人促红细胞生成素检测方法研究进展

人促红细胞生成素具有重要的临床价值,同时还被认为是最具"欺骗性"的兴奋剂之一.本文在对人促红细胞生成素的结构、生理功能以及类型进行介绍的基础上,总结了人促红细胞生成素的血液学参数间接检测法,同时对等电聚焦、毛细管电泳、免疫等直接检测方法进行了阐述.     

基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱法测定rhEPO唾液酸含量及鉴定糖基化位点

促红细胞生成素(EPO)是一种糖蛋白,绝大部分由肾脏产生,少量来自肝脏(胎儿及新生儿则主要由肝脏产生)[1].其最主要的功能是促进红细胞的生成,提高机体血红蛋白的浓度,改善机体的携氧能力,从而增强人体的耐力.EPO的肽链由165个氨基酸构成,分子量约为30～39 kDa,具有3个N-连接糖基化位点(Asn24、38、83)和1个O-连接糖基化位点(Ser126),平均含糖量约为40%[2].研究表明,重组EPO(rhEPO)糖基化程度对EPO的体内活性有相当大的影响,rhEPO比内源性EPO含有更多的三天线及四天线低聚糖,并且二者在唾液酸含量上有明显的差别[3,4].本工作采用基质辅助激光解吸-飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS)测定重组EPO唾液酸含量,鉴定了三个N-连接糖基化位点,拟为重组EPO产品的质量控制以及与内源性EPO的区分提供新的思路及手段.     

关于发展生化分析测试仪器的若干意见

1．生物高技术的前景以基因工程，细胞工程，发酵工程和酶工程为主体的生物高技术是当前最活跃的研究领域之一。生物高技术的应用已扩展到医药学，农业，环境，化工，能源，纺织，造纸等许多部门，其中以基因工程生产的药物占生物高技术产品的首位。权威人士预测，到2000年生物高技术产品的市场规模可能超过500亿美元。在经济利益推动下，国内外科研和生产单位纷纷投资建设符合GMP要求的实验室和生产车间，研制和生产促红细胞生成素（EPO），集落刺激因子（CSF），100多种单克隆抗体，各种细胞因子（如干扰素，白介素，肿瘤坏死因子）以…     

EPO对缺血性卒中脑损伤的保护作用及机制研究进展

缺血性脑卒中引起的脑损伤是导致死亡和残疾的主要原因之一。由于大脑对血液供应中断非常敏感,在严重缺血10-15分钟后会遭受不可逆转的损伤。虽然重组组织纤溶酶原激活剂(recombinant tissue-type plasminogen activator,r-tPA)被证明对缺血性脑卒中的治疗有效,但其治疗时间窗较短,对于许多发病时间超过治疗时间窗的患者来说,目前尚无被证实有效的药物。越来越多的证据表明,促红细胞生成素(EPO)是一种强大的神经保护剂,可以在缺血性卒中的临床治疗中作为辅助治疗方法。EPO可以通过多种途径增强大脑对缺血再灌注损伤的抵抗能力,改善了脑缺血后的神经功能,促进神经功能的恢复。本文综述了EPO对于缺血性脑卒中的神经保护机制,探讨了EPO作为神经保护药物的临床应用前景。     

促红细胞生成素对中年小鼠脑缺血后神经新生的影响

目的探究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对中年小鼠脑缺血后神经新生的影响;方法将24只健康8月龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为假手术(Sham)组、大脑中动脉闭塞缺血模型组(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)和模型后EPO处理组,每组7只。制作小鼠大脑中动脉闭塞缺血(MCAO)模型,EPO组小鼠在再灌注即刻腹腔注入EPO(5000IU/kg),以后隔日注射1次。脑缺血后第2天开始每天以50mg/kg的剂量腹腔注射Brdu,1次/d,持续1周。第1、3、5、7天采用转棒试验(Rota-rod test)对小鼠神经功能进行评估。在脑缺血后第7天,提取脑组织蛋白、制作冰冻切片,进行western blot检测及免疫荧光染色。结果 EPO组小鼠生存率较MCAO组相比显著提高;EPO组小鼠脑缺血后第5天及第7天神经功能较MCAO组有明显改善,差异有统计学意义(P0.05);EPO组小鼠脑缺血后第7天BrdU+/DCX+双阳性细胞及BrdU+/NeuN+双阳性细胞数量均显著高于Sham组小鼠和MCAO组小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。EPO组小鼠脑缺血后第7天脑组织中酪氨酸蛋白激酶受体B4(Eph B4)的蛋白水平较MCAO组显著升高(P0.05)。结论 EPO可促进中年小鼠脑缺血再灌注后神经新生,从而改善神经功能,提高生存率。神经保护药向临床转化时应该考虑到年龄因素的影响。     

生物质谱在蛋白质药物分析研究中的应用

生物制品药物已经成为近年来快速发展的一类新兴药物领域,包括人用预防药物和治疗药物。蛋白质和多肽是生物制品药物的重要活性物质之一。与化学药物不同,蛋白质药物具有分子量大、结构复杂多变的特殊性,因此其理化性质更加多样,杂质成份不确定性高,发生免疫反应的可能性大。为确保药物的安全性和有效性,针对蛋白质药物自身的特点,依据国内外相关标准,建立一系列配套齐全的蛋白质药物分析方法和质量控制技术具有非常重要的意义。本文对生物质谱技术（Bio-MS）在蛋白质药物结构鉴定和翻译后修饰分析中的应用进行了系统介绍,力图通过重组尿激酶原（rhProUK）、重组人促红细胞生成素（rhEPO）和凝血因子X激活剂（RVV-X）等药物分析实例,提供一些可以借鉴的蛋白质药物分析的生物质谱技术方法。     

DNA分析仪的研制及性能考查

自行研制DNA分析仪,采用毛细管电泳分离DNA片段,激光诱导荧光技术进行检测。检测部分设计为共焦光路,488 nm的Ar＋激光器激发DNA片段上标记的荧光染料,发射的荧光信号由光电倍增管收集检测,激发光路和收集光路可三维调节。优化毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置的设计和分析参数,实现了高分辨率、高灵敏度的DNA样品分析。实验结果表明,对于分析标准DNA样品pGEM-3Zf（＋）/HaeⅢMarkers和pBR322 DNA/HaeⅢMarker,标记的2种荧光染料分别为Thiazole Orange（TO）和SYBR GreenⅠ,本分析仪均获得了高信噪比的毛细管电泳图谱,较好地实现了单碱基分辨,检测灵敏度为2.4×10^-11mol/L。     

在线基体消除-毛细管离子色谱测定有机溶剂中的痕量阴离子

建立了在线基体消除-毛细管离子色谱测定有机溶剂中痕量阴离子的方法。有机溶剂样品经过阴离子浓缩柱（MAC200整体柱）,痕量目标阴离子被浓缩的同时,有机溶剂不被保留而去除,接着目标离子转入毛细管离子色谱系统进行分析。六种阴离子（氟离子、氯离子、亚硝酸根、硝酸根、硫酸根和磷酸根）在1-100μg/L线性范围内,相关系数（r2）为0.9991～0.9999,考察的阴离子检出限（以S/N=3计）为2.2-34.8ng/L。用于实际样品检测,取得了很好的效果。     

CH-1型恒电位仪的研制与应用

介绍了一种在电化学、电分析测试中检测微电流的恒电位仪（可检测 １ｐＡ电流）。对仪器的工作原理、结构、电路组成及其特点作了描述。采用两电极或三电极工作体系,通过毛细管电泳一电化学法和色谱－电化学法分别检测了糖类化合物和铁氰化钾。     

胶束毛细管电泳-二极管阵列快速分离和检测5种“瘦肉精”类药物

建立了胶束毛细管电泳分离结合二极管阵列（DAD ）检测“瘦肉精”的方法。以10 mmol/L 硼酸盐（Na2B4O7-NaOH）（pH10.5）为背景电解质,同时加入10 mmol/L表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）组成电泳运行缓冲液,分离和定量检测沙丁胺醇（Salbutamol ,SAL）、特步他林（Terbutaline ,TER）、西马特罗（Cimaterol ,CIM ）、莱克多巴胺（Ractopamine ,RAC）和克伦特罗（Clenbuterol ,CLB）5种“瘦肉精”类药物（β-兴奋剂）。考察了运行缓冲液的浓度和pH值、表面活性剂浓度、分离电压和毛细管柱温度等因素对分离和检测的影响并进行了优化。在最佳条件下,5种药物在14 min内可实现良好的基线分离,检测限（S/N＞3）均低于0.2μg/mL。以尿液样品为例进行了生物样品的初步检测,其回收率均高于97％,方法快速、简便、可靠。     

基于液芯波导激光诱导荧光检测器的缝管自动进样毛细管电泳仪的研制及其在DNA分析中的应用

介绍一种自行研制的毛细管电泳仪。以半导体激光器作为激发光源,使用液芯波导石英毛细管同时作为电泳分离通道和荧光检测光路,结合基于取样探针、缺口型样品圆盘两者的缝管自动进样系统,以激光诱导荧光的检测方式实现对两种常用DNA分子标记物（DNA Marker）快速、低耗、准确的有效检测。该仪器具有结构简单、体积小、操作方便等特点。     

Minireview: Recent advances in the determination of flavonoids by capillary electrophoresis

Flavonoids are compounds which provide many pharmacological activities. In this paper, the literature with regard to the determination of flavonoids using capillary electrophoresis (CE) during 2008–2017 has been reviewed. The aim of the review is to overview the modes and specific determination conditions of CE for flavonoids. The advantages and disadvantages of CE in the determination of flavonoids are analyzed. The applications of the modes of CE for determination of flavonoids are introduced. Capillary zone electrophoresis, micelle electrokinetic capillary chromatography, microemulsion electrokinetic chromatography, and capillary electrochromatography are considered. Specific determination conditions including the pH, buffer, additive, capillary, voltage, temperature, injection, analysis time, detection, and online concentration methods are summarized. Flavonoids were generally separated in alkaline conditions at pH 8–10 in borate buffer. The advantages of CE are the short analysis time and low solvent consumption compared with the most popular high-performance liquid chromatography protocols. CE can be combined with a variety of detectors including ultraviolet spectrophotometry, mass spectrometry, chemiluminescence, electrochemical, potential gradient, dual opposite carbon fiber microdisk electrodes, and laser-induced fluorescence. In CE, short-light path length results in relative low sensitivity when combined with the most widely used ultraviolet spectrophotometry detector. The combination with more sensitive detectors and online concentration methods such as gradient elution, large volume sample stacking, sweeping, and electrokinetic supercharging alleviates this problem and improves the sensitivity. Capillary electrophoresis is an efficient, green, and valuable tool for the determination of flavonoids.     

Recent trends of capillary electrophoresis‐mass spectrometry in proteomics research

Progress in proteomics research has led to a demand for powerful analytical tools with high separation efficiency and sensitivity for confident identification and quantification of proteins, posttranslational modifications, and protein complexes expressed in cells and tissues. This demand has significantly increased interest in capillary electrophoresis‐mass spectrometry (CE‐MS) in the past few years. This review provides highlights of recent advances in CE‐MS for proteomics research, including a short introduction to top‐down mass spectrometry and native mass spectrometry (native MS), as well as a detailed overview of CE methods. Both the potential and limitations of these methods for the analysis of proteins and peptides in synthetic and biological samples and the challenges of CE methods are discussed, along with perspectives about the future direction of CE‐MS. @ 2019 Wiley Periodicals, Inc. Mass Spec Rev 00:1–16, 2019.     

蛋白质／多肽的毛细管电泳-激光诱导荧光检测分析方法发展

毛细管电泳（CE）与激光诱导荧光检测器（LIF）联用为蛋白质／多肽类样品提供了一种快速、灵敏的分析方法。选择并开发合适的荧光衍生化试剂,建立并优化相应的衍生、分离过程,使用并发展高性能、低成本的激光诱导荧光检测器件是实现高效分离、高灵敏度检测的有效途径。本文将各荧光衍生化试剂以激发光源归类,在探讨常用荧光衍生化试剂特性的基础上,对近几年蛋白质／多肽类样品的毛细管电泳-激光诱导荧光分析方法发展加以系统综述。     

机箱线缆信号完整性和电磁辐射的全波仿真

对一个电源变换器的机箱、插座以及内部线缆进行了三维精确建模,采用三维全波电磁场软件对整个机箱和线缆的信号完整性（SI）、传导发射（CE）和辐射发射（RE）进行了全面的时域和频域仿真分析,给出了干扰噪声电平和三维电磁干扰（EMI）强度,并比对GJBl51A给出EMC预估结论。简要介绍了仿真原理和理论基础,包括传输线模型、传输线矩阵（TLM）算法和精简模型原理等,文中所采取的线缆行为级（CE）和电磁辐射（RE）两步仿真的思路,是一种通用的方法,可以有效地应用于各种机箱机柜线缆线束的电磁兼容仿真预估中。     

毛细管柱上检测的紫外光吸收理论模型研究

本文建立了毛细管柱上检测的紫外光吸收理论模型,对毛细管柱上检测的紫外光透过率进行了数值计算,讨论了高效毛细管电泳检测系统的理论与设计参数的关系。     

Glycomic analysis by capillary electrophoresis-mass spectrometry

The occurrence of multiple glycosylation sites on a protein, together with the number of glycan structures which could potentially be associated with each site (microheterogeneity) often leads to a large number of structural combinations. These structural variations increase with the molecular size of a protein, thus contributing to the complexity of glycosylation patterns. Resolving such fine structural differences has been instrumentally difficult. The degree of glycoprotein microheterogeneity has been analytically challenging in the identification of unique glycan structures that can be crucial to a distinct biological function. Despite the wealth of information provided by the most powerful mass spectrometric (MS) and tandem MS techniques, they are not able to readily identify isomeric structures. Although various separation methods provide alternatives for the analysis of glycan pools containing isomeric structures, capillary electrophoresis (CE) is often the method of choice for resolving closely related glycan structures because of its unmatched separation efficiency. It is thus natural to consider combining CE with the MS-based technologies. This review describes the utility of different CE approaches in the structural characterization of glycoproteins, and discusses the feasibility of their interface to mass spectrometry.     

液相色谱-串联质谱法测定饲料和土壤中三聚氰胺及其类似物

采用高效液相色谱 电喷雾串联质谱（LC-ESI-MS-MS）在多反应监测（MRM）模式下,建立饲料和土壤中三聚氰胺及其类似物（三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺）的快速确认检测方法。试样中的三聚氰胺及其类似物经甲酸-乙腈溶液提取,氮气吹干,用定容液溶解后,进行液相色谱 串联质谱测定,采用色谱保留时间和质谱碎片离子丰度比定性,以¹⁵N₃-三聚氰胺、¹³C₃-三聚氰酸作为内标进行定量。采用正离子扫描和负离子扫描的方式进行仪器方法学研究,确定丰度比最高的两对离子作为监测离子,进行MRM模式定性定量分析。该方法的检出限（LOD）为0.25~0.50 mg/kg;在5.0~500.0 μg/L的线性范围内,相关系数r均大于0.999。在0.5~2.0 mg/kg的添加水平上,三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸二酰胺的回收率为61.4%~115%,相对标准偏差不大于12.6%。     

CE-ADRC异步电机直接转矩控制系统研究

由于传统PID控制器存在着参数整定复杂的缺陷,应用在直接转矩控制(DTC)的调速系统中时,调速的范围和精确度都受到很大限制。该文研究了一种新的异步电机直接转矩调速系统,即在自抗扰控制器(ADRC)中运用交叉熵算法(CE)对速度参数进行优化。仿真实验表明:基于CE-ADRC异步电机直接转矩控制系统,在调速范围和精度方面比经典PID控制器更具优越性。     

茶叶中多种农药残留测定方法研究

采用气相色谱-串联质谱法同时测定了茶叶中多种农药残留。样品加水后用乙腈提取,采用GCB/PSA固相萃取柱净化,淋出液浓缩至近干后用正己烷-丙酮（9：1,V/V）溶液定容,气相色谱-串联质谱测定。结果表明目标农药添加于样品中质量浓度在0.050～0.500mg/kg（r〉0.9700）范围内与峰面积呈线性关系,检出限（3S/N）位在0.1～37.5ng/g之间。加入0.100和0.400mg/kg两个浓度水平的农药标准溶液,目标农药的回收率在66.5%～114.7%之间,相对标准偏差（n=5）均小于20%。