利用对虾消化腺丝氨酸蛋白酶制备鲍鱼外套膜ACE抑制肽

利用鲍鱼加工副产物外套膜制备具有抑制血管紧张素转移酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性的生物活性肽,为鲍鱼加工副产物的高值化利用提供新思路.采用从凡纳滨对虾消化腺中制备的丝氨酸蛋白酶,酶解皱纹盘鲍外套膜蛋白,以酶解物ACE抑制活性为评价指标优化条件.酶解液通过3 kDa超滤膜后,...     

皱纹盘鲍腹足抗氧化肽的制备及其工艺优化

以皱纹盘鲍腹足为原料制备抗氧化肽。采用酶解技术,以皱纹盘鲍腹足为原材料,多肽得率、水解度、还原力、二苯代苦味脐基自由基(DPPH·)清除率为主要影响指标,筛选出最优蛋白酶;在单因素实验的基础上,应用响应面分析法,对pH值、酶解温度、酶解时间进行优化,确定制备工艺。结果表明,中性蛋白酶酶解皱纹盘鲍腹足制备抗氧化肽酶解液的最佳工艺条件为:pH 7. 10,酶解温度50. 25℃,酶解时间4. 65 h,此时皱纹盘鲍腹足抗氧化肽酶解液的DPPH·清除率可达到96. 12%,与预测理论值相比,其相对误差为0. 12%,且平均多肽含量可达到80. 56%。说明该工艺条件适于制备皱纹盘鲍腹足抗氧化肽,可达到促进皱纹盘鲍的产业化。     

酶解-膜分离组合制备ACE抑制肽

测试了膜分离操作压力、温度、pH值、料液体积浓度等操作参数对酶活力、血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽分离的影响,并建立分段酶解、分级膜分离组合模式实现从扇贝裙边酶解产物中分离ACE抑制肽.结果表明:膜分离操作操作参数对酶活力、ACE抑制肽分离均有较大影响;二段酶解-二级膜分离组合模式制备及分离ACE抑制肽的得率最高,为5.73%,其IC50为0.088mg/ml;一段酶解-二级膜分离组合模式制备及分离ACE抑制肽的得率为3.19%,其IC50为0.081mg/ml;一段酶解-单级膜分离组合模式制备及分离ACE抑制肽的得率只有2.31%,其IC50为0.078mg/ml.     

马面鱼皮ACE抑制肽的制备、分离纯化及稳定性

为实现马面鱼皮的高值化利用,优化其胶原蛋白制备ACE抑制肽的酶解条件,通过超滤、凝胶色谱、高效液相及U-PLC-MS等方法分离、纯化及分析ACE抑制肽.探讨pH值、温度及体外模拟胃肠消化对分离制备多肽的ACE抑制活性的影响.结果表明:利用复合酶解法可制备高活性ACE抑制肽,即在蛋白酶N"天野"2G用量1200 U/g,...     

三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究

本文通过三斑海马酶解液的制备、ACE抑制活性肽的分离和体外消化模型的建立研究了三斑海马蛋白肽的ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶制备得到具有ACE抑制活性的三斑海马酶解液,经葡聚糖凝胶层析分离纯化后,得到具有较高ACE抑制活性的组分(其IC50为0.91 mg/m L);通过对该组分的氨基酸组成和体外消化模型分析,发现该组分中疏水性氨基酸的含量为50.48%,消化酶作用后,显著提高ACE抑制活性,经判断,该组分中的蛋白肽为前体型抑制剂。      

基于旋转设计优化胶原蛋白ACE抑制肽 制备工艺

采用Protamex~蛋白酶水解鱼胶原蛋白源制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,并采用p H-stat法测定水解度,对影响水解效果的p H值、温度、底物浓度和加酶量4个因素进行考察,并进行三元二次通用旋转设计进行优化,对活性肽的ACE抑制活性和结构进行分析。结果表明在底物浓度11.8%,p H 8.7,加酶量5.4%和酶解温度53.6℃条件下,酶解1 h所得的鱼皮胶原蛋白水解度为16.6%,经高效液相测定鱼皮ACE抑制活性为45%,经圆二色谱分析鱼胶原蛋白ACE抑制肽主要以无规卷曲形式存在。     

魔芋ACE抑制肽酶法制备工艺研究

采用酶解法对魔芋蛋白质进行酶解,研究魔芋ACE抑制肽的制备工艺。以ACE抑制肽含量、多肽得率为指标,通过单因素试验和正交试验设计,优化了碱性蛋白酶酶解魔芋蛋白制备ACE抑制肽的工艺。结果表明,碱性蛋白酶酶解魔芋蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解pH 8.5、酶解温度55℃、酶用量3 000 U/g、酶解时间210 min,在此条件下多肽得率为11.95%;ACE抑制肽含量为35.79 mg。     

玉米ACE抑制肽的制备工艺及中试生产

以玉米黄粉为原料,利用Alcalase酶、Protamex酶和Flavourzyme酶酶解制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,研究酶解条件、酶解方式对玉米肽ACE抑制活性的影响。同时,在试验的基础上,对100 kg玉米黄粉酶解制备ACE抑制肽进行了中试生产。实验结果表明:单酶水解制备ACE抑制肽的最适酶为Protamex酶,在酶解150 min时水解产物的ACE抑制率为(90.98±0.54)%,水解产物的分子质量集中在10 405.22~300 Da。Flavourzyme酶和Protamex酶的分步水解可进一步提高玉米蛋白的酶解效率和玉米肽对ACE的抑制活性,在先用Flavourzyme酶水解2 h再加入Protamex酶继续水解3 h后,水解产物的ACE抑制率达到(99.35±3.55)%(IC50=0.764 mg/m L),水解产物的分子质量集中在8 439.49~185.2 Da。采用双酶分步水解方式水解100 kg玉米黄粉时,肽粉得率为27%,ACE抑制率为(56.70±0.86)%(1 mg/m L)。     

燕麦麸ACE抑制肽酶解工艺优化及其稳定性研究

为了充分利用燕麦蛋白资源,增加燕麦加工产品附加值,本课题以燕麦加工副产物燕麦麸为实验原料,采用酶解技术制备燕麦麸ACE(Angiotensin Converting Enzyme)抑制肽。通过超微粉碎、有机溶剂萃取、酶解等处理技术,打破原料致密的结构,去除其中的淀粉、脂类等可能影响到肽的制备与纯化的物质。在酶的筛选试验中,以酶解产物ACE抑制率和水解度为指标选出最佳水解用酶为Alcalase 2.4L碱性蛋白酶。对最佳酶解工艺和肽的稳定性进行了研究。结果表明最佳酶解工艺参数为:加酶量4500u/g、pH 8.1、温度56℃、底物浓度7.5%,得到的ACE抑制率抑制率为70.67%。IC50为0.83mg/mL。最后,研究了燕麦麸ACE抑制肽的消化稳定性,结果显示模拟消化处理后肽的活性并无明显变化,稳定性良好。     

酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺优化

为获得优质的核桃蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备原料及优化其制备工艺,采用连续提取法从脱脂核桃粕中依次分离出清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白-1和谷蛋白-2 5种组分蛋白,测定5种组分蛋白的占比及ACE抑制率,以ACE抑制率最大的组分蛋白作为原料采用酶解法制备ACE抑制肽,在筛选出最适酶解用酶基础上,采用单因素试验与响应面试验优化酶解制备核桃蛋白ACE抑制肽的工艺。结果表明：5种组分蛋白中谷蛋白-1占比仅次于谷蛋白-2,且其ACE抑制率最高,以核桃谷蛋白-1为原料,在筛选出胃蛋白酶作为酶解用酶基础上,经工艺优化得到最优的酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺条件为酶解温度46℃、酶解时间6 h、酶用量4.2%(以底物质量计)、酶解pH 1.6,在该条件下所得核桃谷蛋白-1酶解液的ACE抑制率为(50.08±2.34)%。因此,核桃谷蛋白-1经胃蛋白酶酶解可生产ACE抑制活性较高的核桃多肽。     

深海鲑鱼皮来源ACE抑制肽的分离及鉴定

为了考察海洋胶原低聚肽中ACE抑制肽的活性和结构,本文以深海鲑鱼皮为原料,采用两步酶解法制备出海洋胶原低聚肽,在对其分子量分布进行分析的基础上,测定了其血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。结果表明,海洋胶原低聚肽中分子量小于1000 u的组分高达90.79%,主要分布在132~576 u范围内,其ACE抑制活性的IC50为1.18±0.12 mg/m L。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,收集11个组分峰,对其ACE抑制活性进行了测定。结果表明,有7个组分的ACE抑制活性比海洋胶原低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对收集的11个组分进行了结构鉴定,并对鉴定出的15个肽段进行了ACE抑制活性测定。结果表明,15个肽段均有一定的ACE抑制活性,其中Ala-Pro(AP)、Val-Arg(VR)、Gly-Arg(GR)的ACE抑制率比海洋胶原低聚肽高,IC50值分别为0.07±0.01 mg/m L、0.35±0.03 mg/m L、0.92±0.85 mg/m L,活性大约是海洋胶原低聚肽的16.86、3.37、1.28倍,是具有较高ACE抑制活性的肽段。     

猪股骨头胶原蛋白降血压肽的分离纯化

依次采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对猪股骨头胶原蛋白进行酶解,制备降血压肽。为了得到高活性、高纯度的降血压肽,依次采用超滤、离子交换层析、凝胶层析对酶解液进行分离纯化,采用体外检测方法测定各分离产物对血管紧张素转化酶活性的半抑制浓度（IC50值）。结果显示：猪骨酶解液经超滤分离获得分子质量小于5 ku的组分对血管紧张素转化酶的抑制活性最高,IC50值为1.400 2 mg/mL;该组分进行离子交换层析分离得4个组分,其中组分2的活性最高,IC50值为0.488 4 mg/mL;再将组分2进行凝胶层析分离得4 个组分,其中组分2-2的活性最高,IC50值为0.195 3 mg/mL。     

Two Novel Bioactive Peptides from Antarctic Krill with Dual Angiotensin Converting Enzyme and Dipeptidyl Peptidase IV Inhibitory Activities

Inhibition of dipeptidyl peptidase IV (DPP‐IV) and angiotensin converting enzyme (ACE) are considered useful in managing 2 often associated conditions: diabetes and hypertension. In this study, corolase PP was used to hydrolyze Antarctic krill protein. The hydrolysate (AKH) was isolated by ultrafiltration and purified by size‐exclusion chromatography, ion exchange chromatography and reversed‐phase high‐performance liquid chromatography (RP‐HPLC) sequentially. The in vitro inhibitory activities of all AKHs and several fractions obtained against ACE and DPP‐IV were assessed. Two peptides, purified with dual‐strength inhibitory activity against ACE and DPP‐IV, were identified by TOF‐MS/MS. Results indicated that not all fractions exhibited dual inhibitory activities of ACE and DPP‐IV. The purified peptide Lys‐Val‐Glu‐Pro‐Leu‐Pro had half‐maximal inhibitory concentrations (IC₅₀) of 0.93±0.05 and 0.73±0.04 mg/mL against ACE and DPP‐IV, respectively. The other peptide Pro‐Ala‐Leu had IC₅₀ values of 0.64±0.05 and 0.88±0.03 mg/mL against ACE and DPP‐IV, respectively. This study firstly reported the sequences of dual bioactive peptides from Antarctic krill proteins, further provided new insights into the bioactive peptides responsible for the ACE and DPP‐IV inhibitory activities from the Antarctic krill protein hydrolysate to manage hypertension and diabetes.     

发酵大豆豆粕水提物分离纯化ACE抑制活性小肽

本文开发了一种利用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵大豆豆粕并结合多级超滤、纳滤配合凝胶渗透色谱(GFC)和液相色谱(HPLC)分离纯化具有血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的小肽的方法。利用色谱法从发酵豆粕超滤提取液中分离纯化大豆小肽,用氨基酸序列分析仪PPSQ-21和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱基质(MALDI-TOF-TOF/MS)定性,再用标准固相肽合成法(SPPS)合成小肽,用HPLC法测定其ACE 抑制活性,并对小肽进行Sprague-Dawley Rat大鼠的心血管离体实验。结果表明,超滤后得到不同分子量滤液F1(1000~10000 Da)、F2(500~1000 Da)、F3(<500 Da)均具有不同程度的ACE 抑制活性且分子量最小的F3(<500 Da)组分最强。从F3组分中分离纯化了两个ACE 抑制活性小肽,HAGR和CGAAP,在相同浓度(2 mg/mL)下其抑制率分别为34.99%和77.79%,后者抑制活性高于F3组分。离体实验的结论同样证实,大豆提取小肽具有舒张已被收缩的血管环的活性,但活性强度与ACE抑制活性不直接相关。实验证明,枯草芽孢杆菌配合超滤的方式可以从大豆发酵物中制备具有血管生物活性的组分,其生物活性可能来源于这种组分中的部分小肽。     

马氏珍珠贝肉蛋白水解特征及其ACE抑制肽的筛选

为探索马氏珍珠贝肉的水解规律及快速鉴定血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性肽,本研究以不同时间(2、4、6、8、10h)的酶解物为对象,采用三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、分子质量分布、反相高效液相色谱(reversed-phase high...     

Angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides from fermented sausages inoculated with Lactobacillus plantarum CD101 and Staphylococcus simulans NJ201

Natural ACE inhibitory peptides derived from food are considered to be an effective supplement for lowering blood pressure. This study investigated the effects of Lactobacillus plantarum CD101 and Staphylococcus simulans NJ201 on proteolysis and the sequence composition of ACE inhibitory peptides in fermented sausages. The ACE inhibitory activity of the inoculated group reached the maximum values on day 35 during the production of fermented sausages. A more positive effect in the hydrolysis of the sarcoplasmic and myofibrillar protein was observed in the inoculated group through sodium dodecyl sulphate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The free amino acid content of the inoculated group was 865.21 ± 12.55 mg/100 g, which was significantly higher (P < 0.05) than that of the control group. The molecular weight distribution showed a significant increase (P < 0.05) in peptides with a molecular weight less than 1 kDa in the inoculated group. A total of thirty-four peptides with high hydrophobicity were identified by liquid chromatograph-mass spectrometer/mass spectrometer (LC–MS/MS). Furthermore, the peptides were isolated and purified using gel filtration chromatography (GFC) and reversed-phased high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). Eleven novel peptides were identified by Nano-LC-ESI-MS/MS, in which VALSLSRP with X-Pro structure exhibited the highest ACE inhibition rate (75.36 ± 2.45%). These results indicated that mixed starters are conducive to protein degradation and the formation of peptides with high ACE inhibitory activity, especially peptides less than 1 kDa, and could be used as a functional material for antihypertensive drugs.     

三斑海马蛋白ACE抑制肽的制备及其二级结构的研究

以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。     

燕麦ACE 抑制肽的分离纯化及其活性研究

通过对3 种大孔吸附树脂的比较,选择DA201-C 树脂对燕麦ACE 抑制肽进行纯化。纯化后的燕麦肽产物的ACE 抑制率达到92.86%,利用HPLC 测得纯化后燕麦ACE 抑制肽的分子质量分布在240.10～1292.11D 之间,这部分物质在整个纯化产物中占99.82%。采用SephadexG-15 凝胶分离燕麦ACE 抑制肽得到D峰,其IC50 为0.103mg/mL,分子质量545D。采用大孔吸附树脂及凝胶层析法能够较好地分离纯化燕麦ACE 抑制肽。     

酪蛋白双酶水解物ACE抑制肽的分离纯化

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次对酪蛋白进行双酶水解,制备ACE抑制肽。水解物经截留分子质量6ku的超滤膜初步分离,再通过Sephadex G-15进一步纯化,体外测定各分离产物ACE活性的半数抑制质量浓度(IC50值)。纯化得到的各组分经毛细管电泳分析肽谱、Q-TOF LC/MS检测分子质量范围。结果显示：双酶水解产物IC50值为560μg/mL,超滤流出物IC50值为250μg/mL;Sephadex G-15分离得到3个组分,组分Ⅰ的IC50值为123.41μg/mL,含有19个肽段;组分Ⅱ的IC50值为66.67μg/mL,含有14个肽段;组分Ⅲ的IC50值为64.29μg/mL,含有5个肽段。Q-TOF LC/MS测得纯化组分的分子质量范围为400～800u。