松仁清蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

利用碱性蛋白酶酶解松仁清蛋白制备高抗氧化活性肽,通过超滤、SephadexG-25、SephadexG-15及反相高效液相色谱对抗氧化肽进行分离纯化,并采用电喷雾串联质谱进行结构鉴定。经筛选获得高抗氧化活性肽苯丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸-酪氨酸（FFPY）和酪氨酸-亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸（YLPF）,分子质量分别为572.67 Da和538.65 Da。对FFPY和YLPF进行固相合成,纯度达到99.16%和99.91%,氧自由基吸收能力分别为7 329.63 μmol/g和2 835.47 μmol/g。     

红松仁清蛋白ACE抑制肽的分离纯化与结构鉴定

为研究酶解红松仁清蛋白中具有血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性短肽的组分及其序列,采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15及反相高效液相色谱对松仁清蛋白酶解液进行分离纯化,对纯化后样品(组分D2)进行质谱结构鉴定。质谱结果进行从头测序,筛选得到ACE抑制肽Tyr-Leu-Leu-Lys(YLLK),分子质量为535.34 D。该肽经固相合成纯度为99.80%,其半数抑制浓度测定值为0.282 5 μmol/L。     

芝麻抗氧化肽分离纯化与结构鉴定

通过纳滤、超滤、制备液相对胰蛋白酶水解芝麻蛋白的酶解液中抗氧化肽进行分离纯化,随后采用高效液相质谱联用法进行结构鉴定,并合成相应多肽验证抗氧化活性。结果表明,经分离纯化与结构鉴定,共获得5个芝麻抗氧化肽,Glu-Leu-Phe-Phe-Gly-Ala-Gly-Gly- Glu-Asn-Pro-Glu-Ser-Phe-Phe-Lys(ELFFGAGGENPESFFK)、Phe-Glu-Ser-Glu-Ala-Gly-Leu- Thr-Glu-Phe-Trp-Asp-Arg(FESEAGLTEFWDR)、Asp-Val-Ala-Asn-Glu-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp- Leu-Lys(DVANEANQLDLK)、Glu-Asn-IIe-Glu-His-Thr-Ala-Ala-Thr-His-Ser-Tyr -Asn-Pro- Arg(ENIEHTAATHSYNPR)、Gln-Asp-Asn-Ala-Asn-Asn-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp-Pro-Asn-Pro- Arg(QDNANNANQLDPNPR)。胰蛋白酶酶解产生的芝麻抗氧化肽N端以酸性氨基酸残基为主,C末端为碱性氨基酸残基;除抗氧化肽ELFFGAGGENPESFFK是芝麻7S酶解产物以外,其余多肽均来自芝麻11S蛋白酶解。     

小麦面筋多肽D-WG-0-Ⅰ的分离纯化与结构鉴定

以体外抗氧化活性为导向,采用SephadexG-25从小麦面筋蛋白酶解液中纯化出组分相对单一的多肽D-WG-0-Ⅰ,RP-HPLC分析表明其纯度为84%。采用紫外光谱、红外光谱以及基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)等手段对D-WG-0-Ⅰ结构进行系统分析,确定出其分子量为1746.89u,氨基酸序列为Ser-Gly-Ala-Asp-Lys-Lys-pro-Ile-Lys-Ala-Asn-His。     

紫苏粕蛋白抗氧化活性肽的制备、分离纯化及序列鉴定

以紫苏粕粉为原料,使用碱性蛋白酶进行水解反应,制备抗氧化活性肽。采用超滤离心、凝胶过滤色谱和反相色谱等分离纯化手段对其富集。结果表明,相较其它3种蛋白酶,碱性蛋白酶Alcalase对紫苏粕蛋白的水解程度最高,约为(25.94±0.21)%;碱性蛋白酶作用紫苏蛋白后的酶解产物的抗氧化活性最好,对DPPH自由基清除率约为(91.01±0.73)%。酶解上清液经超滤离心分离后最小分子质量组分F1(小于3 ku)抗氧化活性最强,F1组分经Sephadex G-25凝胶过滤色谱分离后按照分子质量大小依次得到P1、P2、P3 3个组分,其中分子质量最小的P3组分抗氧化活性最高。P3组分经反相色谱分离所得4个组分中,最后被洗脱出来的P3-4组分疏水性最强且DPPH·自由基清除率最高,质量浓度为3 μg/mL的 P3-4溶液的DPPH·清除率为(58.8±0.78)%。通过LC-MS-MS 鉴定,抗氧化活性肽P3-4组分为十二肽,其氨基酸序列为Lys-Leu-Lys-Asp-Ser-Phe-Glu-Arg-Gln-Gly-Met-Val,分子质量为 1 437.8 u。本研究结果为深入开发紫苏蛋白资源,研发紫苏抗氧化活性肽提供理论参考。     

卵白蛋白源抗菌肽的分离纯化与结构鉴定

以卵白蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解制备具有抑菌活性的蛋白肽。通过超滤和Superdex peptide 10/300凝胶色谱分离技术获得高抑菌性组分,以抗菌肽对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌性为试验指标,筛选最佳抑菌性组分,再进行反相高效液相色谱分离,测定分离得到的9个组分抑菌活性,发现C3组分的抑菌活性和得率最高,其中大肠杆菌及沙门氏菌抑菌圈直径分别为(19.32±1.45),(18.74±1.27)mm。最后采用高效液相色谱—电喷雾—质谱鉴定抗菌肽的结构,显示氨基酸序列为GlyLeu-Glu-Pro-Ile-Asn-Phe-Gln(GLESINFQ)。该肽经固相合成纯度为95.84%,其抑菌活性与C3组分无显著性差异(P0.05),从而证明卵白蛋白源抗菌肽发挥抑菌活性的成分主要是肽段GLESINFQ。     

大豆低聚肽中抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

为考察大豆低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,以大豆分离蛋白为原料,采用两步酶解法制备出大豆低聚肽,在对其理化成分进行分析的基础上,以DPPH自由基清除能力为指标对其抗氧化活性进行了评价。结果表明:大豆低聚肽的DPPH自由基清除活性的IC50值约为2.6 mg/m L。利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对大豆低聚肽进行分离纯化,收集6个组分峰,对其DPPH自由基清除能力进行了测定。结果表明,6个组分的活性均比大豆低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对活性最高的组分5#进行了结构鉴定,并对鉴定出的6个肽段的DPPH自由基清除活性进行了评价。结果表明,6个肽段均有一定的DPPH自由基清除能力,其中Leu-Tyr(LY)、Leu-Ala-Gly-Arg(LAGR)、Phe-Ser-Arg(FSR)的清除率比大豆低聚肽高,是具有较高抗氧化活性的肽段。     

乌鸡低聚肽铁的分离纯化及结构鉴定

为了考察乌鸡低聚肽铁中肽段的结构,以乌鸡为原料,以氯化亚铁为铁源制备乌鸡低聚肽铁,对其总蛋白质质量分数、螯合率、得率进行测定,结果表明乌鸡低聚肽铁总蛋白质质量分数为(56.79±0.18)%,螯合率为(83.53±0.15)%,得率为(40.86±0.14)%。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对其进行分离纯化,收集4个组分峰,利用四极杆飞行时间串联质谱仪(QTOF质谱仪)测定肽序列,分析出1个肽段,氨基酸序列为Thr-Ser-Gly-Met-Pro,相对分子质量为491.56。     

降胆固醇亚麻籽蛋白酶解肽的分离纯化及结构鉴定

采用Protease M对亚麻籽蛋白进行酶解,制备具有降胆固醇活性的亚麻籽蛋白酶解肽,对其进行分离纯化及结构鉴定,并合成相应多肽验证其降胆固醇活性。结果表明,经Protease M对亚麻籽蛋白酶解4 h时获得的亚麻籽蛋白酶解肽胆固醇胶束溶解度抑制率最高,为47.57%;继续采用超滤技术将其分离为相对分子质量小于等于3 kDa、3~5 kDa、5~10 kDa、10~30 kDa和大于30 kDa 5个组分,发现相对分子质量小于等于3 kDa的组分胆固醇胶束溶解度抑制率最高,为71.0%;再经大孔树脂对该组分进行吸附后经过不同体积分数乙醇溶液洗脱,发现75%的乙醇洗脱分离得到的组分胆固醇胶束溶解度抑制率最高,为79.8%;采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对其进一步分离纯化,收集到F9组分的胆固醇胶束溶解度抑制率最高,为85.7%;最后采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)从F9组分中鉴定出6种降胆固醇亚麻籽肽,氨基酸序列分别为Ile-Ile-Pro-Ala-Phe(IIPAF)、Leu-Asn-Phe-Phe(LNFF)、Leu-Leu-Gly-Thr-Leu(LLGTL)、Ile-Pro-Pro-Phe(IPPF)、Ile-Ile-Phe(IIF)和Leu-Leu-Gly-Ala(LLGA),其胆固醇胶束溶解度抑制率分别为82.8%、77.8%、88.0%、93.5%、80.3%和87.1%。     

棉籽抗菌活性肽的分离纯化及鉴定

通过体外模拟消化系统对棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI)进行酶解,得到具有抗菌活性的酶解产物,并采用超滤(ultrafiltration,UF)、阴离子交换色谱(anion exchange chromatography,AEC)、半制备高效液相色谱(semi-preparation high performance liquid chromatography,semi-P-HPLC)分离技术对棉籽抗菌活性肽进行分离纯化,用电喷雾串联质谱(electrospray ionization-tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)鉴定棉籽抗菌肽的氨基酸序列。在抗菌活性肽分离纯化过程中,用UF对具有抗菌活性的CPI酶解产物进行分离,得到3个组分U-Ⅰ~U-Ⅲ。抗菌活性检测表明U-Ⅲ的抗菌能力最强;用AEC分离U-Ⅲ得到3个组分QF-Ⅰ~QF-Ⅲ,其中QF-Ⅱ抗菌能力最强;进一步采用semi-P-HPLC分离QF-Ⅱ得到4个组分PF-Ⅰ~PF-Ⅳ,其中PF-Ⅲ的抗菌能力最强,经HPLC检测为单一峰,ESI-MS/MS检测分析得到该肽的氨基酸序列为ISGLIYEETR(Ile-Ser-Gly-Leu-Ile-Tyr-Glu-Glu-Thr-Arg)。     

小麦蛋白酶解物中抗氧化肽的纯化与鉴定

以自由基清除能力为指标,分别采用4种蛋白酶酶解小麦蛋白,其中3 h复合蛋白酶酶解物显示出最高抗氧化活性。用超滤、凝胶过滤色谱和RP-HPLC的方法纯化抗氧化活性肽,并对抗氧化活性高的多肽进行质谱分析。结果显示,分子质量Mr1 ku组分的抗氧化活性较高(5 mg/m L时达到76.08%),对该组分进行纯化后,经ESI-TOF-MS质谱分析可知其荷质比m/z为730.83,氨基酸序列为Gln-Gln-Gln-ProArg(QQQPR)。     

谷朊粉发酵液中鲜味肽的分离、鉴定与呈味分析

鲜味是五种基本味感之一,它在人们选择食品中扮演了越来越重要的角色,肽是氨基酸组成的混合物,具有多种味道,是主要的呈味物质,利用蛋白酶解可以获得具有较强鲜味的肽段。本实验采用感官评价结合超滤(UF)、凝胶层析(GPC)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等技术从以盐酸脱酰胺面筋蛋白为原料的发酵液中分离纯化得到一种鲜味肽,同时采用MALDI-TOF-MS串联质谱鉴定该鲜味肽的氨基酸序列及其分子质量;目标定向固相合成鉴别出的鲜味肽,并测定了其鲜味阈值及鲜味相乘效应。结果发现:该鲜味肽的氨基酸序列为Asp-Cys-Gly(DCG),分子质量为293.15 Da,固相合成该鲜味肽后采用滋味稀释法评价发现该鲜味肽的鲜味阈值为100 mg/m L,是MSG阈值的1/3,该鲜味肽对浓度为200 mg/L的I+G溶液具有鲜味增强作用,对MSG没有鲜味增强作用。     

牛骨酶解产物中咸味肽组分的分离纯化及成分研究

采用Sephadex G-15和G-50凝胶色谱柱分离牛骨酶解产物,结合感官分析,得到Sephadex G-15的峰Ⅱ和G-50的峰Ⅲ两个咸味组分;用反向高效液相色谱和基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪分析咸味组分：Sephadex G-15得到的咸味组分中主要有两种成分,相对分子质量在800～1000之间;Sephadex G-50得到的咸味组分中主要有3种组分,相对分子质量在800～2000之间。两种咸味肽组分的极性较强,且均有相对分子质量为849.38的多肽。     

麦胚降血糖肽的分离纯化及鉴定

建立麦胚降血糖肽的分离纯化方法及鉴定活性多肽的结构组成。采用胰蛋白酶酶解麦胚蛋白,得到降血糖多肽,并进行降血糖动物实验。超滤获得高活性组分,离子交换吸附实验选择最佳的树脂,并对麦胚降血糖肽进行离子交换吸附分离,SephadexG-25和SephadexG-15分离,再经过反相高效液相色谱（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）分离高活性成分。最后采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-electrospray ionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS）鉴定活性多肽的结构组成。结果显示酶解麦胚蛋白对α-葡萄糖苷酶的抑制性IC50为10.98?mg/mL,能够缓解糖尿病小鼠的症状。超滤获得分子质量小于5?kDa的高活性组分,IC50为1.60?mg/mL。732型阳离子交换树脂的分离效果最好,2.5%氨水的洗脱率为98.13%,通过动态离子交换吸附分离后,活性显著提高,IC50为0.30?mg/mL。通过SephadexG-25和SephadexG-15分离得到高活性组分,经RP-HPLC分离得到8?个组分（峰）,其中1号峰的活性和含量都最高,IC50为0.098?mg/mL。HPLC-ESI-MS结果显示m/z?274.45的丰度比较高,经离子碎片拼接,共有7?种多肽,其中二肽有1?种,三肽有6?种。本研究对于开发具有降血糖功效的新型功能性食品有一定的作用。     

榛仁降脂活性肽分离纯化及结构鉴定

采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15、反相高效液相色谱及质谱对榛仁分离蛋白降脂活性肽进行分离纯化及结构鉴定,并通过测定3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中脂质积累、总胆固醇及甘油三酯水平,筛选出具有较高降脂活性的肽段。结果表明,经Sephadex G-15分离得到的C3组分的胰脂肪酶抑制、胆固醇胶束吸附及细胞降脂活性均显著高于其他组分。进一步经质谱解析筛选出的肽段Phe-Leu-Leu-Pro-His（FLLPH）与模型组相比,可抑制26.31%的总脂形成,降低32.67%胆固醇和23.87%甘油三酯水平。FLLPH具有较好的降脂活性,本研究可为榛仁降脂活性肽的开发提供理论参考。     

咸味感知与咸味肽的研究进展

随着生活水平的提高,人们的饮食习惯逐渐趋向“健康化”发展。如何平衡“健康”与“美味”的关系,调味这一加工环节至关重要。咸味是5种基本味觉之一,人们日常生活中主要通过添加食盐来达到增咸的目的。食盐在人类生活中发挥着重要的作用,但是过量的钠离子摄入会导致许多心血管疾病。在全球范围内,许多国家或地区的卫生组织均倡议低钠盐饮食,因此在不影响食品风味品质的前提下减少食盐添加量成为目前研究的一大热点。本文围绕咸味感知和减盐研究现状,重点针对咸味肽进行详细介绍,包括咸味肽的来源、制备、纯化鉴定、协同增效作用和应用前景,为咸味肽的开发和应用提供依据和支撑,推动减盐行动。     

中华草龟肉抗肿瘤活性肽的分离纯化及鉴定研究

该研究选取中华草龟肉为原料,以其木瓜蛋白酶酶解所得多肽对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制功效为活性检测指标,采用MTT细胞毒性实验对具有抗癌作用的多肽组分进行追踪测定。先采用截留分子量10 ku的超滤膜对酶解液进行截留,再通过Sephadex G-75、G-50及LH-60等层析技术手段对截留所得活性成分进行分离纯化。RP-HPLC谱图的结果表明,最终分离纯化出了一个纯度较高的抗癌活性组分TP-1,其IC50值约为2.7 mg/mL,呈明显的抗癌剂量依赖性与时间依赖性,且对正常细胞毒性极小。随后通过紫外、红外、圆二色谱对TP-1进行理化性质表征,并采用质谱技术对该多肽主成分分子量进行鉴定。结果表明TP-1中含有β折叠,β转角和无规则卷曲结构,且主成分多肽分子量约为1410.7 u,本研究成果为进一步开展中华草龟活性肽的抗癌机理研究奠定了坚实基础。     

酶解大豆蛋白抗氧化肽的分离纯化与鉴定

对前期优化的碱性蛋白酶最优酶解条件下的大豆蛋白抗氧化肽进行进一步分离、纯化及鉴定。采用高效强阴离子交换柱（HiTrap Q HP）、快速弱阴离子交换柱（HiTrap DEAE-FF）和制备液相色谱方法,对酶解液进行分离纯化,获得高纯度的抗氧化肽SHP-1。通过液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）测定抗氧化肽SHP-1的分子质量,为741.41 Da;采用氨基酸分析仪对抗氧化肽SHP-1的组成进行分析,表明抗氧化肽SHP-1是由5 种氨基酸组成。通过LC-MS/MS对抗氧化肽SHP-1氨基序列进行解析并与大豆蛋白数据库比对,确定抗氧化肽SHP-1氨基酸序列为IPPGVPY,来自于大豆球蛋白G4亚基。     

蛋清抗氧化肽分离纯化及结构鉴定

为了获得高活性、高纯度的蛋清抗氧化肽,以蛋清酶解物为原料,依次釆用超滤、离子交换色谱、凝胶色谱分离纯化抗氧化活性较强的肽段,运用基质辅助激光解吸离子化质谱解析肽链的氨基酸序列。结果表明:超滤法分离纯化EWPH所得的三个组分中,EWPH-Ⅲ(M_W<3 kDa)组分的DPPH自由基清除率最高,达到79.62%。离子交换层析分离纯化EWPH-III所得到的碱性组分B的DPPH自由基清除率最高,达到82.05%。凝胶过滤色谱分离EWPH-III-B所得到4组分中E组分的DPPH自由基清除率最高,为88.49%。高活性高纯度EWPH-III-B-E组分的相对分子质量为237.575,该二肽的氨基酸序列为丙氨酸-甲硫氨酸。