荧光定量PCR仪计量校准结果的影响因素分析及控制

分析了荧光定量PCR仪计量校准过程中,温度检测部分和核酸样品定量检测部分的影响因素和控制方法,为校准实验室减小试验误差,提供准确可靠的荧光定量PCR仪计量校准结果提供参考。     

实时荧光定量PCR仪关键参数检测分析

温度和光学是实时荧光定量PCR仪的关键参数,在疫情防控过程中,实时荧光定量PCR仪性能可靠与否,直接关系着病毒是否会被"漏检".本文采用自主研发的实时荧光定量PCR仪专用温度和光学校准装置,对实时荧光定量PCR仪的关键参数进行了检测,检测结果能够真实地反应实时荧光定量PCR仪关键参数的状态,有助于提高实时荧光定量PCR仪的检测结果可靠性.     

qPCR仪Tm校准的影响因素及结果分析

qPCR仪熔解曲线校准在物理参数层面,可更加直观地反应荧光定量PCR仪温控及光学系统的可靠性及相互影响,是全面评估荧光定量PCR仪的校准手段。由于熔解过程中,预熔解至熔解阶段的温度爬升速率不同,导致校准结果差异,因此,本文通过实验设计,分析了不同熔解爬升速率条件下T_m校准结果的差异和熔解曲线校准法的注意事项,为qPCR仪综合物理参数校准提供了参考。     

一种基于熔解曲线的实时荧光定量PCR仪校准方法

针对实时荧光定量PCR仪光学校准方法的不完善,通过对实时荧光定量PCR仪校准必要性、基本结构和数学原理的分析,基于熔解曲线从C_t值均匀度、C_t值精密度、通道峰值高度一致性、线性灵敏系数、熔解温度漂移和熔解温度比等方面对实时荧光定量PCR仪校准方法进行分析。     

PCR仪的分类及校准方法分析

该文阐述了现有PCR仪的分类,对现行的PCR仪校准方法中温度校准和荧光检测系统校准进行了分析总结.比较了各温度校准装置及不同测温方法的优劣,对最新提出的以物理光学方法代替标准物质校准荧光检测系统进行分析和评价.     

快速核酸检测仪温度校准装置研制

新冠病毒的全球蔓延,催生快速核酸检测仪的发展,从而提出快速核酸检测仪的计量校准需求。温度控制在快速核酸检测仪的基因扩增过程中起着关键作用,由于其升降温速度快,比常规的PCR仪对温度的控制要求更高,从而对其温度参数的计量校准提出新的要求。该文通过对目前市上使用较多的两种试剂孔结构的快速核酸检测仪模型仿真,采用高精度温度传感器,通过低功耗高速数模转换设计、模块对接与协同集成、数据存储与保护设计、供电系统与能耗分配优化、无线传输模块设计与接口调试,成功研制锥形孔型和扁平孔型无线温度采集器,能独立完成温度数据采集、ADC转换和无线传输的功能。通过PC专用校准软件开发实现对实时荧光PCR快速核酸检测仪温度参数的校准。校准装置经计量检测和试验验证,温度测量最大允许误差为±0.1℃,最高采集频率为10Hz,满足快速核酸检测仪校准的要求。     

质控图在荧光定量PCR检测室内质量控制中的应用研究

针对荧光定量PCR仪的温度性能及扩增质量,本文采用PCR仪无线温场校准装置及大肠埃希氏菌EHEC DNA标准品作为质控品,对PCR仪的扩增温度及扩增质量进行测试,并绘制质控图.结果表明质控图能够连续、动态地反应同一台荧光定量PCR仪若干次试验的稳定性及扩增质量.通过绘制质控图对实验结果和扩增温度进行质控,能尽早发现扩增异常的实验批次或温度产生漂移的设备,保证于弱阳性样品的检出,避免漏检、误检.     

荧光基线对定量基因扩增仪(PCR)校准结果的影响

为解决荧光基线对定量基因扩增仪(PCR)样本偏差校准结果的影响,文章提出了一种适用的计算思路及计算方法。该方法通过建立实时荧光PCR仪绝对定量计算模型,得到基线对样本示值误差的影响计算公式。为验证该方法,采用外标绝对定量的实验方法,得到不同荧光基线条件下的样本偏差拟合曲线。通过此方法计算出最优荧光基线,并对PCR仪进行调整后得到较小的样本偏差。     

荧光定量PCR仪温度控制系统

介绍了两种常见的用于荧光定量PCR仪的温度控制系统。首先概述了采用经典的比例-积分-微分控制算法的温度控制系统,结合了自动调谐算法,具有易实现和循环时间短等优点,但是难以适应荧光定量PCR仪器高准确度的要求。因此,又介绍了一种荧光定量PCR仪器的多模态温度控制系统,采用了模糊PID控制算法,与第一种温度控制系统相比,该系统具有较短的稳态时间、较小的超调量、较强的鲁棒性和较高的准确度。介绍的两种温度控制系统对进一步开发利用荧光定量PCR仪的测试校准工作具有一定的参考价值。     

对于PCR设备温度验证的一些看法

PCR设备广泛应用于临床疾病诊断、遗传基因检测、动物疾病检测(如禽流感)、食品安全检测及医学、农牧、分子生物学、司法鉴定等科学研究。目前使用的PCR设备主要有定量PCR仪、梯度PCR仪、PCR增扩仪、基因PCR仪等,其基本原理是经过多次热循环对需要检测的样品或标本进行性能实验。包含的过程主要有高温变性温度、低温复性温度、适温延伸温度等。探讨如何实现对PCR仪的计量校准使得量值溯源能够建立和完善,以保证仪器用于样本检测、科学研究等结果数据的可靠。从而能够为我国基因研究、食品安全检测、医学诊断等提供必要的保障,项目社会效益和经济效益显著。     

聚合酶链反应(PCR)仪温度校准装置设计

聚合酶链反应(PCR)被广泛应用于生命科学研究、生化分析、临床诊断、药物分析等各个需要基因克隆和制造突变的领域。PCR仪随着频繁使用和使用时间增加,其温控传感器精度下降和导热胶老化等问题较为严重,从而整体降低了仪器的控温精度,导致目标DNA的扩增受到影响。因此,PCR仪需要进行定期温度校准。目前,国内市场上的PCR仪温度校准系统多为国外产品,价格均极其昂贵。因此,本文设计一款PCR仪温度校准装置,实现对PCR仪温度参数的校准。     

浅谈PCR仪温度校准的必要性及方法

文章分析了PCR仪使用的现状及其进行温度校准的必要性,提出了PCR仪温度校准的方法和校准项目(温度准确性、温场均匀性、升降温速率、最大超调温度)以及数据处理方法,并分析了每一校准项目的重要性。     

风量仪校准方法的研究

介绍了校准风量仪的一种方法,并对结果数据进行分析。该方法采用低速环形风洞和文丘里管节流装置,以高等级数字压力计为核心溯源装置,对流经风量仪的瞬时体积流量进行校准,并对可能影响校准结果的温度和压力变化进行定量评估,通过大量的试验数据表明,该方法能较好地满足风量仪校准需求。     

生物微流控PCR荧光芯片微通道动态检测系统研究

研究和建立了生物微流控PCR荧光芯片微流控微通道动态检测系统,对该系统的多光路光纤校准进行了研究,获得了荧光检测的重复性(偏差:2.6%)和稳定性(偏差》2.7%)等.实验结果表明:该系统可用于准分子激光制备高聚物基生物微流控PCR荧光芯片最佳工艺激光制备参数的优化设计;可用于生物微流控PCR荧光芯片生物分析时的实时荧光定量检测;也可用于对激光荧光检测微型化技术与生物芯片光谱检测集成化提供多功能实验基础和性能评估体系.     

聚合酶链式反应分析仪温度校准系统

针对聚合酶链式反应(PCR)仪温度校准的需求,提出一种热敏电阻的封装方法,研制出基于热敏电阻传感阵列的PCR仪温度在线校准系统,并进行了实验验证。结果表明:研制的PCR仪温度校准系统的均匀度不大于0.15℃,示值误差绝对值不大于0.06℃,示值误差的扩展不确定度优于0.07℃ (k=2)。利用研制的温度校准系统对PCR仪进行了温度校准,获得了校准PCR仪的示值误差、均匀度和升、降温速率等参数。     

基于无线传感网络PCR仪温度校准装置的研制

本文介绍了一种无线传感网络PCR仪温度校准装置的研制,主要包括无线温度传感器及无线手持接受处理装置的设计.采用标准铂电阻温度计与电测设备连接构成高精度测温系统对校准装置性能进行测试,测试结果符合JJF 1821-2020《聚合酶链反应分析仪温度校准装置校准规范》要求.     

犬细小病毒Proofman-LMTIA检测方法

为评价Proofman探针的梯型熔解温度等温扩增技术（LMTIA）检测核酸的性能,以Proofman-LMTIA快速检测犬细小病毒为例,采用实时荧光定量PCR方法和微滴式数字PCR方法进行对比分析。针对犬细小病毒基因的特异性序列设计引物和Proofman探针,通过优化反应条件,对方法的特异性、灵敏度进行测试,再通过实时荧光定量PCR方法、微滴式数字PCR进行对比验证。结果表明,所建立的Proofman-LMTIA方法在最适反应温度为61℃时,与猫、犬等基因组DNA无交叉反应,灵敏度达到8拷贝/μL,且能够在20 min内完成检测,与实时荧光定量PCR和数字PCR方法结果具有一致性。该方法不仅在恒温条件下即可扩增,且具有快速、灵敏、高效等优点,适用于病毒的现场快速检测。     

使用标准物质校准荧光定量PCR仪生化参数的解析

依据JJF 1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》,使用标准物质对荧光定量PCR仪生化参数进行校准,详细描述了标准板的制备过程,提出了操作建议,并且举例演示。     

实时荧光定量PCR检测系统的研究

实时荧光定量PCR仪是当前临床核酸检测、分子诊断以及生命科学研究的关键设备,目前广泛应用于生物学及医学研究的各个领域。通过对实时荧光PCR检测系统的新结构革新,采用底部快速扫描技术及先进的半导体制冷器控制的升降温系统,使实时荧光PCR检测系统性能得到飞跃,达到国际先进的水平。     

功率设置对微波消解仪温度波动度影响分析

本文主要介绍了微波消解的原理及优势，分析了微波消解仪功率设置对其试验结果的影响。根据微波消解仪温度校准的重要性及功率设置对温度校准的重大影响，在不同功率条件下，对微波消解仪进行温度校准试验，并对结果进行分析。