奶粉中阪崎肠杆菌的风险评估

阪崎肠杆菌能引起脑膜炎、NEC和菌血症等，约2．5％～14％婴儿配方奶粉含有阪崎肠杆菌，0％～12％的普通奶粉含有阪崎肠杆菌，含量从0．36-66．0cfu／100g。婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌问题已受到了全世界的普遍关注。本文基于大量研究和调查数据，从奶粉中阪崎肠杆菌的危害识别、奶粉中阪崎肠杆菌的暴露评估、奶粉中阪崎肠杆菌危害特性以及阪崎肠杆菌的检测方法等方面客观地对奶粉中阪崎肠杆菌进行风险评估，并对降低我国婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌风险提出建议。     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比（内参）的应用作一综述。     

食品中阪崎肠杆菌分析及其检测

阪崎肠杆菌是G^-杆菌,属于肠杆菌属中的一个种,是食源性的条件致病菌。主要危害免疫力低下的婴幼儿,导致脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎等疾病。依据FDA提供的“三管”增菌法和DFI改进法,均可以检测出样品中微量的阪崎肠杆菌。该菌具有一定耐热性,广泛分布于食品和周围环境中。通过提高原料质量、改善环境卫生和加大检测力度．可有效降低阪崎肠杆菌的污染．确保婴幼儿的身心健康。     

冰激凌中阪崎肠杆菌的检测

目的 对市售冰激凌中的阪崎肠杆菌进行抽样检测。方法 按照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 (GB 4789.40- 2010)》进行检验。结果 从冰激凌中检出阪崎肠杆菌,经过染色和生化试验, 在29份样品中有3份样品分离出阪崎肠杆菌,检出率为10.34%。结论 市售冰激凌样品中存在一定比例的阪崎肠杆菌,有较大的安全隐患。质检系统应加强对市售的冰激凌的卫生预防与控制。     

辣椒粉中检出阪崎肠杆菌

目的—验证辣椒粉中阪崎肠杆菌存在状况.方法—采用国家标准GB 4789.40-2010,应用VITEK 32全自动微生物鉴定及药敏系统进行检验.结果—从辣椒粉中检出阪崎肠杆菌.结论—阪崎肠杆菌存在于辣椒粉调味品中,存在较大的安全隐患.     

阪崎肠杆菌分子检测研究进展

对分子生物学法检测阪崎肠杆菌的研究进展及在分子检测中内部扩增参比(内参)的应用作一综述.     

新型阪崎肠杆菌选择性分离培养基的研制

目的:筛选一种新型、特异性高的阪崎肠杆菌选择性培养基.方法:通过药敏实验,筛选出对阪崎肠杆菌耐药而对其他杂菌敏感的抗生素;利用抑菌浓度实验、抗生素组合平板实验,筛选出最佳的抗生素组合方式及浓度.将抗生素组合与显色剂添加到基础培养基中,配制成阪崎肠杆菌的新型选择培养基.结果:组合抗生素(4μg/mL万古霉素、0.1μg/mL头孢噻吩)和显色剂(0.1g/L 5-溴-4氯-3-吲哚-a-葡萄糖苷)添加到脑心培养基中,制成阪崎肠杆菌VC选择性显色培养基,能最大限度地抑制杂菌生长,而对阪崎肠杆菌的生长没有影响.经灵敏性实验,对接种的奶粉样品中的阪崎肠杆菌的检出限达到lcfu.结论:制得的新型阪崎肠杆菌选择性培养基特异性强、灵敏度高,可用于奶粉样品的分离检测.     

新型阪崎肠杆菌选择性分离培养基的研制

目的:筛选一种新型、特异性高的阪崎肠杆菌选择性培养基。方法:通过药敏实验,筛选出对阪崎肠杆菌耐药而对其他杂菌敏感的抗生素;利用抑菌浓度实验、抗生素组合平板实验,筛选出最佳的抗生素组合方式及浓度。将抗生素组合与显色剂添加到基础培养基中,配制成阪崎肠杆菌的新型选择培养基。结果:组合抗生素（4μg/mL万古霉素、0.1μg/mL头孢噻吩）和显色剂（0.1g/L5-溴-4氯-3-吲哚-a-葡萄糖苷）添加到脑心培养基中,制成阪崎肠杆菌VC选择性显色培养基,能最大限度地抑制杂菌生长,而对阪崎肠杆菌的生长没有影响。经灵敏性实验,对接种的奶粉样品中的阪崎肠杆菌的检出限达到1cfu。结论:制得的新型阪崎肠杆菌选择性培养基特异性强、灵敏度高,可用于奶粉样品的分离检测。      

检测阪崎肠杆菌间接ELISA方法的建立

建立阪崎肠杆菌(Enterobacter Sakazakii,ES)特异性抗体间接ELISA检测方法,以期作为融合后杂交瘤细胞株的筛选体系。应用灭活的阪崎肠杆菌菌体为抗原,筛选最佳反应条件,建立检测该病原菌的酶联免疫吸附检测方法。通过对ELISA反应条件优化,确定菌体抗原包被的最适工作浓度为2×105mL-1,4℃包被过夜;5%脱脂奶粉进行封闭;血清最佳稀释比为1∶2 000;酶标抗体最适稀释度为1∶1 000倍;最后确定37℃显色10 min,检测灵敏度达到103mL-1。该方法的建立为阪崎肠杆菌单克隆抗体制备过程中阳性杂交瘤细胞株的筛选提供有效手段和奠定实验基础。     

从进口浓缩营养粉中检出阪崎肠杆菌

为保证供特殊人群食用的营养食品的安全,对进口浓缩营养粉进行监测,从中检出1株阪崎肠杆菌。提示特殊食品的监测十分必要。     

乳粉中克罗诺杆菌属阪崎肠杆菌能力验证样品制备及应用

目的 制备均匀性及稳定性均满足要求的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验能力验证样品,用于组织能力验证考核.方法 通过生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定背景菌株及所使用的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)菌株.采用冷冻干燥技术制备均匀性及稳定性均满足要求且各种菌含量为104 CFU/瓶的能力验证菌球.依据CNAS-GL0...     

食品工业中克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌)的污染与控制

克罗诺杆菌是一种新兴的食源性致病菌,能对新生儿引起如脑膜炎、败血症及坏死性小肠结肠炎等疾病,并带来严重的神经系统后遗症,有较高的死亡率,因此受到国内外的广泛关注.该文对克罗诺杆菌的生理生化特点、污染来源、生物膜形成及其在食品工业的污染和控制等方面的研究进展进行概述.     

食品中3M™克罗诺杆菌属分子检测系统评价研究

目的：用不同来源的克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）、不同来源的非目的菌及不同来源的人工染菌食品样品,考核评估3M? MDS分子检测系统（以下简称3M? MDS）对克罗诺杆菌属的检出限、灵敏度、特异性和准确度,以及与国标法（GB4789.40-2016）检验结果的一致性。方法：用3M? MDS对实验室保存的50株已确认克罗诺杆菌属、40株非目的菌株进行检测,确定该试剂盒的检出限、灵敏度和特异性;对240份人工污染不同浓度目的菌样品,用3M? MDS和国标法同时检验,分析方法的准确度和检验结果的一致性。结果：3M? MDS对50株不同来源的克罗诺杆菌属的检测灵敏度为100%,平均检出限为1.79×103CFU/mL;对40株非目的菌检测结果均为阴性,特异性为100%。用3M? MDS与国标方法对人工污染101 CFU/100g、100 CFU/100g 、10-1 CFU/100g克罗诺杆菌属FC718的240份不同来源乳粉、糊精、乳清和乳糖样品进行检测,结果一致性均大于95%,方法准确度为97.5%。结论：3M? MDS方法具有低检出限、高灵敏和特异性特点,在不同食品样品基质中,检验结果呈现良好的准确度,与国标方法检验结果具有高度一致性,是一项适合基层、企业推广的快速、可靠方法。     

Enterobacter sakazakii survives spray drying

Four strains of Enterobacter sakazakii were inoculated into 35% reconstituted skim milk at 10⁷ and 10² cfu/g dry wt. After spray-drying in a Buchi mini spray drier (inlet 160°C and outlet 90°C), the resulting powders were analysed for E. sakazakii by enrichment and enumeration. In all cases, E. sakazakii survived the spray drying process and were detected in the powders with a low inoculum and enumerated in all the powders with the high inoculum for at least 12 weeks. The results emphasize that the controls in place to prevent E. sakazakii from getting to the spray drier are essential.     

阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)分子检测方法研究进展

阪崎肠杆菌(现克罗诺杆菌属)是一种重要的食源性条件致病菌,因其能通过污染婴幼儿配方食品导致严重的新生儿脑膜炎、菌血症和小肠结肠炎等疾病,而受到广泛的关注。其分子生物学检测方法克服了传统检测方法实验操作繁琐、耗时长等问题。目前常用的分子生物学方法主要有普通PCR、实时荧光定量PCR、环介导恒温扩增、探针方法等。     

牛奶发酵过程中阪崎克罗诺杆菌可形成活的非可培养状态

该研究以保加利亚乳杆菌为牛奶发酵剂,研究了牛奶发酵过程中阪崎克罗诺杆菌与保加利亚乳杆菌的相互作用以及阪崎克罗诺杆菌存活量的变化情况,并结合16S rDNA高通量测序技术和PMA-qPCR方法分析阪崎克罗诺杆菌在牛奶发酵过程中是否形成“活的非可培养”状态。结果显示,保加利亚乳杆菌在牛奶中发酵48 h后pH值可达到3.40,酸度值可达212.00。在发酵前期接种阪崎克罗诺杆菌,48 h后pH值和酸度值分别为3.50和193.30;在发酵中期接种阪崎克罗诺杆菌,48 h后pH值和酸度值分别为3.47和214.30。发酵前期阪崎克罗诺杆菌的污染对保加利亚乳杆菌发酵结果的影响更大。阪崎克罗诺杆菌在牛奶中生长48 h后菌浓度可稳定在9.08 lg(CFU/mL);不论在牛奶经发酵前期或中期接种阪崎克罗诺杆菌,发酵后期平板计数法均检测不到阪崎克罗诺杆菌,但16s rDNA和PMA-qPCR技术均可检测到阪崎克罗诺杆菌活菌的存在。该研究结果说明,阪崎克罗诺杆菌在牛奶发酵后进入了“活的非可培养”状态,该状态的存在会导致该菌检测时活菌数量的低估,从而引发乳及乳制品的安全隐患。     

百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用

为探究百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及可能的抑制机理,检测了百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的最 小抑菌浓度（minimal inhibitory concentrations,MIC）及对其生长动力学模型的影响,并测定百里醌处理后阪崎肠 杆菌胞内ATP浓度、胞内pH值、膜电位、细胞膜完整性的变化,最后利用场发射扫描电子显微镜观察细胞形态的 改变。结果表明：百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的MIC为0.3～0.6 mg/mL;百里醌使阪崎克罗诺肠杆菌的生长迟滞期 延长,最大生长速率减小;百里醌影响了阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜的通透性,表现为：质量浓度为MIC和2×MIC 的百里醌使细胞内ATP浓度由6.52 μmol/L分别降低为0.27 μmol/L和0.17 μmol/L,胞内pH值分别由5.69降低为5.22和 4.99,细胞膜完整菌体比例分别降低至80%和22%,引起细胞膜膜电位超极化;场发射扫描电子显微镜观测表明百 里醌使阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜褶皱,菌体干瘪。综上所述,百里醌是通过影响细胞膜通透性和改变细胞形态抑制 阪崎克罗诺肠杆菌。这些结果表明百里醌有潜力作为控制阪崎克罗诺肠杆菌的天然抑菌剂应用于食品中。     

阪崎克罗诺肠杆菌致病性机理研究进展

阪崎克罗诺肠杆菌是一种革兰氏阴性无芽孢肠道杆菌,可导致新生儿和免疫功能不全的婴幼儿严重脑膜炎、菌血症和坏死性结肠炎,是一种非常重要的食源性条件致病菌。目前,国内外对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性及其致病机理的研究报道非常有限。本文通过阪崎克罗诺肠杆菌外膜蛋白A、脂多糖、生物膜、宿主细胞骨架、铁获得机制、海藻糖的存在、超广谱β-内酰胺酶的产生和细胞间相互作用等方面对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性机理进行综述。     

phoP调节子对阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的影响

为研究克阪崎罗诺肠杆菌中phoP基因与环境耐受力的关系,采用Red同源重组方法构建阪崎克罗诺肠杆菌的phoP基因缺失菌株,并从生长曲线、酸碱耐受、温度耐受等方面,研究phoP基因缺失前后阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的变化。结果表明：phoP基因缺失菌株的生长速度明显延缓,该基因的缺失减弱了菌对外界酸碱和高温的耐受性,并缩短了热致死时间;phoP基因缺失菌株抵御胆盐环境的能力亦有所下降,与野生型菌株相比,它在4%、8%、12%胆盐溶液环境中的存活率分别降低了19.93%（P＜0.05）、40.73%（P＜0.01）和45.84%（P＜0.01）。此外phoP基因缺失菌株对渗透压的耐受力与野生株相比也显著降低（P＜0.05）。综合以上结果表明,phoP基因有助于阪崎克罗诺肠杆菌应对外界环境刺激。