基于Au-Fe3O4纳米颗粒的磁弛豫免疫传感器快速检测食源性单核细胞增生李斯特菌

食源性单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)引发的食品安全问题日益严重,寻求快速灵敏的检测方法对保障人体健康、减少经济损失具有重要意义.该研究研发了一种过氧化氢(H2O2)介导的Au-Fe3O4磁探针组装策略,并基于此,构建了一种用于单增李斯特菌快速检测的磁弛豫免疫传感方法.H2O2能够将银离子还原为银单质,而银单质沉积...     

顺磁离子介导磁弛豫生物传感器评定鱼肉新鲜度

构建一种新型的顺磁离子价态转换介导的磁弛豫生物传感方法,用于鱼肉中次黄嘌呤和组胺的快速检测,进而评定鱼肉的新鲜度和品质。通过利用次黄嘌呤和组胺被酶催化分解产生的过氧化氢的还原性和氧化性,诱导不同价态顺磁离子（Mn（VII）/Mn（II）和Fe（II）/Fe（III））的转化,使磁信号发生变化,实现次黄嘌呤和组胺的定量分析。结果表明：顺磁离子介导的磁弛豫生物传感器能够实现次黄嘌呤和组胺的高灵敏检测,次黄嘌呤和组胺的线性范围分别为0.525～1 050 μmol/L和5～1 000 μmol/L,检出限分别为0.17 μmol/L和2.34 μmol/L,且在鱼肉样本检测中与高效液相色谱法一致性良好。该传感器灵敏度高、检测速度快、成本低,在鱼肉及相关产品新鲜度评定和品质控制方面具有良好的应用潜力。     

纳米酶侧流免疫层析法快速检测食品中肠炎沙门氏菌

目的 基于氧化铈修饰的金纳米棒(CeO2 modified Au nanorod, AuNR@CeO2)纳米酶构建纳米酶侧流免疫层析法(lateral flow immunoassay, LFIA), 并用以检测食品中肠炎沙门氏菌。方法 采用模板法制备AuNR@CeO2纳米酶, 对纳米酶的酶促活性进行考察。将AuNR@CeO2标记抗体作为信号探针进一步构建试纸条, 优化其关键参数, 并利用AuNR@CeO2纳米酶的酶促活性, 催化放大试纸条的比色信号, 最后将其用于奶粉中肠炎沙门氏菌的检测。结果 成功制备了AuNR@CeO2纳米酶, 在最优条件 下(即：2% BSA+0.05% Tween-20的样品垫缓冲体系、0.8 mg/mL的T线抗体质量浓度和4 μL的探针使用量), 该试纸条可以实现目标菌的特异性检测, 检出测限 低至103 CFU/mL, 信号放大后灵敏度提高了10倍, 在人工污染奶粉样品中也表现出良好的检测效果 检出限低至103 CFU/mL。结论 本研究所制备的试纸条无需复杂仪器和专业人员即可实现目标物的检测, 且具有易操作、便携、快速的特点, 通过更换抗体类型便可用于各类食品有害物质的检测。     

基于磁弛豫开关的免疫传感器检测自来水和脱脂牛奶中的雌二醇

目的 建立磁弛豫开关(magnetic relaxation switch,MRS)免疫传感器检测自来水和脱脂牛奶中雌二醇(estradiol,E2)残留的方法.方法 通过1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺[1-(3-dimethy laminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hyd...     

免疫磁纳米粒子对肠炎沙门氏菌的富集分离

采用化学共沉淀法制备了羧基化磁纳米粒子,分别对磁纳米粒子-沙门氏菌多克隆抗体复合物（免疫磁纳米粒子）的偶合条件和免疫磁纳米粒子富集分离肠炎沙门氏菌的条件进行了优化,为肠炎沙门氏菌的富集分离和检测提供一种更为快捷、高效的方法。结果表明,当51.7 μg/mL羧基化磁纳米粒子与碳二亚胺/N-羟基丁二酰亚胺（0.4 mol/L/0.1 mol/L）、1.0 mg/mL的多克隆抗体的体积比为1∶2∶2时,37 ℃水浴加热40 min,两者的偶合效果最佳。应用上述优化条件制备的免疫磁纳米粒子吸附104 CFU/mL肠炎沙门氏菌,当两者的体积比为4∶5,孵育时间为40 min时,免疫磁纳米粒子对肠炎沙门氏菌的吸附效率可达到94.36%。     

基于纳米金复合探针的沙门氏菌快速定量检测

鉴于现有沙门氏菌检测方法的缺陷,研发一种快速、简便、低成本、高灵敏的沙门氏菌新型快速定量检测技术。通过水相合成法制备碲化镉量子点,用显示DNA将一个金纳米粒子连接上百个量子点制备显示探针进行信号放大;采用水热-溶剂热方法制备氨基化Fe_3O_4磁性纳米粒子,并利用亲和素与生物素特异性结合的原理,连接捕获DNA制备捕获探针,测定沙门氏菌DNA荧光强度。结果显示:在10~1 000fmol/L范围内,沙门氏菌的DNA浓度与荧光强度呈良好的线性关系,回归方程为I_F=0.198[DNA]+55.00,R~2=0.997,检出限为8fmol/L。在检测被沙门氏菌污染的牛奶样品中,也显示了优良的准确性,最低检出限为4fmol/L。     

瘦肉精快速检测用纳米金修饰一次性安培免疫传感器研究

构建Nafion（Nf）/纳米金（Au）包被瘦肉精-牛血清蛋白（CLB-BSA）修饰丝网印刷电极（SPCEs）的一次性安培免疫传感器（SPCEs|Nf/Au/CLB-BSA）,并用于猪肉中CLB含量测定。采用扫描电镜（SEM）、X射线荧光光谱（XRFS）表征免疫传感器的制备过程,采用循环伏安（CV）法和示差脉冲伏安（DPV）法研究CLB在该免疫电极上的电化学行为,通过竞争性免疫分析法测定CLB含量。该免疫传感器在含1mmol·L-1铁氰化钾和2.5μg·mL-1CLB抗体（anti-CLB）的25μLpH=7.5磷酸盐缓冲溶液（PBS）中加入不同浓度的CLB,并在35℃下温育15min,DPV还原峰电流上升百分比（CI%）与CLB浓度在1.0～100.0ng·mL-1范围内呈线性关系（R2=0.9989）,检测限为0.52ng·mL-1（3σ法）。用于猪肉中CLB检测并与高效液相色谱（HPLC）法比较,结果一致,其添加回收率在88%～105%之间。该免疫传感器灵敏快速、制备容易、样品用量少、可抛弃,有望用于痕量CLB快速筛测。      

瘦肉精快速检测用纳米金修饰一次性安培免疫传感器研究

构建Nafion（Nf）/纳米金（Au）包被瘦肉精-牛血清蛋白（CLB-BSA）修饰丝网印刷电极（SPCEs）的一次性安培免疫传感器（SPCEs｜Nf/Au/CLB-BSA）,并用于猪肉中CLB含量测定。采用扫描电镜（SEM）、X射线荧光光谱（XRFS）表征免疫传感器的制备过程,采用循环伏安（CV）法和示差脉冲伏安（DPV）法研究CLB在该免疫电极上的电化学行为,通过竞争性免疫分析法测定CLB含量。该免疫传感器在含1mmol·L-1铁氰化钾和2.5μg·mL-1CLB抗体（anti-CLB）的25μLpH=7.5磷酸盐缓冲溶液（PBS）中加入不同浓度的CLB,并在35℃下温育15min,DPV还原峰电流上升百分比（CI%）与CLB浓度在1.0～100.0ng·mL-1范围内呈线性关系（R2=0.9989）,检测限为0.52ng·mL-1（3σ法）。用于猪肉中CLB检测并与高效液相色谱（HPLC）法比较,结果一致,其添加回收率在88%～105%之间。该免疫传感器灵敏快速、制备容易、样品用量少、可抛弃,有望用于痕量CLB快速筛测。     

免疫磁捕获-实时荧光PCR快速检测鸡肉中沙门氏菌

对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃振荡孵育1.5 h,制备得到抗沙门氏菌免疫磁珠,与市售沙门氏菌免疫磁珠试剂盒(Dynal产品)捕获效率相当。免疫磁捕获-实时荧光PCR检测方法检测限为104 CFU/mL左右,能在16 h内检测出鸡肉中104 CFU/mL的沙门氏菌,可用于食品中沙门氏菌的快速检测。     

基于纳米金电化学免疫传感器测定牛奶中的青霉素G

利用吸附法将青霉素G抗体固定于纳米金修饰的玻碳电极表面,制备用于检测青霉素G的电化学免疫传感 器,建立高度灵敏的一步直接电化学免疫法。纳米金的强吸附和导电作用,提高了青霉素G抗体的固定量和电化学 灵敏度。在优化条件下,该传感器的响应电流与青霉素质量浓度的对数在0.04～40.00 ng/mL范围内呈良好的线性关 系,相关系数为0.988 4,检测限为2.49 ng/mL,该法成功的实现了对牛奶中青霉素G的检测。     

磁分离结合qPCR快速检测酱卤肉中的沙门氏菌

验证噬菌体磁分离结合实时荧光定量聚合酶链式反应,快速检测方法对食品中沙门氏菌的检测效果。以一株鼠伤寒沙门氏菌的特异性噬菌体T102为分子识别元件,首先将其与羧基化磁珠偶联,制备获得噬菌体磁性颗粒（Phage T102 Magnetic Beads）复合物,利用噬菌体磁性颗粒复合物从食品中特异性分离富集沙门氏菌,然后利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测富集后的沙门氏菌。该沙门氏菌快检方法检出限为100 CFU/mL（0.1 CFU/PCR）,线性范围为1×102~1×109 CFU/mL,变异系数2.1%,特异性强,检测时间为6 h。实验选取300批食品安全抽检样品与GB 4789.4-2016标准《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行比对,均未检出阳性样品,结果一致。该方法可为噬菌体偶联纳米磁珠在食源性致病菌检测领域的应用提供参考依据。     

基于KMnF3纳米探针的NMR快速检测沙门氏菌捕获条件的优化

本研究尝试了一种新型的基于KMnF3纳米探针的NMR方法对沙门氏菌进行快速检测。通过将沙门氏菌单抗与羧基磁珠偶联制备免疫磁珠,并以此为NMR分子探针,以免疫磁珠为生物传感器,特异性地捕获并检测出样品中的致病菌,从而建立一种更快的检测沙门氏菌的方法。实验发现,活化剂的添加量,捕获沙门氏菌的缓冲液,细菌培养时间和探针添加量在不同程度上影响着检测样品的弛豫时间。通过实验对捕获条件进行优化,得出的最佳捕获条件是：一份的KMnF3,活化时加入是KMnF3质量五倍的EDC?HCL、NHS;用灭菌的蒸馏水作为捕获沙门氏菌的缓冲液;加入80 μL的抗体-KMnF3捕获培养10 h的沙门氏菌。本研究为沙门氏菌的检测提供了新的方法和途径,缩短了检测时间,为低磁场核磁共振技术在食品安全领域开辟新的空间。     

基于纳米金生成的过氧化氢快速检测方法

建立了一种基于生成胶体金的光学信号快速检测过氧化氢(H2O2)的方法。在4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、柠檬酸钠和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的协同作用下,H2O2可还原氯金酸,并且在不同H2O2浓度下生成不同颜色的纳米金。通过肉眼观察生成纳米金的颜色,可以定性检测H2O2,其检测灵敏度可达到0.8μmol/L。采用分光光度法分析,其检测灵敏度可达到0.06μmol/L,检测线性范围为0.2~1 000μmol/L。对牛百叶中添加10,25和100μg/g的H2O2,经过简单的样品处理,其检测回收率可达到75.2%~82.5%,相对偏差小于13%。通过肉眼观察,对牛百叶中过氧化氢检测限可达到25μg/g。因此,该方法具有灵敏度高、成本低、快速简便等优点,可用于各类食品或生物基质中H2O2的检测。     

磁弛豫开关技术在生物检测应用中的研究进展

本文主要介绍磁弛豫开关技术在生物检测应用中的研究进展。磁弛豫开关检测技术是核磁共振技术、纳米技术和生物免疫技术相结合的一种灵敏度高、特异性好、抗干扰能力强的快速检测技术。以修饰了生物配体的磁性纳米颗粒作为磁共振探针,该探针能特异识别某一物质,当与待测物发生特异性结合后,磁性纳米颗粒由分散态变成聚集态,使得水质子的横向弛豫时间(T2)发生改变,从而实现对待测物的检测。目前磁弛豫开关技术已经广泛应用于蛋白质、微生物、核酸、小分子等生物分子的检测,并取得了一定的成果。基于磁学信号的磁弛豫开关检测技术具有抗干扰能力强,适用于复杂基质检测的特点,使得该技术在食品安全、环境检测、临床诊断等领域都有着广阔的应用前景。     

食源性沙门氏菌磁性纳米粒子RT-PCR检测方法的研究

建立适合食源性沙门氏菌的RT-PCR 检测体系。根据沙门氏菌的转录起始因子rpoD 设计引物Salmrpod2/5,以rpoD 基因的mRNA 为检测对象,在样品制备时采用新型的磁性纳米粒子分离mRNA 技术,建立快速检测食品中沙门氏菌的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法。结果表明,Salmrpod2/5 引物能有效地将沙门氏菌与其他亲缘关系较近的肠杆菌科细菌区分开来。样品中沙门氏菌添加实验表明,该方法对沙门氏菌的检测下限为10CFU/25ml,检测时间少于18h。该方法具有灵敏、特异、快速的特点,适宜于在食品卫生行业中进行推广及应用。     

中国食源性鼠伤寒沙门菌株耐药谱及PFGE分型研究

目的了解掌握中国食品中鼠伤寒沙门菌的耐药状况，并对2002—2005年国家食源性疾病监测网分离的23株鼠伤寒沙门菌进行耐药性监测及PFGE分型研究。方法利用血清学方法对2002—2005年食源性疾病监测网分离的沙门菌进行分型，并运用CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）推荐的纸片法对鼠伤寒沙门菌株进行耐药性检测。采用脉冲场凝胶电泳法（PFGE）进行PFGE分型。结果发现15株多重耐药鼠伤寒沙门菌，其中耐4～5种抗生素的6株（40％），耐6～9种抗生素的5株（33．3％），耐10种抗生素的4株（26．7％）；可分为16个PFGE型。其中5个PFGE型的菌株数超过1株。结论我国食源性鼠伤寒沙门菌分离株的多重耐药性严重，PFGE分型方法对鼠伤寒沙门菌的分型能力较好，同一PFGE型菌株的耐药谱非常接近。     

原位荧光LAMP技术检测食源性沙门氏菌

以沙门氏杆菌为研究对象,探讨了将原位荧光LAMP技术应用于检测沙门氏菌所需要的具体实验方法与数据,并成功将原位荧光LAMP技术应用于检测人工污染的食品中的沙门氏菌。实验选取invA基因作为靶序列设计了2对引物。结果证明,与传统沙门氏菌检测方法和PCR方法相比,原位荧光LAMP无需破碎细胞提DNA,反应方便易行,耗时少;反应条件恒定温和,能够减少细胞损伤;单基因检测水平证明反应的高灵敏度;良好的基因定位以及清晰的背景条件使反应结果更加直观,易于观察。     

食源性致病菌快速检测技术研究进展

食源性致病菌是影响食品安全的主要问题之一.建立快速的食源性致病菌检测方法对控制农产品和食品从生产、加工、运输、仓储、口岸通关到销售和消费各个环节的生物性风险至关重要.由于传统病原微生物检测耗时长且操作较繁琐,不能及时检测出食品中的病原菌.近年来随着生物技术的快速发展以及对食品安全监测要求的提高,食源性致病菌快速检测方法...