干酪乳杆菌LC2W原生质体的制备与再生

以干酪乳杆菌LC2W为出发菌株,对其进行原生质体制备与再生。通过单因素试验研究菌龄、溶菌酶质量浓度、酶解时间及酶解温度对干酪乳杆菌LC2W原生质体制备的影响,并对制备条件进行正交设计优化。结果表明：干酪乳杆菌LC2W原生质体制备的最佳条件为：菌龄8h、酶质量浓度10mg/mL、酶解时间75min、酶解温度42℃,在此条件下制备原生质体并进行再生实验,原生质体形成率达到97.15%,再生率可达到31.25%。研究结果可为L. casei LC2W食品级外源表达系统的构建提供初步的基础。     

乳酸菌原生质体制备与再生研究

从市售酸乳中分离嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌,并对其进行原生质体制备和再生。采用溶菌酶对嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌进行处理,脱去细胞壁以探讨原生质体形成和恢复与菌龄、酶浓度、酶解时间及酶解温度之间的关系,利用四因素三水平的正交试验选出原生质体形成和恢复较适宜的条件。试验结果显示嗜热链球菌原生质体制备和恢复的较优条件为,菌龄16h,酶浓度1mg/ml,酶解时间40min,酶解温度42℃,此时原生质体形成率为98.75%,再生率为23.8%;而保加利亚乳杆菌原生质体制备和恢复的较优条件为,菌龄16h,酶浓度10mg/ml,酶解时间30min,酶解温度36℃,此时原生质体形成率为82.05%,再生率为27.1%。本文研究为这两种乳酸菌原生质体的制备、再生条件及其基因操作和相关研究提供技术思路和实验条件。     

林肯链霉菌原生质体制备条件的研究

对林肯链霉菌SL98原生质体制备条件进行了探索.其原生质形成最佳培养基中含甘氨酸浓度为0.4%,蔗糖浓度为34%;酶解条件是采用溶菌酶浓度4mg/mL,菌龄72h,酶解时间5h,酶解温度为30℃.其最高的原生质体的制备率达16.3%.     

黄色短杆菌原生质体制备与再生条件的研究

目的 研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的最佳条件.方法 用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后,用溶菌酶酶解,研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响.结果 原生质体制备和再生的最佳条件为:预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌,青霉素最适浓度0.4 u/mL,甘氨酸浓度2％,预处理时间2h,酶浓度1 mg/mL,酶解时间12h,酶解温度37℃.结论 在最佳条件下原生质体形成率达99.71％,再生率达16.52％.     

康氏木霉原生质体制备及再生条件研究

研究纤维素酶高产菌株康氏木霉原生质体制备及再生的适宜条件,为该菌细胞融合和诱变育种提供适宜的真菌状态。对影响原生质体形成和再生的各因素(菌龄、蜗牛酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂的成分和浓度)进行试验比较。康氏木霉原生质体制备的最佳条件:菌龄22h,蜗牛酶浓度2.0%,酶解温度30℃,酶解时间2.5h,蜗牛酶溶液中的渗透压稳定剂为0.6mol/L NaCl,再生培养基中的渗透压稳定剂为0.8 mol/L蔗糖。可以获得细胞融合和细胞突变诱导所需的原生质体数量。并观察到原生质体的释放方式主要有2种:顶端释放和段端位释放;以一种方式进行再生。     

乳酒酵母紫外诱变原生质体制备研究

在乳酒酵母原生质体形成率和再生率影响单因素研究的基础上,对菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度、稳渗剂采用L16(4)5正交试验,评价各因素的影响程度,得出适宜该菌原生质体制备的条件.结果表明,菌龄 12 h、酶浓度1.0%、酶解时间1 h、酶解温度28℃、稳渗剂选用KCl的条件下,原生质体形成率76%,再生率62%.     

产辅酶Q10的米曲霉原生质体制备条件研究

为了提高辅酶Q10的产生菌米曲霉菌的基因组改组育种效率,以提高辅酶Q10的产量,本试验对米曲霉原生质体的制备条件进行了研究。通过对影响制备效果的条件,即米曲霉的菌丝菌龄、酶解温度、时间和原生质体稳定剂的浓度四个因素进行全面优化,并利用正交试验确定了原生质体制备的适宜条件:菌龄为12h、原生质体渗透压稳定剂NaCl浓度为0.85mol/L、酶解时间为3.5min、酶解温度为30℃时,米曲霉原生质体制备效果最好,所得原生质体为6.3×106个/mL,再生率达到38.06%。较高的原生质体生成量和再生率为该菌后序的基因组改组研究奠定了基础。     

提高红曲菌9903A原生质体形成数量和再生率的研究

采用酶解法制备红曲菌9903A原生质体。研究红曲菌菌丝体的菌龄、酶种类、酶解温度、酶解时间、稳渗剂和几种再生培养基对原生质体形成和再生的影响。确定酶解最佳条件为:菌龄50h～60h,组合酶(蜗牛酶(0.6%)+溶菌酶(0.4%)+纤维素酶(0.8%)),酶解温度31℃,酶解时间1.5h。研究了稳渗剂对原生质体制备与再生的影响,并对红曲菌9903A原生质体的释放和再生过程进行了观察。结果表明:山梨醇可促进原生质体的释放;蔗糖对原生质体的再生有促进作用。在此条件下原生质体的形成为4.24×108/mL,再生率为52%。     

出芽短梗霉原生质体制备及再生的研究

研究不同的酶解液、茵龄、酶处理的时间和温度、培养方法及其他因素对出芽短梗霉原生质体的形成率和再生率的影响.结果表明:出芽短梗霉原生质体制备所需的最佳条件是酶浓度5 mg/mL(蜗牛酶、纤维素酶)、菌龄24 h、酶解温度37℃、酶解时间1 h,在此条件下原生质体形成率达100%.再生率为64.6%.     

马克斯克鲁维酵母原生质体制备和再生条件的研究

研究了菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度4个单因素对马克斯克鲁维酵母原生质体形成率和再生率的影响，采用菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度、稳渗剂进行5因素4水平的正交试验，分析各因素的极差值，评价各因素的影响程度。结果表明，酶浓度的极差值最高，其次为酶解时间，然后依次为菌龄、稳渗剂、酶解温度，酶浓度为影响原生质体形成的主要因素，原生质体形成和再生的最佳条件为：菌龄为12h，蜗牛酶浓度为1．5％，酶解时间为lh，酶解温度为28℃，稳渗剂为KCl，在此条件下，原生质体形成率为92．3％，再生率为29．6％。     

Antibacterial activity of dextran-conjugated lysozyme against Escherichia coli and Staphylococcus aureus in cheese curd

The purposes of this research were to glycosylate lysozyme with dextran under Maillard reaction conditions and assess the antimicrobial characteristics of the lysozyme-dextran conjugate in a culture medium and cheese curd. Solutions containing lysozyme and dextran were incubated at 60 degrees C and at 79% relative humidity. Gel permeation chromatography and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis were used to follow the glycosylation process. Under optimum conditions 3.7 mol of dextran were coupled to 1 mol of lysozyme. Lytic activity of the conjugate against the cell wall of Micrococcus luteus was about 62% of that of native lysozyme. Evaluation of the lysozyme-dextran conjugate against test microorganisms (Staphylococcus aureus and Escherichia coli) in culture media indicated a progressive increase in antimicrobial activity, with an increase in enzyme-conjugate concentration. The lysozyme-dextran conjugate was also effective against E. coli in a natural food system, as it reduced the bacterial count by 3 log in cheese curd after 40 days of storage. Unlike E. coli, the antimicrobial action of lysozyme against S. aureus was not improved by conjugation with dextran in both in vitro and in vivo tests. Antimicrobial activity of the lysozyme-dextran conjugate against gram-negative bacteria is probably related to the remaining lytic activity as well as the excellent surfactant properties of the lysozyme-dextran conjugate. These results might increase the applicability of lysozyme as a natural antimicrobial ingredient in different food products.     

酯化红曲霉原生质体制备及紫外线诱变育种

以红色红曲霉（Monascus ruber）为出发菌株,用混合酶制取原生质体并对原生质体形成条件进行探讨,并进行紫外诱变选育。采用50h菌龄的菌丝体,使用蜗牛酶（0.6%）＋溶菌酶（0.4%）＋纤维素酶（0.6%）的复合酶液,30℃酶解2h,在该条件下原生质体浓度可达7.8×106个/mL,再生率为7.3%。在最佳紫外照射时间80s下,突变株经筛选,得到一株酯化酶活显著提高、遗传性能稳定的诱变株HN215-6,其酶活达468.4mg/100mL,比出发菌株HN215提高了1.66倍。     

Ultrafiltration-modified chicken egg white lysozyme and its antibacterial action

The aim of the study was to produce a lysozyme preparation with an increased content of enzyme polymeric forms using the ultrafiltration (UF) technique. The effect of selected parameters of the membrane process on the extent of enzyme modification was examined. The study showed that the membrane technique, developed for the production of lysozyme monomer, could also be used in the direct production of a preparation containing enzyme polymers. Under optimal conditions of the modification procedure, the obtained preparation contained 53.3% of lysozyme polymeric forms. The effectiveness of the antibacterial action of UF-modified lysozyme against selected strains of bacteria was determined. Its bacteriostatic activity depended on the applied modification conditions. Among lysozyme preparations modified by UF, the highest bacteriostatic activity against selected strains of bacteria was recorded in the preparation containing 53.3% polymeric forms. The modification procedure facilitates the extension of the antibacterial spectrum of lysozyme against Gram-negative bacteria ( Pseudomonas fluorescens ) .     

阿魏酸化学修饰溶菌酶及扩展抑菌谱的研究

为了使溶菌酶扩展抑菌谱,同时作用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,本文采用了阿魏酸修饰溶茼酶.采用EDAC作为缩合剂,使溶菌酶赖氡酸残基上的ε-氨基共价结合阿魏酸的羧基,形成一定程度的阿魏酸修饰酶结果显示:与天然溶菌酶相比,修饰酶的酶活力略有下降,但是修饰酶扩展了抑菌谱,对革兰氏阴性菌的抑菌作用增强.修饰酶对大肠杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度均为0.5mg/mL,而对金黄色葡萄球菌的抑菌作用略有下降.     

STUDIES ON THE INACTIVATION OF LYSOZYME BY MALONALDEHYDE

The interaction of malonaldehyde with lysozyme has been assessed with reference to incubation time, pH, concentration and aging. Gel filtration studies revealed that freshly prepared malonaldehyde contains a small proportion of compounds absorbing at 267 and 350 nm, which shows significant increase upon incubation of malonaldehyde. While higher concentration of malonaldehyde leads to inactivation of enzyme, lower concentration (2.5 mM) stimulates the lytic function of lysozyme. Stimulation and inactivation of the enzyme have been discussed in the context of degradation of malonaldehyde.     

保护液结合暂养工艺对花鲈无水活运效果的影响

研究花鲈生态冰温无水活运技术,在暂养过程添加VC和运输过程中加入保护液,研究其对花鲈血液生化指标、鳃组织Na＋/K＋-ATPase活力、血清溶菌酶质量浓度、免疫球蛋白M（immunoglobulin M,IgM）水平等鱼体指标的影响。结果表明：花鲈鱼暂养水中加入30 mg/L VC,暂养12 h,冷驯化后包装前浸入G2（0.09%（质量分数,下同）溶菌酶＋0.3%山梨糖醇＋0.08%姜液）保护液中2～3 s,取出独立包装后进行无水活运的保活效果最好。C2G2保护液（30 mg/L VC（暂养水）结合G2保护液）使用组花鲈在保活运输过程中血清中的总蛋白和白蛋白质量浓度保持稳定,且高于其他保护液处理组,血液中溶菌酶、IgM及鳃中Na＋/K＋-ATPase也得以保存,使用保护液可有效降低花鲈鳃、肾功能损伤,在花鲈体表形成一层保护膜的同时也有利于鱼体将代谢废物排出。使用保护液可使花鲈无水保活运输后死亡率降低1%～5%。     

红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养破壁提取虾青素的研究

环状芽孢杆菌能以红法夫酵母细胞壁为唯一碳源进行发酵产胞壁溶解酶,将红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养,可使环状芽孢杆菌在生长的同时产酶并逐渐溶解酵母细胞壁,从而提取虾青素。通过对红法夫酵母与环状芽孢杆菌两阶段混合培养条件的优化,总结出红法夫酵母产虾青素及酶法破壁提取的适宜工艺为:培养基初始糖浓度为30g/L,环状芽孢杆菌的最佳接种时间为红法夫酵母培养60～72h,接种量为10mL/L(1010个细胞/mL),接种后最适培养温度为30℃,pH为6.5,总发酵时间为120h,在此条件下,红法夫酵母虾青素产量可达到8960.2μg/L,虾青素最终提取率可达到96.8%。     

钝齿棒杆菌AS1.998原生质体形成与再生条件的研究

研究了影响L-异亮氨酸(L-Isoleucine)产生菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.998原生质体形成和再生的各个因素。结果表明:菌体培养至对数生长期,0.8 U/mL青霉素G处理3 h后,1.0mg/mL的蛋清溶菌酶37℃,150 r/min酶解15 h,原生质体形成率可达98.0%以上,在含8.5%蔗糖的再生完全培养基上,再生率可达20.0%～30.0%。     

Growth Temperature and Action of Lysozyme on Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes Scott A grown at 37°C were 1.8–2.5 fold more resistant to lytic action of lysozyme than cells grown at 19, 12, or 5°C. Results suggest that lysozyme may be an effective preservative for controlling L. monocytogenes in refrigerated foods.