聚糖和壳寡糖对柑橘果实两种病害的防治作用。离体实验结果表明,壳聚糖和壳寡糖浓度为10mg/mL时几乎完全抑制两种病原菌的菌丝生长;浓度为0.5mg/mL壳聚糖和壳寡糖能完全抑制柑橘酸腐病菌(Geotrichum candidum)孢子萌发和芽管伸长的效果,而2mg/mL的壳聚糖才能完全抑制柑橘黑腐病菌(Alternaria citri)孢子萌发和芽管伸长,但相同浓度的壳寡糖抑制A.citri的孢子萌发和芽管伸长效果较差。体内实验结果表明,其病害防治效果具有浓度依赖性,高浓度(1%)的壳聚糖和壳寡糖对果实病害的防治效果较低浓度的防治效果好。      

p-茴香醛抑制柑橘酸腐病菌的作用机制

为探讨p-茴香醛对柑橘酸腐病菌的抑制作用和机制,本实验结合体外实验和活体实验测定了p-茴香醛对病原菌的抑制能力,以菌丝体细胞壁、细胞膜和菌丝形态为研究对象,分析了p-茴香醛对病原菌的抑菌机制。结果表明,p-茴香醛能显著抑制柑橘酸腐病菌菌丝体生长,其最低抑菌浓度和最低杀菌浓度(minimum fungicidal concentration,MFC)均为4.48 g/L;果蜡中添加10 MFC p-茴香醛能有效降低柑橘果实酸腐病发病率,接种13 d后发病率仅为30%,显著低于对照的100%(P0.05)。进一步研究发现,p-茴香醛诱导胞外碱性磷酸酶活力上升,破坏酸腐病菌菌丝体细胞壁完整性,添加保护剂山梨醇也无法缓解其对病原菌的抑制;碘化丙啶染色实验表明p-茴香醛对病原菌细胞膜造成损伤;通过扫描电子显微镜观察到,p-茴香醛处理的酸腐病菌菌丝呈现褶皱、干瘪、不规则扭曲状。以上结果说明:p-茴香醛能有效抑制柑橘酸腐病菌的生长,并能有效延缓柑橘酸腐病的发病进程,其作用机制可能与p-茴香醛诱导病原菌菌丝体细胞壁和细胞膜损伤有关。     

The Mechanism of Action of Pterostilbene in Xinjiang Wine Grape Against the Growth of Geotrichum citri-aurantii

Pterostilbene controlled the growth of Geotrichum citri-aurantii effectively through experiments of arthroconidium germination on agar plate, which displayed a strong antifungal activity. Observations using light microscope, scanning electron showed that the morphology and inner structure of the G. citri-aurantii treated with the pterostilbene changed notably. Some of the cells were abnormal or lysed. In order to further clarify the molecular mechanism of action, we examined the binding properties exerted by the pterostilbene on DNA and RNA of G. citri-aurantii fungal cells. Results showed that DNA and RNA of the G. citri-aurantii fungal cells were degraded by the pterostilbene. Moreover, three differentially expressed apoptosis genes of fungi were further examined by semi-quantitative RT-PCR. The results indicated that pterostilbene could cause the expression of up-regulated genes involved in RLM1, RTG1, and RTG3, of which the former two genes were significantly up-regulated.     

柠檬醛对酸腐菌线粒体形态和功能的影响

本研究探讨了柠檬醛对酸腐菌线粒体形态、三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）合成和三羧酸（tricarboxylic acid cycle,TCA）循环的影响。扫描电子显微镜结果显示,柠檬醛处理后,酸腐菌线粒体出现扭曲、坍塌甚至破裂的现象。酸腐菌线粒体结构的破坏导致其胞内ATP流失,胞外ATP含量增加。经最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的柠檬醛处理后,酸腐菌TCA循环中柠檬酸合酶、α-酮戊二酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活力以及柠檬酸含量都呈下降趋势。结论：柠檬醛处理影响了酸腐菌线粒体的形态和功能,从而抑制其生长。     

In vitro and in vivo antifungal activity of a water-dilutable cassia oil microemulsion against Geotrichum citri-aurantii

BACKGROUND: Recently, food‐grade microemulsions have been of increasing interest to researchers and have shown great potential in industrial applications. In this study a food‐grade water‐dilutable microemulsion system with cassia oil as oil, ethanol as cosurfactant, Tween 20 as surfactant and water was developed and its antifungal activity in vitro and in vivo against Geotrichum citri‐aurantii was assessed. RESULTS: The phase diagram results confirmed the feasibility of forming a water‐dilutable microemulsion based on cassia oil. One microemulsion formulation, cassia oil/ethanol/Tween 20 = 1:3:6 (w/w/w), was selected with the capability to undergo full dilution with water. The average particle size was 6.3 nm. The in vitro antifungal experiments showed that the microemulsion inhibited fungal growth on solid medium and prevented arthroconidium germination in liquid medium and that cassia oil had stronger activity when encapsulated in the microemulsion. The in vivo antifungal experiments indicated that the water‐dilutable microemulsion was effective in preventing postharvest diseases of citrus fruits caused by G. citri‐aurantii. CONCLUSION: The results of this study suggest a promising utilisation of water‐dilutable microemulsions based on essential oils for the control of postharvest diseases. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

盐酸小檗碱抑制指状青霉的作用机制

本实验主要对盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BH)抑制指状青霉(Penicillium digitatum)生长的活性以及可能的作用机制进行探讨.结果表明,BH抑制指状青霉生长的最低抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌质量浓度(m...     

柑橘绿霉病中草药高效抑菌剂的筛选及抑菌机理研究

利用牛津杯法筛选出对柑橘绿霉病菌(指状青霉)有最佳抑制作用的中草药提取物,并通过测定培养液电导率变化等对其抑菌机理作进一步研究。结果表明:桂枝、桂皮、香薷等乙醇提取物对指状青霉均有较好的抑制效果,抑制圈均在20 mm以上,其中以桂枝的抑菌活性最佳,对指状青霉的抑制圈大小达31.56±0.66 mm,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)分别为6.25mg/mL、12.5 mg/mL,且其抑菌效果显著优于化学杀菌剂百可得。同时桂枝提取物对指状青霉菌的孢子萌发及菌丝生长发育也有较强的抑制作用,在提取液处理浓度为50 mg/mL时,孢子萌发抑制率高达99.007%,菌丝体细胞膜通透性增强,菌丝体可溶性蛋白及总糖含量分别只有1187.18μg/g及0.307%,菌丝形态呈现畸形甚至断裂,因而桂枝提取物对柑橘绿霉病菌有明显的抑菌活性,其抑菌作用主要是通过破坏细胞膜结构,扰乱菌丝物质代谢活动来实现的。     

Overexpression of the Bivalent Antibacterial Peptide Genes in Pichia pastoris Delays Sour Rot in Citrus Fruit and Induces Geotrichum citri-aurantii Cell Apoptosis

Genetic manipulation of antagonists shows tremendous potential for improving biocontrol activity of antagonists. Here, bivalent antibacterial peptide Cecropin A/PsdI gene was transformed and expressed in methylotrophic yeast, Pichia pastoris GS115. The bivalent yeast GS115/CEC-PSD showed a great ability in delaying sour rot in citrus fruit and based on observations of restrained growth of geminated Geotrichum citri-aurantii spores relative to non-transformed strain. Although there was no remarkable discrepancy between growth rates of strain GS115 and GS115/CEC-PSD in vivo and vitro, plenty of vacuoles were observed in the cellular space of G. citri-aurantii treated with the CEC-PSD via transmission electron microscopy. Meanwhile, a gel-retardation assay exhibited that the DNA of G. citri-aurantii was degraded by CEC-PSD. Furthermore, our research revealed apoptosis genes in G. citri-aurantii were expressed at different levels with the CEC-PSD levels, among these genes, the expression level of RLM1 and RLM1was decreased remarkably, and the expression level of others changed relatively a little. These findings suggest that bivalent antimicrobial peptides can inhibit G. citri-aurantii by harming cell membrane, disrupting the cell metabolism, inducing programmed cell death and can therefore heighten the inhibition effect of the biocontrol yeast against postharvest diseases and this provides a new approach for the biological control of postharvest diseases.     

乳酸菌产苯乳酸对指状青霉的抑菌活性及作用机理

为探究乳酸菌Lactobacillus plantarum CKXP13和L. plantarum CWXP24产苯乳酸的能力以及苯乳酸对柑橘绿霉病的控制效果及其抑菌机理,本实验使用高效液相色谱法测定这两株乳酸菌的苯乳酸产量,并通过研究苯乳酸处理后指状青霉的孢子存活率、菌落直径、菌丝形态、胞外电导率来探究其抑菌机理,最后以柑橘果实绿霉病干预实验探究苯乳酸对绿霉病的控制效果。结果表明,L. plantarum CKXP13、L. plantarum CWXP24均能产生苯乳酸,产量分别为42.4 mg/L和91.9 mg/L,苯乳酸质量浓度为2.5、5.0、10.0 mg/mL条件下,指状青霉的孢子存活率、菌落直径随苯乳酸质量浓度上升而显著降低（P<0.05）,菌丝也随苯乳酸质量浓度升高出现表面粗糙、相互缠绕、形成塌陷或树瘤状凸起的情况,同时乳酸菌还能增强病原菌细胞膜的通透性,促进细胞内容物泄漏,导致病原菌死亡。果实绿霉病干预实验证明,10、20 mg/mL苯乳酸都能有效控制柑橘果实绿霉病。综上所述,苯乳酸作为天然杀菌剂在控制柑橘采后绿霉病方面具有良好的应用潜力和开发前景。     

香叶醇联合冬凌草甲素对MCF-7细胞协同抗癌作用及其机理

目的:探讨香叶醇(geraniol,GOH)联合冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人乳腺癌MCF-7细胞活力、细胞凋亡、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量、线粒体膜电位及细胞周期的影响.方法:细胞分为对照组、GOH组(102.81 μg/mL)、ORI组(4.32 μg/m...     

柑桔贮藏期纳米二氧化钛抑制霉菌性能研究

用液相沉积法对纳米二氧化钛进行包覆改性并研究柑桔贮藏期其抑制霉菌的性能,并用牛津杯法研究其抗菌性能,探讨了改性前后抗菌性能的变化.结果表明TiO2表面包覆SiO2可有效防止团聚的发生,改善在水溶液中的分散稳定性;抑菌实验表明,当p(SiO2-TiO2)=0.1g/L,对桔青霉、黑曲霉的抑菌圈直径分别达14、16mm,显出了优异的抗菌性能.