一株有机溶剂稳定性蛋白酶产生菌的筛选与鉴定

为了筛选分泌有机溶剂稳定性蛋白酶耐有机溶剂极端微生物,利用添加苯10%(V/V)的MLB培养液从油污染水样中分离获得有机溶剂耐受菌株56株。通过产蛋白酶筛选培养基(SMA 培养基)平板初筛和摇瓶发酵复筛从中筛选获得蛋白酶高产菌株DS1。通过形态学、生理生化及16S rDNA序列(genbank EU578329)构建的系统进化树将菌株DS1鉴定为Bacillus aquaemaris。该菌株能耐受多种有机溶剂,并可以分泌有机溶剂稳定性蛋白酶。该蛋白酶在 25%极性常数(logPOW)大于等于1.8的有机溶剂中稳定性好,于30℃、140 r/min,培养14d仍有70%以上的活力。菌株DS1及其所分泌的蛋白酶均能较好的耐受有机溶剂,可以进行有机相催化,具有潜在的工业应用价值。     

耐有机溶剂蛋白酶产生菌MSP05的筛选、鉴定及酶学性质研究

目的:从燕尾港受污染海域筛选耐有机溶剂蛋白酶产生菌,确定该菌的分类地位,并对其所产溶剂稳定性蛋白酶的酶学性质进行研究。方法:通过在培养基中添加20%(V/V)甲苯作为筛选压力,筛选耐有机溶剂极端微生物,通过产蛋白酶筛选培养基筛选产蛋白酶的菌株,并利用摇瓶发酵进行复筛,最后对产酶菌株进行鉴定并对粗酶的性质进行测定。结果:筛选获得耐有机溶剂蛋白酶产生菌MSP05,结合16S rDNA序列分析、形态学观察和生理生化性质将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该酶的最适反应温度和pH分别为50℃和10.0,Cu²⁺、Mn²⁺对酶有激活作用,Mg²⁺、Fe³⁺和Ba²⁺对酶具有抑制作用。在50%乙醇中,25℃、140 r/min振荡72 h后仍能保持50%以上酶活力。结论:分离获得耐有机溶剂蛋白酶产生菌解淀粉芽孢杆菌菌株MSP05,对有机溶剂具有较好的耐受性,具有潜在的工业应用价值。     

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选与育种

以体积分数50%的环己烷等8种有机溶剂为筛选压力,从富油土壤中筛选得到15株产耐有机溶剂脂肪酶产生菌。选择其中酶活最高的菌株ZL8进行紫外诱变,筛选得到产酶能力提高34%的突变株ZL8-26,并对该菌的产酶条件进行优化,酶活达到85U.mL-1,是原始菌株的2.4倍。     

产骨胶原蛋白酶菌的筛选及发酵条件优化的研究

经初筛和复筛从骨骼厂土样中筛选出高产骨胶原蛋白酶的菌种MBL1,针对其产酶的最佳菌龄和发酵条件进行优化研究.结果表明,最佳接种菌的种龄选用培养24h,接种量为5%,起始pH值为7.0,150ml三角瓶最佳装液量20ml,发酵温度32℃.且在优化后的发酵条件下,该菌产酶酶活较优化前酶活提高了35%,达到49.83U/ml.     

枯草芽孢杆菌高产中性蛋白酶发酵条件的优化

通过单因素试验和正交试验对枯草芽孢杆菌10075菌株发酵产中性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化,达到提高菌株中性蛋白酶产量的目的。结果表明,发酵培养基的最佳组分：添加麦芽糖8.0%、蛋白胨4.0%、MgSO4 0.08%;最适发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH 7.0、发酵时间42 h,酶活力由最初的98.36 U/mL 提高到353.45 U/mL。     

蜡样芽孢杆菌高产新型中性蛋白酶发酵条件的优化

目的:优化蜡样芽孢杆菌发酵生产新型中性蛋白酶的培养条件。方法:采用Plackett-Burman试验设计,筛选影响蜡样芽孢杆菌高产新型中性蛋白酶酶活力的关键因子;通过Box-Behnken响应面试验设计获得新型中性蛋白酶发酵的最佳工艺条件。结果:筛选出影响蜡样芽孢杆菌高产新型中性蛋白酶的主要因子为葡萄糖、蛋白胨和pH值。获得的最优化发酵培养基组成和培养条件:葡萄糖35 g/L,蛋白40.38 g/L,氯化钠15 g/L,硫酸镁1.5 g/L,Tween-8010 g/L,装液量50 mL/250 mL,pH 7.15,菌龄12 h,发酵时间36 h。在上述条件下,蜡样芽孢杆菌发酵生产新型中性蛋白酶的酶活力高达696.51 U/mL,是未优化前的1.93倍。结论:研究结果为新型中性蛋白酶的产业化生产和应用提供了良好基础。     

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选及其酶学性质

以体积分数10%的甲苯等有机溶剂为筛选压力,从油污和污水等样品中筛选到一株产耐有机溶剂脂肪酶的有机溶剂耐受茵LX1,经16 S rDNA序列分析,该菌株鉴定为Pseudomonas aeruginosa.研究发现菌株LX1所产脂肪酶最适反应pH和温度分别为7.0和40℃,在较宽的pH范围内(6.5～10.5)具有较高的稳定性;金属离子鏊合剂EDTA和Ba~(2+)、Ca~(2+)对LX1脂肪酶活力均有明显的激活作用,推测该脂肪酶为金属激活酶.LX1脂肪酶在体积分数25%的疏水性和亲水性有机溶剂中均具有较好的耐受性,在十六烷、十四烷、十二烷、正庚醇、正辛醇和正己醇体系中半衰期显著延长到10 d以上,在DMF和DMSO体系中的半袁期为5 d以上,均高于在无溶剂体系中的半衰期.展现了LX1脂肪酶在有机相生物催化中的良好应用前景.     

耐盐脱毛蛋白酶产生菌的研究：Ⅱ耐盐菌产酶条件的研究

通过碳源、氮源实验以及碳氮配比实验研究，得到了耐盐菌适宜的产酶发酵培养基，培养基起始ｐＨ为７．０，接种菌龄１２小时种子液２％为宜。培养温度摄氏３０－３８度，培养时间４８－６０小时。该耐盐菌产酶可稳定在４１００－４４００ｕ／ｍｌ（培养液）。     

土壤中高产蛋白酶菌株的筛选鉴定及发酵条件优化

从海南土壤中筛选得到一株高产蛋白酶的菌株,并对其进行菌种鉴定、产蛋白酶发酵条件优化及蛋白酶分子质量测定。经筛 选,得到一株高产蛋白酶的菌株,编号为CAUH83,蛋白酶活力达到126 U/mL。 通过形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析, 鉴定菌株CAUH83为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）。 通过单因素试验优化,确定该菌株产蛋白酶的最优发酵条件：大豆粉3.0%、 蔗糖3.0%、初始pH 6.0、培养温度30 ℃、培养时间48 h。 在此优化发酵条件下,该菌株产蛋白酶酶活力达到1 932.3 U/mL,较优化前提 高15.3倍。 通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和酶谱分析表明该蛋白酶分子质量约51 kDa。     

耐盐脱毛蛋白酶产生菌的研究

耐盐菌（Ｎｏ．８１３）产生的蛋白酶主要为中性和碱性蛋白酶。酶作用的最适温度为５０℃，最适作用ｐＨ为９．０。在饱和ＮａＣｌ溶液中可保持较高的酶活力，即蛋白酶的ＮａＣｌ耐受能力较强。Ｍｎ＾２＋，Ｃａ对酶的激活作用。其中Ｃａ＾２＋还能使酶的ｐＨ稳定性和热稳定性有一定的提高。表面活性剂和平平加，ＪＦＣ和洗衣粉对酶活力无太大的影响。     

有机溶剂稳定性蛋白酶发酵动力学研究

利用分批发酵研究海洋细菌Bacillus aquaemaris DS1分泌有机溶剂稳定性蛋白酶的代谢特性,结果表明蛋白酶合成和菌体生长呈部分生长关联型。据分批发酵实验结果采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程建立了描述菌株生长、产酶以及底物消耗分批发酵动力学模型。动力学模型计算值与实验值拟合良好,相对误差小于10%。     

产中性蛋白酶菌株发酵条件的研究

本文对一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌的发酵条件进行了研究,考察不同因素条件下对产酶的影响.结果表明:该菌株发酵产酶的最适条件:碳源为2%玉米粉,氮源为1%牛肉膏,添加0.2%NaH2PO4、发酵初始pH＝6、接种量为6%、250ml三角瓶装液量为50ml.     

高去酰胺蛋白酶产生菌的诱变选育及产酶条件优化

以地衣芽孢杆菌2709为出发菌株,采用氮离子注入技术,在最佳注入剂量为1.5×1015ions/cm2的条件下进行诱变处理,筛选得到一株去酰胺度高达48.99%的突变株SDL-9,去酰胺度提高了85.57%,而肽键水解度相对较弱。并对SDL-9的产酶条件进行优化,结果表明：最佳碳源为质量浓度为2.0g/100mL的玉米粉,最佳氮源为质量浓度3.0g/100mL的大豆蛋白,质量浓度为0.04g/100mL Fe3+对产酶具有明显的促进作用,质量浓度为0.9g/100mL谷氨酰胺对产酶有明显的诱导作用,最佳起始pH值为7.0,最佳发酵温度35℃,在此条件下进行发酵产酶,测得去酰胺度为57.1%,肽键水解度为13.2%。     

产碱性蛋白酶的嗜热菌株筛选及发酵条件研究

在河南商丘盐碱地堆肥土壤样中分离到1株产碱性蛋白酶的嗜热菌株SR-15,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。摇瓶发酵研究表明,其适宜培养条件为:玉米粉40g/L,黄豆粉40g/L,MgSO40.5g/L,NaCl10g/L,K2HPO41.0g/L,起始pH10.0,培养温度45℃,摇瓶转速190r/min,250mL三角瓶的装液量100mL,48h后发酵液酶活为1180U/mL。     

铜绿假单胞菌发酵产鼠李糖脂生物表面活性剂的方式及条件研究

该文综述了铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）生成鼠李糖脂的相关发酵技术的研究概况,包括液态发酵、半固态发酵和固态发酵等。重点介绍了影响液态发酵的相关因素,如碳源、氮源、无机盐、温度、pH、消泡方法及分批补料发酵等的研究现状,以期为今后利用铜绿假单胞菌发酵生产鼠李糖脂生物表面活性剂提供研究思路和技术参考。     

浓香型酒醅中一株耐热地衣芽孢杆菌产淀粉酶和蛋白酶培养条件的优化

以浓香型酒醅分离得到的一株地衣芽孢杆菌为试验菌株.以培养温度、培养时间、转速作为主要影响因素,通过单因素试验和正交试验对该菌株产淀粉酶和蛋白酶的条件进行优化,该菌株同时产淀粉酶和蛋白酶的最优条件为:培养温度40℃,培养时间36h,培养转速150r/min,此条件下,蛋白酶活力达到最高的51.84U/mL,淀粉酶活力达到...     

产蛋白酶波茨坦短芽孢杆菌的鉴定及产酶条件优化

该研究旨在提高一株环境分离菌株的产酶效率,为后续菌株及其蛋白酶的应用提供前期实验基础。通过水解圈法初步检测菌株S8的产蛋白酶能力,并通过16S rRNA序列比对确认其为波茨坦短芽孢杆菌。通过单因素试验确定了最佳培养条件和培养基添加成分。并采用Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验对培养条件和培养基进行响应面优化。优化结果显示,在发酵时间为38.70 h、菌液接种量为1.84%（V/V）、发酵温度为35 ℃、酵母粉添加量为23.70 g/L、胰蛋白胨添加量为11.70 g/L、MgSO4添加量为20.20 g/L的条件下,菌株的产酶活力可达到114.79 U/mL,相比优化前提升了209.70%。研究结果为该菌株的后续发酵应用提供了科学数据。     

菌株SFZ-37产鼠李糖脂分批式发酵动力学的初步研究

在5 L磁力搅拌发酵罐上,对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)菌株SFZ-37生产鼠李糖脂进行分批发酵,并对发酵过程进行监测,pH值在发酵过程中基本维持稳定,发酵结束时,菌体生物量可达4.41 g/L,鼠李糖脂产量达到11.61 g/L,底物甘油残量达到11.69 g/L。根据实验数据构建了菌体生长、产物生成及底物消耗的动力学模型,并采用OriginPro 8.0软件对其进行了非线性拟合。结果表明,建立的动力学模型可以较好的反映菌株分批发酵过程中菌体生长、产物生成和底物消耗三者之间的关系。     

响应面法优化铜绿假单胞菌产鼠李糖脂发酵培养基的研究

该研究对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）SKY01产鼠李糖脂的发酵培养基组分进行了优化。采用单因素试验确定豆油、硝酸钠及微量元素的添加量。在单因素试验的基础上,采用响应面试验设计进行培养基组分优化。结果表明,最佳发酵培养基配方为豆油80 g/L、硝酸钠4 g/L、微量元素8.5‰。在此最佳培养基组分条件下,鼠李糖脂的产量达到45.34 g/L,比优化前的产量39.62 g/L提高了14.43%。     

碱性脱毛蛋白酶产生菌的选育

从富含蛋白质的土壤中筛选出的碱性蛋白酶产生菌，命名为Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．８（简称为Ｎｏ．８）。Ｎｏ．８菌能在ｐＨ６￣１２且含有较高浓度钙离子条件下生长并产酶，与目前的碱性蛋白酶生产菌如地衣芽孢杆菌２７０９相比，它具有较强的耐碱性和耐钙离子性。培养基起始ｐＨ值为７．５，接种菌龄为１８ｈ种子液２％，在３５￣３７℃，培养４８￣６０ｈ的条件下，Ｎｏ菌产生的蛋白酶活力可稳定在１７００￣１８００ｕ／ｍｌ，