中国林蛙(Rana chensinensis)蛙皮抗菌肽的制备及抗菌作用研究

目的从中国林蛙的皮肤中，提取纯化具有抗菌活性的多肽物质，并对其进行抑菌活性的研究。方法用甲醇进行粗提取。对提取的甲醇浓度、甲醇用量、浸提时间和浸提次数，采用L9（3^4）正交实验，以蛋白含量作为指标，确定最佳提取条件。得到的粗提物经Sephadex G-75、Sephadex G～50和Sephadex G-25凝胶过滤进一步分离纯化获得抗菌肽。对抗菌肽进行氨基酸组成分析，采用杯碟法进行抑菌活性研究。结果提取林蛙抗菌肽的最佳工艺条件：甲醇浓度80％、甲醇体积为蛙皮重量的6倍、提取时间24h，提取次数3次。提取的粗提物经凝胶过滤后得到抗菌肽。抗菌肽的氨基酸组成中，碱性氨基酸占22．1％。酸性氨基酸占13．9％。抗菌肽对细菌的最低抑菌浓度分别为：枯草杆菌73．25μg/ml，金黄色葡萄球菌51．75μg/ml,大肠杆菌51．75μg/ml，铜绿假单胞菌51．75μg/ml。结论经甲醇提取和凝胶过滤可从中国林蛙皮肤得到抗菌肽。该抗菌肽为碱性多肽，对革兰阳性细菌、革兰阴性细菌均有抑制作用。     

中国林蛙皮抗菌肽的提取纯化及抑菌活性检测

采用酸化甲醇法提取中国林蛙皮肤中的抗菌肽,并采用凝胶色谱的方法对提取物进行纯化。结果表明：采用Sephadex G-50 和Sephadex G-25 串联凝胶层析法获取的F2 组分,即纯化后的抗菌肽的抑菌率可达90% 以上。抗菌肽对革兰氏阴性菌和阳性菌以及真菌均有一定抑制效果。对各受试菌株的最小抑菌浓度(MIC)分别为：金黄色葡萄球菌和链球菌为0.2mg/mL;枯草芽孢杆菌和大肠杆菌为0.4mg/mL;蜡样芽孢杆菌为0.8mg/mL;白色念珠菌为1.2mg/mL;酿酒酵母和毛霉为1.5mg/mL;根霉为2.0mg/mL。     

宣威火腿中抗菌肽的分离、纯化及鉴定

为探究干腌火腿中生物活性多肽的抗菌活性及其组成,选取产自中国云南省曲靖地区的宣威火腿为材料,通过缓冲液浸提的方法提取火腿中的多肽成分。以粗提多肽对单增李斯特菌和O157型大肠杆菌的生长抑制情况为指标进行抗菌性评价,同时结合离子交换色谱、尺寸排阻色谱等技术对宣威火腿粗多肽进行分离与纯化,并选取其中抑菌活性较强的组分进行氨基酸序列测定。抑菌实验发现宣威火腿粗多肽具有显著抑制单增李斯特菌和O157型大肠杆菌生长的效果;经过逐级分离纯化得到的各组分具有不同的抑菌活性。其中组分7活性最强,对大肠杆菌和李斯特菌的抑菌率分别为98%和56%。通过Nano-LC-ESI-MS/MS肽序列鉴定,最终得到抑菌活性较强的多肽序列,分别为QYYNGEEHVRFDSDVGEYR、LRNLPNLEVLDLGTNFI、FASFEAQGALANIAVDK。将鉴定得到的3条多肽化学合成后进行抑菌实验发现,合成多肽均具有较好的抑菌效果,对O157型大肠杆菌的生长抑制效果均显著高于单增李斯特菌。研究结果表明宣威火腿中含有抑菌效果的肽类成分,从而为阐释宣威火腿多肽的功能特征提供理论依据。     

不同分子量澳洲坚果多肽氨基酸组成与抑菌活性

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备多肽（MNP-0）,通过分级透析将其分离为8种不同分子量的澳洲坚果多肽（MNP-1、MNP-2、MNP-3、MNP-4、MNP-5、MNP-6、MNP-7、MNP-8）组分,测定其多肽含量、氨基酸组成与抑菌活性。结果表明:不同分子量澳洲坚果多肽呈现不同的质量占比,氨基酸组成也有所差异。其中,澳洲坚果多肽MNP-8占比最高,为25.09%,其所含有的与抗菌作用有关的丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、脯氨酸及总疏水性氨基酸占比最高,分别为3.38%、2.42%、4.67%、4.39%与26.92%。多肽MNP-6占比也较高,为18.52%,与多肽MNP-4无显著性差异（P>0.05）,其所含有的与抗菌作用有关的赖氨酸占比最高,为6.03%。不同分子量澳洲坚果多肽抑菌效果也不尽相同,其对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌抑菌活性较好,对白色念珠菌与黑曲霉相对较差。其中,澳洲坚果多肽MNP-8对金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌抑菌活性最好,在4 mg/mL浓度下,其抑菌圈直径分别为15.92、14.67、13.70、16.98、12.47 mm,最低抑菌浓度（MIC）分别为4.0、5.0、4.5、3.5、18.0 mg/mL。不同分子量澳洲坚果多肽的抑菌活性与其分子量及氨基酸组成密切相关。     

不同加工方式对鳙鱼鱼鳃制备抗菌肽的影响

以鱼类下脚料鳙鱼鱼鳃为原料,采用酸解法、高温法、高压蒸汽法和复合法制备抗菌肽。以对大肠杆菌的抑菌率为评价指标,在单因素试验基础上,运用正交设计优化抗菌肽酸解法制备条件;研究抗菌肽的高温法、高压蒸汽法和复合法制备条件,探讨不同制备条件对抗菌肽抑菌活性的影响。结果表明:最佳制备条件为1 g鳙鱼鱼鳃在0.1 MPa高压蒸汽下作用15 min,再通过6%乙酸酸解24 h,此条件下所制备的鳙鱼鱼鳃抗菌肽的抑菌率可达33%。广谱抗菌试验表明:鳙鱼鱼鳃抗菌肽对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用。     

大头金蝇幼虫抗菌肽提取纯化及抑菌活性研究

目的:从大头金蝇幼虫中分离纯化天然抗菌肽,并检测抗菌肽的抑菌活性。方法:提取大头金蝇幼虫抗菌肽,粗提物经凝胶过滤色谱、阳离子交换树脂、反相色谱纯化,纯化产物检测其抑菌活性并利用GFC-HPLC测定其分子量。结果:最终纯化出一个活性组分,该组分对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为20.40μg/m L,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为2.04 mg/m L,对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.17 mg/m L;该活性组分分子量大小为2570 u。结论:该抗菌肽组分对铜绿假单胞菌有较强抑菌活性,有较好的开发利用价值。     

虎奶菇菌丝体抗菌肽提取工艺优化及活性研究

目的:提高虎奶菇菌丝体抗菌肽得率和抑菌率。方法:将抗菌肽的得率和对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抑菌率作为评价指标,在蛋白酶筛选的基础上,优化虎奶菇菌丝体抗菌肽的提取工艺,并测定其抗菌肽的最低抑菌浓度。结果:碱性蛋白酶酶解制备虎奶菇菌丝体抗菌肽的最佳工艺条件为酶解温度39.5℃、酶解时间3.2 h、pH值11.1,料液比1∶20 (g/mL),酶添加量6 000 U/g,此条件下虎奶菇菌丝体抗菌肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的实际抑菌率分别为74.17%和86.22%,抗菌肽提取率为22.67%。抗菌肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC值分别为5.0,2.5 mg/mL。结论:虎奶菇菌丝体抗菌肽具有显著的抑菌活性,尤其是对大肠杆菌的抑菌作用更强。     

不同储存、加工条件下辣木籽抗菌肽的抑菌稳定性

旨在为辣木籽抗菌肽的储存、加工提供参考,以实验室前期筛选的具有较好抑制金黄色葡萄球菌生长的辣木籽肽F2和F3为原料,测定其在不同储存、加工条件下的相对抑菌率,分析抑菌稳定性。结果表明：低温储存有利于辣木籽抗菌肽F2和F3抑菌活性的保留,且储存温度为-20℃时,其抑菌活性受储存时间影响较小;F2、F3随pH增大相对抑菌率先升高后降低,F2、F3适宜的pH分别为6和8;加工温度、超声波功率升高,F2、F3相对抑菌率降低;相比于Na⁺和K⁺,Mg²⁺对F2、F3相对抑菌率的降低作用更大。实际加工和储存过程中应选择合适的条件,以保证辣木籽抗菌肽抑菌活性的保留。     

枯草芽孢杆菌菌株B_3抗菌肽的分离纯化与鉴定

针对1株分离自甘肃河西盐碱土壤的具有产抗菌肽潜质的枯草芽孢杆菌B_3菌株(Bacillus subtilis B_3),拟构建一种有效的抗菌肽分离纯化方法,旨在为获得该抗菌肽纯品及其结构信息,并为抗菌肽制备及其制品检测提供方法参考。采用由阳离子交换层析、疏水层析和尺寸排阻层析单元组成的串联柱层析系统对B_3菌株液态发酵产物进行初步分离,对不同时段的收集液做抑菌实验,比较评价分步层析效果;再通过反相HPLC进一步分离纯化后用质谱分析检测,以获得具有抑菌活性多肽的分子质量及结构信息。经串联层析法分离的具有抑菌活物质是一种小分子富脯氨酸抗菌肽,其氨基酸序列Pro-Tyr-Ile-Pro-Gln-Pro-Arg-Pro-Pro-His-Pro-Arg-Leu,分子质量为1 567.86 Da,等电点为10.84。经美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库比对,发现其为一种未报道的多肽。经抑菌活性检测表明,该抗菌肽对大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏杆菌(Salmonella enterica subsp.enterica)均有抑菌作用,其最小抑菌质量浓度均为0.020 312μg/mL。同时,该抗菌肽表现出较强的耐热性、耐酸碱性和光照稳定性,是一种对供试靶标菌具有抑菌活性的新抗菌肽。     

蜂胶提取物的抑菌效果研究

用不同方法提取蜂胶有效成分,进行体外抑菌试验。结果表明:各种提取方法对食品中的常见菌都有不同程度的抑制作用,其中对革兰氏阳性菌抑菌作用较好;各种方法提取物对不同细菌的抑菌效果也不一样,其中以超声波提取效果最好,其最小抑菌浓度为:大肠杆菌:0.8%、沙门氏菌0.8%、金黄色葡萄球菌0.1%、蜡状芽孢杆菌0.1%、枯草杆菌0.2%、鸡蛋表面混合菌0.2%。     

恒山黄芪种子中抗菌肽提取条件的优化和抑菌率测定

目的:对黄芪种子抗菌肽提取条件进行优化,提高提取率并测定抑菌率。方法:以黄芪种子为材料,使用双指数响应面分析法对其提取条件进行优化,使用96孔板法测定抑菌率。结果:黄芪种子抗菌肽的最佳提取条件:浸提液为EDTA缓冲液,料液比为1:5 g/mL,浸提时间为16.5 h,硫酸铵质量百分比浓度为82%。此工艺下,黄芪种子抗菌肽的抑菌率可达80.3%,比优化前(75.6%)提高了4.7%;提取率可达79.6%,较优化前(67.2%)提高了12.4%。结论:采用双指数响应面分析法对黄芪种子抗菌肽的提取条件的优化有效,并且抑菌率也有很大提升。     

中国林蛙蛙皮肽抗菌性质及其机理的研究

本实验对从中国林蛙的皮肤中提取的蛙皮肽的抗菌性质及其机理进行了研究。结果表明,该蛙皮肽抗菌谱较广,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母菌都有较好的抗菌效果,其抗菌活性具有很强的热稳定性,且在酸性条件下抗菌活性强,当pH 值大于8 时丧失抗菌活性。对经蛙皮肽处理的枯草杆菌作电镜扫描检查,发现细菌细胞壁出现破损或穿孔,而对照组细菌壁结构完整,表明该蛙皮肽的抗菌机制是通过破坏细菌细胞壁,使细胞质外流而致菌体死亡。     

三种方法提取的艾叶有效成分的抑菌作用比较

目的：筛选艾叶有效成分的最佳提取方法。方法：采用水煎煮法、有机溶剂常规法、超声法3种方法分别提取艾叶有效成分,通过琼脂打孔扩散实验测定艾叶提取液对5种常见细菌的抑菌效果。结果：超声法提取液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果最明显,有机溶剂常规法次之,水煎煮法抑菌效果最差;三种方法得到的提取液对产气杆和痢...     

七种鞣质类中药提取物的抗菌作用

目的研究五倍子、石榴皮、虎杖、大黄、黄芩、生地榆、柯子等7种中药材提取物对从养殖病鳗中分离得到的12株常见病原菌的抑菌作用。方法采用索氏提取法和超声提取法,以水和乙醇为提取溶剂分别萃取7种中药的有效组分,采用平板稀释法对12种菌株开展药物敏感实验,测定各种中药提取物对12种致病菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果 7种中药提取物对12种菌都有不同程度的抑制作用。对于五倍子、石榴皮、大黄、虎杖4种药,索氏提取效果比超声提取效果好;对于生地榆和柯子,超声提取效果比索氏提取效果好。超声醇提五倍子抑菌效果最好。结论 7种中药提取物单用对病原菌均有不同程度的抑制作用,不同乙醇体积分数,提取中药与溶剂的比例对抑菌效果影响显著。     

竹叶提取物对食源性细菌抑制效应的研究

目的 利用两种方法对竹叶有效抑菌成分的进行提取,并对3种食源性微生物进行抑菌圈试验比较, 研究竹叶提取物对食源性细菌的生长抑制效果以及对比两种提取方法的不同提取效果。方法 利用乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂为提取介质, 使用水浴浸提法和超声波微波提取法获得竹叶提取液。并利用提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、恶臭假单胞菌三种目标菌株使用抑菌圈法进行抑菌实验。结果 利用乙醇 冰醋酸、丙酮、乙酸乙酯为提取介质的抑菌圈实验表明: 三种提取介质都能提取到竹叶有效抑菌成分, 但乙酸乙酯的提取效果相对较好, 另外, 超声波微波提取法在提取时间和效果上均优于水浴浸提法。结论 竹叶提取液对食源性细菌的生长有较高的抑制作用, 可用于天然食品防腐剂的开发。在竹叶有效成分的提取方面超声波微波提取法可替代传统的水浴浸提法。     

抗菌肽的功能及生产研究进展

为进一步了解抗菌肽的研究现状,以期为抗菌肽的纯化鉴定、生产和应用提供理论依据,对抗菌肽的功能,纯化鉴定方法,人工合成和基因工程表达进行了综述。抗菌肽不仅具有广谱的抗菌活性且有抗癌、抗病毒、促进伤口愈合等作用,抗菌肽经乙酸提取,反相液相色谱纯化是较常见的方法,抗菌肽的人工合成多采用固相合成,基因重组一般包括三个内容：抗菌肽的基因结构分析,抗菌肽的基因表达调控及互补脱氧核糖核酸（cDNA）编码,抗菌肽的基因表达系统。     

响应面法优化大豆分离蛋白提取及复合酶解制备活性肽

用碱提酸沉法从大豆中提取大豆分离蛋白,并经单因素及响应面优化法确定大豆分离蛋白最佳提取工艺为碱提时间60 min、碱提温度60℃、碱提pH值11.0、酸沉pH值5.0.使用最佳提取工艺提取大豆分离蛋白提取率为29.25％.用胰蛋白酶、糜蛋白酶分别酶解大豆蛋白产生的肽均具有抑菌活性,而采用胰蛋白酶与糜蛋白酶复合酶解大豆分...     

卵白蛋白源抗菌肽的分离纯化与结构鉴定

以卵白蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解制备具有抑菌活性的蛋白肽。通过超滤和Superdex peptide 10/300凝胶色谱分离技术获得高抑菌性组分,以抗菌肽对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌性为试验指标,筛选最佳抑菌性组分,再进行反相高效液相色谱分离,测定分离得到的9个组分抑菌活性,发现C3组分的抑菌活性和得率最高,其中大肠杆菌及沙门氏菌抑菌圈直径分别为(19.32±1.45),(18.74±1.27)mm。最后采用高效液相色谱—电喷雾—质谱鉴定抗菌肽的结构,显示氨基酸序列为GlyLeu-Glu-Pro-Ile-Asn-Phe-Gln(GLESINFQ)。该肽经固相合成纯度为95.84%,其抑菌活性与C3组分无显著性差异(P0.05),从而证明卵白蛋白源抗菌肽发挥抑菌活性的成分主要是肽段GLESINFQ。     

超声波-双酶法协同提取林蛙皮多糖的工艺优化

以野生中国林蛙皮为原料,优化超声波-双酶法协同提取林蛙皮多糖的工艺参数。结果表明:超声波提取优化工艺条件为料液比1∶40(g/mL),超声功率600W,超声处理时间25min,提取多糖得率为1.18%。在超声波优化结果基础上,进行双酶法处理,得出最佳酶解条件是pH9.0,酶解温度45℃,碱性蛋白酶添加量2.3%、胰蛋白酶添加量2.8%,酶解时间4h,多糖得率为2.286%。由此可见,超声波和酶法协同处理是提取林蛙皮多糖的一种有效的提取方法。