The Research on the Formation Mechanism of Water Insoluble Precipitate in Baker＇s Yeast Hydrolyzate

以导致面包酵母木瓜蛋白酶酶解液浑浊的沉淀物质为研究对象,分析了该沉淀物质的基本化学组成、氨基酸组成、分子量分布以及在不同溶剂和不同pH值缓冲液中的溶解度,从而探讨了该沉淀物的形成机理。研究结果表明,沉淀物质（以干基计）主要组成成分为：蛋白质62.00%、总糖22.80%和灰分15.50%;分离沉淀前后酶解液的分子量分布结果表明,有分子量小于1000 u的肽分子参与沉淀物的构成;氨基酸分析显示,沉淀物质中的疏水氨基酸含量占46%,高于酶解液中的32.03%,说明疏水作用可能是该沉淀物形成的主要推动力;沉淀溶解度定性与定量测定显示沉淀在水和氨水中微溶,且等电点在pH6.5附近。     

珍珠贝肉蛋白酶解液浑浊物质组成及形成机理研究

研究导致珍珠贝肉蛋白复合蛋白酶酶解液浑浊的浑浊物质基本组成及浑浊形成机理。结果表明：浑浊物质主要组成成分为：蛋白质(占干质量54.3%)和脂肪(占26.1%);十二烷基磺酸钠- 聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)显示浑浊物蛋白主要由小分子肽构成;氨基酸分析显示其疏水氨基酸含量为42%,高于酶解液(38.8%);十二烷基磺酸钠(SDS)比胍基盐酸、尿素和氯化钠能更加有效地解聚酶解液体系的浑浊物质,粒度分析验证显示,浓度为8% 的SDS 能够有效地降低浑浊物的粒径,浑浊物质平均粒径从1954.3nm 降低至97.9nm,表明该浑浊体系是由小分子肽通过疏水相互作用形成的,而脂肪对酶解液浑浊度影响不大。     

响应面优化冰岛刺参内脏团抗氧化肽制备工艺及其组成分析

以冰岛刺参内脏团蛋白为原料,利用复合蛋白酶酶解制备抗氧化肽。在单因素实验基础上,通过响应面法优化酶解工艺条件,并分析其抗氧化活性、分子量分布和氨基酸组成。结果表明,最佳工艺条件为底物质量分数4.4%,加酶量4887 U/g,pH7.0,酶解温度56 ℃,酶解时间4.2 h,在该条件下,2 mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率可达89.18%±0.11%,0.5 mg/mL酶解产物的ABTS自由基清除率和Fe2+螯合率分别为68.11%±0.12%、72.59%±0.08%,1.5 mg/mL酶解产物的羟基自由基清除率和还原力分别为71.86%±0.09%、0.7473±0.0105;分子量分布和氨基酸分析表明,冰岛刺参内脏团抗氧化肽中分子量低于1000 Da的肽占94.26%,富含酸性氨基酸和疏水性氨基酸,具有较高的抗氧化活性和营养价值。该研究为冰岛刺参深加工产业的发展提供了技术参考。     

双酶分步酶解盐津乌骨鸡肉工艺及其氨基酸组成分析

以云南盐津乌骨鸡肉为原料,蛋白水解度为指标,采用响应面分析法优化盐津乌骨鸡肉酶解条件;用氨基酸分析仪及凝胶渗透色谱法检测酶解液的氨基酸组成和多肽分子量分布。结果表明,双酶分步酶解最佳工艺条件为动物蛋白酶酶解时间5 h、酶添加量2.6%、酶解pH值6.5,灭酶后,再加入木瓜蛋白酶酶解3 h、酶添加量2.5%、酶解温度60℃。在该条件下,盐津乌骨鸡肉水解度为(32.62±0.79)%;酶解液中含有17种氨基酸,总游离氨基酸含量可达6.02 mg/mL,且亮氨酸、精氨酸等呈味氨基酸含量较高,其中多肽的相对分子质量主要集中分布在1 kDa以下。该研究结果可为后续盐津乌骨鸡相关新型调味制品的开发提供一定的理论依据。     

鳕鱼骨低苦味多肽酶解制备及其特性研究

本研究以鳕鱼骨为原料,通过控制水解度降低鳕鱼骨酶解液的苦味,并分析了水解物中的多肽与游离氨基酸对苦味的产生机制。结果表明通过木瓜蛋白酶适度水解2 h,鳕鱼骨酶解液水解度达到7.48%,苦味值为5.80,并且多肽主要分布在1500~2000 Da;另外,第一次酶解后将沉淀进行高压蒸煮热处理（121 ℃,30 min）,使鱼骨表面变得松散,再次添加混合酶对沉淀进行酶解,以实现鳕鱼骨的深度水解,水解度达到49.24%,水解物中多肽分子量较小,主要分布在500~1000 Da,苦味值为6.03,游离氨基酸显著高于仅一次水解后的含量。通过控制水解度从而限制了苦味的产生,这种低苦味酶解肽的制备为其在食品中的应用奠定了基础。     

水牛乳酶解液ACE抑制率及其稳定性研究

利用胰蛋白酶和胃蛋白酶模拟胃肠道,在不同pH、不同温度下,测定水牛乳酶解液的ACE抑制率的稳定性影响,并对酶解液中多肽分子量分布以及各种氨基酸成分和含量进行分析。结果表明,水牛乳酶解液具有很好的胃蛋白酶耐受性,在pH 3~8,温度≤60℃范围内制备的酶解液ACE抑制率具有良好的稳定性;水牛乳酶解液冻干粉中多肽含量为38.2%,95%的相对分子质量在2 000 Da以下,其中谷氨酸和亮氨酸的含量比较高。     

红极参肽的酶法制备工艺优化及其抗氧化评价

以红极参（Cucumaria frondosa）为原料,利用复配蛋白酶酶解制备海参肽,并对其进行组成分析和抗氧化活性评价。以水解度为指标,采用单因素实验和响应面试验优化酶解工艺参数,并对制备的红极参肽的组分、氨基酸组成、分子量分布及体外抗氧化活性进行了分析。结果表明:最优工艺条件为料液比1:1.5（w:w）、酶解温度49 ℃、初始pH为7.0、加酶量1052 U/g、酶解时间4.7 h。此条件下,红极参的水解度为30.51%±0.85%。喷干肽粉的分子量和氨基酸分析表明,红极参肽粉平均相对分子质量为403 Da,相对分子质量小于1 kDa的占比达92.81%,因此具有易被吸收的特点;肽粉中总氨基酸含量为80.54%,富含疏水性氨基酸和鲜味氨基酸,占比分别为38.00%和44.10%;抗氧化能力检测显示其羟自由基及超氧阴离子的半清除浓度IC₅₀分别为0.19和0.49 mg/mL,这为红极参的开发利用和精深加工提供了理论依据。     

复合酶深度酶解牡蛎制备呈味基料的研究

以牡蛎为原料,选用胰蛋白酶和风味蛋白酶组成复合酶对其进行深度酶解,以水解度和感官评分为指标,通过单因素试验考察了胰蛋白酶与风味蛋白酶比例、酶添加量、酶解pH、酶解温度和酶解时间对牡蛎深度酶解的影响,对牡蛎深度酶解工艺进行优化,并对最优酶解条件下获得的牡蛎深度酶解产物的肽分子量分布和氨基酸组成进行分析。研究结果表明:牡蛎深度酶解最优工艺条件为胰蛋白酶与风味蛋白酶质量比为21、蛋白酶添加量0.1%([E]/[S])、酶解pH 7.5、酶解温度60℃、酶解时间24h,该条件下得到的牡蛎深度酶解产物中分子量3ku的多肽占83.5%,其中含有33.4%的分子量为1~3ku的多肽和50.1%的分子量1ku的多肽。牡蛎深度酶解产物游离氨基酸中必需氨基酸含量为40.51%,鲜味氨基酸含量为17.50%,甜味氨基酸含量为30.60%。     

珍珠贝肉蛋白酶解过程浑浊形成机理研究

以浑浊度为指标,研究不同酶解时间珍珠贝肉蛋白酶解液浑浊度与粒度分布之间的联系,结果表明,二者呈正相关关系(R2=0.91);而凝胶渗透色谱表明酶解3h大部分蛋白质被降解成小分子肽,粒度分布结果显示酶解体系中粒度从383.9nm快速增加到801.4nm,氨基酸分析结果表明此过程中肽基疏水性氨基酸含量从0h的22.29%上升到3h的28.79%,而表面疏水性从559.69下降至3h的138.96,二硫键数目维持在470μmol/g,这证明了浑浊物是在酶解初期由肽凝集形成的,疏水相互作用在浑浊物形成过程中起重要作用。     

三氯乙酸沉淀罗非鱼肉蛋白酶解液的液相色谱分析

用不同浓度三氯乙酸(TCA)溶液沉淀罗非鱼肉Alcalase2.4L酶解液,采用高效体积排阻色谱法对酶解液及沉淀后所得上清液的分子量分布进行分析,研究TCA对酶解液中蛋白或肽的沉淀效果。结果表明,1、2、5h酶解液的不同分子量肽段在1%、3%、5%、7%、10%TCA中都有沉淀作用,大于9.5ku组分的沉淀百分比在47.86%～59.28%之间,2.5～1.4ku的在38.41%～65.49%之间,1.0ku的在21.32%～78.89%之间。随TCA浓度的增加,沉淀百分比增加或减少。     

pH偏移促进大豆蛋白酶解过程中聚集体解聚的研究

酶法水解大豆蛋白可以生产多种生物活性肽,但在酶解过程中肽段的二次聚集会产生不溶沉淀,降低蛋白质利用率。研究了pH偏移对大豆蛋白酶解聚集体解聚的影响。结果表明：Alcalase碱性蛋白酶酶解大豆蛋白获得的不溶沉淀,是以疏水相互作用为主要分子间作用力的大豆肽聚集体;pH偏移赋予的静电斥力能促使大豆肽聚集体解聚和重排,大豆肽蛋白质利用率从74%（pH 7）增加到85%（pH 12）,并将大豆肽的平均粒径由243 nm减小至103 nm;同时,pH偏移使疏水性氨基酸在不溶肽聚集体中积累,增加二级结构中的无规则卷曲含量,但不影响不溶肽聚集体的相对分子质量分布。因此,pH偏移技术可安全有效地促使大豆肽不溶聚集体解聚。     

美拉德反应对南极磷虾酶解液中非挥发性物质的影响

以南极磷虾酶解液和木糖进行美拉德反应,研究美拉德反应后,酶解液和美拉德产物中游离氨基酸、肽分子量分布、无机离子含量等非挥发性物质的变化规律。结果表明,美拉德反应后,酶解液中多数游离氨基酸含量显著降低,其中亮氨酸、精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸损失率分别为34.18%、16.75%、16.67%、16.10%、12.37%;酶解液肽段中451 Da～1 450 Da组分具有较高的美拉德反应活性;无机离子含量以Na+含量最高;脂肪酸组成呈现减少趋势,减少组分以多不饱和脂肪酸为主。     

胰酶提升小麦蛋白酶解产物乳化活性工艺及其功能特性研究

以乳化活力为指标,系统地研究了胰酶水解小麦蛋白的工艺条件,酶解产物的抗氧化活性、分子量分布、氨基酸组成等功能特性。结果表明,最佳酶解条件为:酶浓度E/S为1%、温度45℃、pH7.5,乳化活力指数达到35.38m2/g,此时水解度为4.73%,显著提升了小麦蛋白的乳化活性。最佳工艺条件下的小麦蛋白酶解液具有一定的DPPH自由基清除能力,但显著低于VC;首次发现了酶解液具有较强的金属螯合能力。酶解小麦蛋白产物中多肽分子量主要分布在200~1000u,占65.99%;酶解产物中共检测出了15种氨基酸,谷氨酸含量最高,达30.48%;肽类可能是酶解产物具备化活性、抗氧化活性等功能特性的重要贡献者。     

鸡骨架和鸡胸肉复合底物酶解工艺优化及产物呈味特性研究

为了提升鸡骨架和鸡胸肉复合底物酶解产物的风味,利用生物酶解技术对鸡骨架和鸡胸肉复合底物进行酶解,通过单因素实验与正交试验优化了酶解工艺,并分析了酶解物中的游离氨基酸含量及肽分子量分布情况。结果表明：复合蛋白酶与风味蛋白酶以3:1复配比同步酶解时风味最佳,最佳酶解条件是：鸡骨架与鸡胸肉比例9:1,料液比1:2 g/mL,温度50℃,pH7.5,酶添加量0.6%,酶解时间3 h。该条件下水解度达13.60%,感官评分4.7,制得的酶解物具有突出的鲜味和肉香味,呈味效果良好。随着酶解时间的延长,产物中游离氨基酸总量和小分子肽含量不断增加。最优工艺条件下,酶解产物中苦味氨基酸含量为2.74 mg/mL,占总游离氨基酸的71.73%,是主要的氨基酸;相对分子质量小于3 kDa的肽含量为93.26%。该研究结果为低值鸡骨架的综合开发和应用提供了参考。     

草鱼边角料蛋白质水解工艺

以胰蛋白酶和风味蛋白酶进行复配并深度酶解草鱼边角料,采用酶解温度、pH、液料比、酶添加量为因素,以游离氨基酸总量(Total free amino acids,∑FAA)为响应值,通过响应曲面实验优化草鱼边角料蛋白质水解工艺,以最大程度的提高水解液中的游离氨基酸含量,并分析在水解过程中酶解液中的氨基酸组成。实验结果表明,胰蛋白酶及风味蛋白酶对草鱼边角料有较好的水解作用,且当复合比例为3:1时,草鱼边角料蛋白质水解液中有最大的∑FAA;另外,酶解温度、pH、液料比、酶添加量对草鱼边角料的水解程度均有显著的(p<0.05)影响;优化实验得到,当温度50 ℃、pH为7.3、液料比为4.2:1、酶添加量为2.2%时、酶解时间为6 h时,水解液中有最大的∑FAA为(12.03±0.11) mg/mL,酶解液中共检测出17种游离氨基酸,不同氨基酸的含量随着酶解时间的延长呈明显的增加趋势,在酶解时间超过6 h后,游离氨基酸含量增加趋势明显减缓。因此,该工艺可以用于草鱼边角料蛋白质水解液的制备。     

β-葡聚糖提取过程中果胶类物质分解

在碱法提取β-葡聚糖过程中,酒精沉淀β-葡聚糖工艺中有大量果胶一同沉淀下来,降低β-葡聚糖纯度。该实验采用添加果胶酶方法除去果胶,实验以西藏青稞和燕麦为原料,经过碱法粗提β-葡聚糖,然后调节pH,加入果胶酶溶液,在一定温度下反应一段时间,反应液浓缩后经酒精沉淀,沉淀物即为较纯β-葡聚糖。实验中研究不同pH、温度、酶加量及反应时间对酶解β-葡聚糖中果胶影响,确定酶解果胶最佳条件为：pH=3;温度为50℃;酶加量为120 U/g;反应时间为5 h;添加果胶酶使燕麦和青稞中β-葡聚糖提取率分别从0．1%和0．2%提高到1．9%和2．2%;利用粘度法测得青稞中提取β-葡聚糖分子量为1．8×10~4,燕麦中提取β-葡聚糖分子量为2．1×10~4。     

罗非鱼下脚料分离蛋白的制备及其性质研究

采用酸碱法(pH-shifting)提取罗非鱼下脚料蛋白,主要探讨提取的pH对提取蛋白的得率、分离蛋白的基本成分、溶解性、乳化性和分子量分布的影响。结果表明:在料液比1∶9(g/g)、pH 2.0、pH 3.0以及pH 12.0、pH 13.0条件下溶解,pH 5.5条件下沉淀,提取蛋白得率达52%以上。冷冻干燥制备罗非鱼下脚料分离蛋白粉,其蛋白含量高于85%(干基)。功能特性的研究显示,在pH12.0条件下提取的分离蛋白功能特性最好,其溶解度和乳化活性指数分别为60.80%和42.07 m2/g。SDS-PAGE电泳分析显示,不同pH条件下提取的罗非鱼下脚料蛋白的分子量分布差别不大,主要显示分子量为200 ku和44.3 ku的蛋白条带,分别是肌原纤维蛋白组分中的肌球蛋白和肌动蛋白,另有部分蛋白条带在14.30 ku,属于小分子的肌浆蛋白。     

草鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备及分析

草鱼鱼鳞为淡水产品副产物。我们用木瓜蛋白酶水解草鱼鱼鳞并优化酶解条件,运用Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳和凝胶渗透色谱确定所得胶原蛋白肽的分子量,并分析了其中的氨基酸组成。结果表明,最佳酶解条件为:酶解温度60℃、酶添加量8%(质量分数)、酶解时间2 h、pH 5.0、料液比1∶30(g/mL)。所得的胶原蛋白肽分子量小于500 u,其中主要含有甘氨酸、丙氨酸、羟脯氨酸、精氨酸和天冬氨酸。     

琥珀酸脱酰胺对小麦面筋蛋白酶解产物抗氧化性的影响

研究琥珀酸不同脱酰胺程度对小麦面筋蛋白胰酶的酶解产物抗氧化性的影响。在相同水解度下,以DPPH.清除率、.OH清除率、ORAC值为抗氧化指标,结果表明低脱酰胺程度(22.4%)的小麦面筋蛋白酶解产物的抗氧化性有较大幅度的提高,高脱酰胺程度(60.4%)的小麦面筋蛋白酶解产物的抗氧化性降低。水解度15%的酶解产物的肽分子量分布表明,低脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物中分子量小于3000u的肽段增加,高脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物中分子量小于3000u的肽段减少;在相同水解度下的氨基酸分析结果表明,脱酰胺后的小麦面筋蛋白酶解生成的肽的疏水性和抗氧化性的氨基酸含量提高。因此,低脱酰胺的小麦面筋蛋白酶解产物抗氧化性提高的主要原因是产物中含疏水性和抗氧化性氨基酸的小分子肽含量提高。     

米曲霉粗酶和商业蛋白酶对马氏珍珠贝肉酶解特性的比较

以麸皮为原料固体发酵制备种曲,通过磷酸盐缓冲液提取得到粗酶(CP)。采用粗酶、Protamex、Papa-in、PTN6.0S、Flavorzyme以及内源性蛋白酶水解马氏珍珠贝肉蛋白,比较了各种酶的酶解特性、酶解液风味、分子量分布规律及氨基酸组成,并探究了酶解液组成和呈味特征的关联。结果表明:内源性蛋白酶的蛋白质回收率、水解度均最低,麸皮成曲粗酶CP酶解液的蛋白质回收率达68.36%、水解度达64.27%,显著高于其余商业蛋白酶。各酶解液中,CP的酶解液分子质量主要集中在小于3 000 U,其中小于1 000 U的寡肽及游离氨基酸占84.65%,均显著高于其余商业蛋白酶;游离氨基酸释放量和鲜味氨基酸释放率达38.27%,均显著高于其余商业蛋白酶的酶解液。CP酶解液风味最佳,苦味、腥味减弱明显,与内源性蛋白酶酶解液相比,腥味值降为26%,且鲜味值提高至2.75倍。