大肠癌细胞辐射敏感相关蛋白的初步筛选

人大肠癌细胞LOVO和SW480细胞具有不同的辐射敏感性。用直线加速器分别予以0、2、4、6GyX射线照射，然后运用SELDI-TOF蛋白质芯片技术测定照射后24h细胞的蛋白质谱，分析两株细胞间在不同照射剂量后的蛋白质表达情况，通过Swiss-Prot数据库搜索初步筛选出可能与大肠癌细胞辐射敏感性相关的几种蛋白：GADD45B、Thioredoxin、Metallothionein1(MT1)。结果表明：大肠癌辐射敏感性的预测能够从蛋白质水平来体现，而SELDI-TOF蛋白质芯片技术可从蛋白质水平预测人大肠癌细胞辐射敏感性，为临床大肠癌患者的个体化放疗提供选择依据。     

用荧光原位杂交技术观察60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的剂量效应关系

研究不同剂量60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的观察值和预期值间的关系及其易位的类型和易位在细胞中的分布,为用易位率进行早先照射和慢性小剂量长期照射进行回顾性剂量估算提供必要的理论依据.用4号和7号全染色体探针,采用荧光原位杂交技术和连续Giemsa染色法分析不同剂量点60Coo射线离体照射诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变.对比观察发生于4号和7号染色体的畸变数和根据其物理相对长度计算的预期值,发现4号和7号染色体的畸变观察值和预期值非常吻合;除0.25Gy剂量点易位在细胞中的分布不符合泊松分布,为过离散分布外,其余各剂量点易位在细胞中的分布服从或接近泊松分布; 各剂量点观察到的易位中,经52h培养后,不完全易位较完全易位为多. 其中,又以荧光部分不带着丝粒的易位(T(Ab))占多数. 4号和7号的畸变观察值和预期值非常吻合,说明它们发生畸变的频率与其物理长度或DNA含量成正比.     

用荧光原位杂交技术观察^60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的

研究不同剂量＾６０Ｃｏγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的观察值和预期值间的关系及其易位的类型和易位在细胞中的分布，为用易位率进行早先照射和慢性小剂量长期照射进行回顾性剂量估算提供必要的理论依据。用４号和７号全染色体探针，采用荧光原位杂交技术和连接ＨＧｉｅｍｓａ染色法分析不同剂量点＾６０Ｃｏγ射线离体照射诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变。对比观察发生于４号和７号染色体的畸变数和根据其物理相对长度计算的预期值，发现４号和７号染色体的畸变观察值和预期值非常吻合；除０．２５Ｇｙ剂量点易位在细胞中的分布不符合泊松分布，为过离散分布外，其余各剂量点易位在细胞中的分布服从或接近泊松分布；各剂量点观察到的易位中，经５２ｈ培养后，不完全易位较完全易位为多。其中，又以荧光部分不带着丝粒的易位（Ｔ（Ａｂ））占多数。４号和７号的畸     

荧光原位杂交检测早先受照者的染色体畸变

应用２号染色体特异性探针进行荧光原位杂交,研究＾６０Ｃｏγ射线照射诱发人外周血淋巴细胞浸色体的易位畸变,结果表明,离体照射诱发的畸变率与剂量呈现良好的相关,＾６０Ｃｏ辐射事故受照者在照后第６,７年的易位畸变率保持相对稳定,约占照后立即检测双＋环畸变率的４０％～５０％,并且易位畸变率与最初照射剂量相关良好。     

荧光原位杂交技术在剂量重建中的应用

采用不同剂量60Coγ射线照射两名正常人外周血淋巴细胞后,应用荧光原位杂交（FISH）技术检测染色体易位率,并拟合出剂量效应关系曲线为：Y=0.01316＋0.07569D＋0.01583D2。通过盲法对实验结果验证,验证结果表明拟合的曲线可用于剂量重建。FISH技术用来检测染色体稳定性畸变,既快速又准确,适合于染色体易位的检测,有望成为剂量重建的理想技术方法。     

大肠癌细胞辐射敏感相关基因的筛选

应用基因芯片技术初步筛选人大肠癌细胞辐射敏感相关基因.培养2种不同辐射敏感性的人大肠癌细胞LOVO和SW480,收集细胞至少达到107数量级,提取细胞总RNA,采用人全基因组表达谱芯片获得该两株细胞的基因表达谱,分析比较两者之间基因表达的差异.1、LOVO细胞组检出基因16882个,SW480细胞组检出基因17114个.2、在2倍以上差异表达基因中筛选出上调基因908个,下调基因1312个.上调基因中包括Fas基因、NFkB基因等,下调基因中包括Caspas6基因、RAD21基因等,已有研究证明与辐射敏感相关.3、LOVO细胞中高表达的基因主要有CEACAM5、THBS1、SERPINE2、ARL7、HPGD,提示与辐射敏感相关;SW480细胞中高表达的基因主要有SCD、NQ01、LYZ、KRT20、ATP1B1,提示与辐射抵抗有关.1、大肠癌辐射敏感性的预测可以从基因水平来体现.2、表达谱基因芯片技术能快速、灵敏地预测大肠癌辐射敏感性,筛选大肠癌辐射敏感性相关基因.     

FISH方法在辐射事故评介中的应用

为研究辐射远后危害效应,探讨荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)方法用于剂量重建的可行性。同时,用FISH、常规染色体畸变、G显带、细胞松弛素B(Cytochalasm B,CB)微核和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因位点突变分析方法对3名事故受照射者(F、S、Y)进行了照射后7年半的生物学终点检测,并对宫内受照射者S的生长发育指标进行了测量。FISH方法检测易位的结果显示,在观察足够数量细胞时用易位率估算的生物剂量与照射后模拟的物理剂量非常吻合,证明该方法可用于剂量回顾和剂量重建。从FISH、常规染色体畸变及G显带分析结果发现,受照射7年半后受检者体内仍有明显的染色体畸变,且与受照射剂量呈现良好的剂量依赖性。实验结果还表明,宫内受照射者S出生后的生长发育状况基本正常。     

结直肠癌细胞辐射敏感性的定量比较蛋白组学研究

为筛选结直肠癌细胞辐射敏感相关的蛋白质,用于结直肠癌放疗的个体化选择,采用荧光差异显微凝胶电泳(DIGE)技术分离并筛选Cy3、Cy5及Cy2荧光素标记的不同辐射敏感性的结直肠癌细胞系SW480和LOVO的移植瘤组织的差异表达蛋白质,结果共筛选出35个差异表达蛋白点,其中,在SW480组肿瘤组织中表达上调的蛋白点有17个,在LOVO组肿瘤组织中表达上调的蛋白点有18个。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行鉴定并分析,成功鉴定蛋白质点27个,LOVO组肿瘤组织表达上调蛋白17个,SW480组肿瘤组织表达上调蛋白15个。这些差异表达蛋白质有可能在结直肠癌辐射敏感性的预测中作为特异性的标记物,在结直肠癌患者的放疗选择中发挥重要作用,为结直肠癌患者的治疗选择提供技术参考。     

ICRU 94号报告急性照射后个体剂量的初始阶段评估方法北大核心CSCD

国际辐射单位与测量委员会(ICRU)94号报告描述了用于急性辐射照射后个体剂量评估的方法。主要方法包括生物剂量测定和物理剂量学技术,而其他补充方法是生物测量技术、中子活化和辐射场映射方法。生物剂量测定方法包括染色体测定、细胞分裂阻断微核测定、荧光原位杂交易位分析、染色体缩合和γ-H2AX测定技术。新兴技术包括基于RNA表达、基于蛋白质和基于代谢组学的检测。     

ICRU 94号报告急性照射后个体剂量的初始阶段评估方法

国际辐射单位与测量委员会(ICRU)94号报告描述了用于急性辐射照射后个体剂量评估的方法。主要方法包括生物剂量测定和物理剂量学技术,而其他补充方法是生物测量技术、中子活化和辐射场映射方法。生物剂量测定方法包括染色体测定、细胞分裂阻断微核测定、荧光原位杂交易位分析、染色体缩合和γ-H2AX测定技术。新兴技术包括基于RNA表达、基于蛋白质和基于代谢组学的检测。     

Evaluation of radiosensitivity of human tumor cells after irradiation of γ-rays based on G2-chromosome aberrations

The aim of the present investigation is to determine initial G2-chromosome aberrations and to validate whether the G2-chromosome aberrations can predict the cellular clonogenic survival in human tumor cell lines. Cell lines of human ovary carcinoma cells (HO8910) and human hepatoma cells (HepG2) were irradiated with a range of doses and assessed both for initial G2-chromosome aberrations and for cell survival after γ-irradiation. The initial G2-chromosome aberrations were measured by counting the number of G2-chromatid breaks after irradiation, detected by the premature chromosome condensation technique, and the G2-assay method. Cell survival was documented by a colony formation assay. A linear-quadratic survival curve was observed in both cell lines. The dose-response results show that the numbers of G2-chromatid breaks increase with the increase in dose in the two cell lines. At higher doses (higher than 4 Gy) of irradiation, the number of G2-chromatid breaks for the G2-assay method cannot be determined because too few cells reach mitosis, and hence their detection is difficult. A good correlation is found between the clonogenic survival and the radiation-induced initial G2-chromatid breaks per cell (r=0.9616). The present results suggest that the premature chromosome condensation technique may be useful for determining chromatid breaks in G2 cells, and the number of initial G2-chromatid breaks holds promise for predicting the radiosensitivity of tumor cells.     

Evaluation of radiosensitivity of human tumor cells after irradiation of γ-rays based on G2-chromosome aberrations

1 Introduction It is well established that the radiosensitivity is dependent on cell-cycle progression, and among stages of interphase, G2 phase is the most radiosensitive fol- lowed by G1 phase, and S phase, which is the least ra- diosensitive, whereas G0 phase is radioresistant under conditions of oxygen deprivation and sufficient repair time [1-3]. Previous studies have concluded that the G2 phase is a very important stage. Some researchers have studied the chromosome aberrations in G2 ph…     

电离辐射对肿瘤细胞端粒酶抑制作用的研究

运用多聚酶链扩增反应（ＰＣＲ）及端粒重复扩增方法（ＴＲＡＰ）法检测肿瘤细胞Ｈｅｌａ、Ａ４３１和ＫＢ在电离辐射后ｈＥＳＴ２功能区片段表达和端粒酶活性的变化。结果表明：肿瘤细胞ｈＥＳＴ２功能区片段表达和端粒酶活性呈剂量依赖下降；ｈＥＳＴ２功能区片段的ＰＣＲ法测定结果与ＴＲＡＰ法相符合；提示电离辐射对端粒酶活性的抑制是肿瘤放射治疗的重要机制之一。端粒酶活性检则可能成为评估电郭辐射对杀伤作用的新指标。     

青蒿琥酯对人宫颈癌细胞放射增敏作用的影响研究

本工作主要涉及青蒿琥酯对体外培养人宫颈癌HeLa、Siha细胞株的放射增敏作用.实验选择人宫颈癌细胞HeLa、Siha作为实验细胞.利用四氮唑盐比色试验(MTT)确定细胞辐射损伤实验最佳药物浓度;常规染色体畸变法、胞质分裂阻滞微核法(CB法)分别研究青蒿琥酯对辐射诱发人宫颈癌细胞染色体畸变、微核的影响.确定了青蒿琥酯的...     

γ射线诱导人肿瘤细胞B7.1分子表达的研究

为研究电离辐射与人肿瘤细胞B7．1分子表达之间的关系，探讨肿瘤细胞在照射后免疫原性增强的机理。采用间接免疫荧光－流式细胞仪测定技术，用30、40、50、60Gyγ射线照射5种肿瘤细胞和一种非肿瘤细胞后，观察不同培养时间（24、48、72、96h）内这些细胞B7．1分子的表达水平。用^3H－TdR释放试验测定肿瘤细胞和淋巴细胞共反应后细胞毒活性。结果表明，未经熙射的肿瘤细胞不表达B7．1分子。经40Gy照射后，SMMC－7721肝癌细胞、PC－12嗜铬神经瘤细胞、A－549肺癌细胞表达B7．1共刺激分子，与对照组相比有非常显著性差异，但SHG胶质瘤 细胞和HOS骨肉瘤细胞经60Gy照射后仍未B7．1分子的表达。淋马细胞与表达B7．1分子的肿瘤细胞共反应后细毒胞活性明显高于未照射组（p＜0．01）。实验提示，γ射线能诱导人肿瘤细胞表达B7．1分子，增强肿瘤细胞的免疫原性。     

125I籽源持续低剂量率照射诱导人肺癌细胞的旁效应

观察125I籽源持续低剂量率照射诱导人肺癌细胞损伤的旁效应.选择对高剂量率外照射敏感性不同的A549人肺腺癌细胞和NCI-H446人小细胞肺癌细胞,采用125I籽源离体照射细胞模式,将直接受照细胞与未受照细胞共培养24h,应用CB微核法和γH2AX荧光免疫分析法,检测2Gy和4Gy125I籽源持续低剂量率照射诱导人肺癌细胞的微核形成和DNA双链断裂水平.结果表明,125I籽源照射能显著诱导A549和NCI-H446细胞的微核形成率和γH2AX位点形成率增加的旁效应,显示增强对肿瘤细胞的杀伤作用.旁效应强弱与累积照射剂量、肿瘤细胞的辐射敏感性相关:对高剂量率外照射敏感的NCI-H446细胞对低剂量率照射及其旁效应的敏感性高于A549细胞,但与直接辐射效应相比,125I籽源照射诱导A549细胞旁效应高于NCI-H446细胞,这两种细胞的辐射旁效应均随累积照射剂量增加而降低,提示介导旁效应的信号因子水平可能随细胞损伤程度的增加而下降.     

Ku70对辐射诱导的BRCA1表达的影响

为探讨核蛋白Ku70对经γ射线照射后乳腺癌易感基因BRCA1表达的影响,本研究通过靶向升高或降低Ku70,观察了Ku70基因对BRCA1蛋白和mRNA表达水平的影响,以及Ku70对照射后SGC7901、EC109、H460 3种肿瘤细胞BRCA1表达的影响.结果表明:经siKu70处理的3种肿瘤细胞BRCA1的蛋白和m...     

干扰ATM基因表达增强胃癌细胞AGS的放射敏感性

为探讨RNA干扰共济失调毛细血管扩张性突变(Ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因表达后对胃癌细胞AGS放射敏感性的影响,通过构建ATM基因RNA干扰质粒转染AGS细胞,获得干扰效率高的克隆细胞AGS-Ri-ATM,并采用RT-PCR和Western blot分别检测m RNA和蛋白表达水平,平板克隆形成实验观察细胞经放射后对细胞生长的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。检测结果显示其ATM基因表达被干扰下调。经X射线照射至不同吸收剂量,AGS-Ri-ATM平板克隆形成数量/率远低于AGS-Vector的平板克隆形成数量/率,差异显著(p0.05),具有统计学意义。流式细胞术检测显示当吸收剂量为4 Gy时,AGS-Ri-ATM被阻滞在G1期,同时在12 h后出现明显的凋亡想象。结果表明,ATM基因被干扰后可以诱导细胞周期的阻滞,以及凋亡的增加而增强AGS细胞的放射敏感性。