β-伴大豆球蛋白鼠源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

用抗原免疫动物获取血清是常规的抗体制备方法。β-伴大豆球蛋白作为大豆蛋白中最主要的致敏蛋白之一,制备相关抗体是建立其免疫学快速检测方法的基础。将提取的天然β-伴大豆球蛋白与弗氏佐剂混合,乳化后皮下多点注射Balb/c小鼠,每3周加强免疫1次,免疫后第10天对所制备多抗血清的免疫学特性进行鉴定。结果表明,5次免疫后6只小鼠多抗血清效价均达1∶6 400以上,其中6号小鼠的多抗血清敏感性最强,其半数抑制浓度IC50为718 ng·mL-1。此多抗血清与芝麻蛋白、麦胚球蛋白无交叉反应,与花生蛋白、大豆球蛋白交叉反应率低于10%。本试验成功制得了效价高、敏感性强、特异性好的鼠源多抗血清。     

恩诺沙星多克隆抗体制备及阻断ELISA检测方法的研究

采用混合酸酐法将恩诺沙星(ENR)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(ENR-BSA)和包被抗原(ENR-OVA).将免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体(ENR pAb),应用ENR pAb研制ENR残留阻断ELISA快速检测方法,并对其灵敏度、半数抑制浓度IC50特异性、准确度进行测定.结果阻断ELISA的线性检测范围为1～205 ng/mL,灵敏度1 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为11 ng/mL,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均<0.1%,鸡肉样的平均添加回收率分别为87.35%,平均变异系数均<10%.本检测方法具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合ENR残留快速检测的推广应用.     

大豆球蛋白兔源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

为建立大豆球蛋白致敏原检测方法和蛋白致敏性亚基的表位定位,从脱脂豆粉中分离纯化大豆球蛋白,制备多克隆抗血清,并进行免疫学特性分析。大豆球蛋白等电点pH值为6.4,采用碱溶酸沉法对大豆球蛋白进行粗提,用Sepharose CL-6B层析纯化大豆球蛋白粗提物,用SDS-PAGE检测蛋白纯度,免疫新西兰兔制备多抗血清,并对血清进行免疫学特性鉴定。结果表明:1号兔效价达到1∶6×10^4,由间接竞争ELISA抑制曲线可知,半数抑制率IC50为527 ng/mL,1号兔的多抗血清敏感性最高。特异性测定结果表明,该多抗血清除了与β-伴大豆球蛋白和花生蛋白的交叉反应率为8.6%和4.6%,与其他蛋白交叉反应率均小于0.2%。制备的兔源多抗血清效价高、敏感性强、特异性好,为大豆球蛋白单克隆抗体的制备及大豆蛋白致敏性亚分子结构的定位奠定了基础。     

应用间接ELISA方法定量检测转基因抗虫玉米

应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白质作为标准蛋白和免疫抗原，通过抗体-抗原-酶标抗体反应，建立了间接酶联免疫吸附测定法（ELISA），以快速检测转基因抗虫玉米中的BtL表达蛋白，用建立的ELISA法对4种进口玉米实物样品进行了测定，实验结果得到了免疫印迹分析的验证，并与进口试验盒方法的定量分析结果相一致。     

大豆主要过敏原Gly m Bd 28K基因的克隆表达、纯化及多抗血清的制备

RT-PCR克隆大豆主要过敏原Gly m Bd 28K基因,根据序列设计引物,扩增目的基因的开放阅读框,与MBP载体连接,测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,并用IPTG诱导表达.亲和层析法纯化重组蛋白,SDS-PAGE验证蛋白的纯度,免疫新西兰大白兔,收集多抗血清,用ELISA法测效价.扩增出含Gly m Bd 28K目的基因片段,诱导并获得高浓度和预期相符的表达产物,经层析纯化出Gly m Bd 28K蛋白,免疫新西兰大白兔,获得效价为1∶1.6×106多抗血清.     

大豆球蛋白鼠源多克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

为建立大豆球蛋白的免疫学快速检测方法并对其进行相关脱敏研究,采用Deak法从脱脂豆粉中分离出大豆球蛋白,经过CL-6B柱层析进一步纯化,制得纯度较高的大豆球蛋白,并以此为免疫原,与佐剂1:1混合并充分乳化,采用背部多点注射法对6只Balb/c雌性小鼠进行免疫.免疫程序结束后得到4种多抗血清效价在1:6400以上,达到实...     

谷物中伏马菌素B1残留的直接竞争ELISA检测方法研究

以抗伏马菌素B(1Fumonisin B1,FB1)单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶(HRP-FB1)作为标记抗原,建立检测谷物中FB1的直接竞争酶联免疫吸附法(dc-ELISA);并与国家标准方法(HPLC,GB/T 255228—2010)进行比较,选取真菌毒素呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1考察方法的特异性.结果显示:该dc-ELISA方法线性范围在200~800 ng/mL之间,回归方程为Y=-0.000 8X+0.978 9,决定系数R2为0.997 4,检出限为182.4 ng/mL,6份样品的批内和批间变异系数分别为7.4%和7.7%,平均加标回收率为98.5%(n=6).样品检测显示dc-ELISA与HPLC方法具有良好的相关性(r=0.999 6),与其他真菌毒素无交叉反应.因此,dc-ELISA法可应用检测玉米等谷物中FB1的含量,适合大批量筛选样品.     

响应面法优化β-伴大豆球蛋白超高静压处理条件的研究

β-伴大豆球蛋白是7S球蛋白的主要成分,是重要的大豆抗原蛋白。在单因素试验的基础上对超高静压处理压强、处理时间、β-伴大豆球蛋白质量浓度3个因素进行研究,以β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为响应值,采用响应面法优化β-伴大豆球蛋白超高静压处理条件。结果表明:β-伴大豆球蛋白超高静压处理最佳条件为压强455 MPa、时间18 min、蛋白质量浓度15 mg/m L,在此条件下β-伴大豆球蛋白抗原性抑制率为49.59%。验证试验测得此条件下β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为51.19%,标准偏差为1.07%,说明利用响应面法分析结果可靠。     

大豆球蛋白吸附在空气-水界面上的流变学研究

采用轴对称滴形分析法研究了大豆球蛋白吸附在空气-水界面上的界面流变特性，主要检测了在有代表性的浓度和pH值条件下其表面张力和表面膨胀特征参数随吸附时间的变化。试验表明，随着吸附时间的延长，大豆球蛋白吸附在空气-水界面上的表面张力降低，膨胀模量增大而相角减小，这主要与蛋白质在界面上的吸附、展开和（或）蛋白质间的相互作用有关。大豆球蛋白在空气-水界面上的吸附随着初始体相蛋白浓度的增加而加快，受体相pH值的影响很大。从流变学的角度分析，大豆球蛋白吸附到空气-水界面上所形成的粘弹性的吸附膜实际上是弹性的。     

热处理对β-伴大豆球蛋白结构及免疫活性的影响

以脱脂豆粉为原料,利用碱溶酸沉法分离提取β-伴大豆球蛋白,采用间接竞争ELISA法测定不同温度、加热时间、反应浓度下β-伴大豆球蛋白的抗原性变化,并对热处理后产物的溶解度、免疫原性及结构特性进行分析。结果表明:热处理能显著影响β-伴大豆球蛋白的抗原性。热处理后,样品蛋白的溶解度随温度升高呈先上升后下降的趋势。免疫印迹结果显示:热处理后β-伴大豆球蛋白的免疫原性有一定程度的降低,但不能完全消除。傅里叶红外光谱结果表明:热处理之后样品蛋白中的α-螺旋和β-折叠的含量减少,β-转角含量和无规则卷曲含量增加。     

玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统.竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备.实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增,回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上.通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1%GMO玉米的亮度相同,从而确定转基因玉米的检出限为1%.然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应,以此进一步确定样品中GMO的含量范围.     

高灵敏的磁酶免疫吸附分析法用于谷物中伏马菌素FB_1的快速检测

建立谷物中伏马菌素FB1磁酶免疫吸附分析法(Magnetic enzyme-linked immunoassay,MELISA),并对实际样品进行测定。以自制磁性纳米颗粒为固相载体,负载伏马菌素FB1-卵清蛋白偶联物(FB1-OVA),建立检测FB1的MELISA方法,并与传统ELISA法和国标方法(HPLC,GB/T 255228—2010)进行比较。该方法线性回归方程为y=-0.229 5x+0.569 3(x为lg(CFB 1),y为OD/OD0),线性范围0.1~25.0 ng/m L,相关系数r=0.995 4,检测限为0.071 ng/m L,与其他4种真菌毒素交叉反应率均低于2.0%。在不同的加标水平下,玉米和小麦批内加标回收率分别为95.2%~120.0%和84.4%~120.0%,对应的批间加标回收率分别为90.0%~100.0%和90.0%~110.0%(其相应的批内和批间RSD分别小于6.5%和12.8%)。与传统的ELISA和HPLC法相比,MELISA具有更低的检测限和更高的灵敏度。本研究所建立的MELISA灵敏度高、操作简单、检测快速,适用于大批量谷物样品中FB1含量的快速测定。     

花生油中掺入大豆油的鉴别研究

利用气相色谱法(GC)结合化学计量学技术建立了花生油中掺入大豆油的鉴别模型以及掺伪定量分析模型.分别采用气相色谱法、主成分分析(PCA)、聚类分析(CA)和最小二乘支持向量机(LS-SVM)对脂肪酸色谱数据进行处理.结果显示,利用LS-SVM构建的花生油掺大豆油的鉴别模型准确率最高,达100%;运用偏最小二乘法(PLS)建立花生油掺伪定量模型,并通过交互验证考察所建模型的可靠性,PLS模型的相关系数(R2)、交叉验证均方根误差(RMSECV)和预测均方根误差(RMSEP)分别为0.996、1.59%和2.08%,优于经典的多元线性回归(MLR)和主成分回归(PCR).这表明应用化学计量学技术能够快速、准确地鉴别花生油的真伪和检测花生油中大豆油的含量,对其他油脂掺伪检测也具有一定的参考价值.     

我国零售企业构建核心竞争力的基本思路

提出了提升我国零售企业竞争力的基本思路,为使我国零售企业在激烈的市场竞争中保持长期竞争优势,获得稳定的发展能力,要从战略层次、组织层次、技术层次3个方面构建其核心竞争力.     

钻孔灌注桩施工的监理

根据钻孔灌注桩的施工特点，较全面地介绍了其质量监控方法，提出了质量控制关键点设置的部位，同时编制了质量控制监理程序，使施工过程处于有效的监控之中，确保施工质量．     

豆渣水溶性膳食纤维制备工艺的研究

采用机械法-酶解法从豆渣中提取水溶性膳食纤维,研究了料水比、纤维素酶的添加量、提取时间、提取温度和溶液pH等5个因素对水溶性膳食纤维提取量的影响,并确立了制备水溶性膳食纤维的最佳工艺条件.结果表明,在该工艺条件下,水溶性膳食纤维的含量由原来的2.5%提高到22.8%.     

均衡Huffman树的构造算法

给出了一种构造均衡Ｈｕｆｆｍ ａｎ 树的算法,并给出了算法正确性的证明     

旧路拓宽施工技术与工艺

旧路拓宽加铺改造对提高道路等级和改善路网结构具有较高的技术经济价值.为减小因旧路拓宽而产生的新旧路基间的不均匀沉降和刚度差异等对路面结构的影响,有必要对旧路拓宽的施工技术与工艺进行探索研究,确保旧路拓宽改造工程得以顺利实施.     

高速公路沥青路面离析的检测与处理

以湖北襄（樊）荆（州）高速公路AC-20G型沥青混合料为例，分析了离析产生的原因，并提出了离析的类型、检测方法及预防措施。旨在通过科学判断离析程度，减少高速公路的早期破坏。     

Hough变换在汽车车身缝隙检测中的应用

提出通过检测汽车车身缝隙来评定汽车防雨密封性能的方法，利用CCD摄像机拍摄缝隙图像，采集到计算机中，经过图像处理提取缝隙尺寸信息，评定汽车防雨密封性能。该方法中最重要、最复杂的环节是图像处理过程中的缝隙边缘检测，文中主要讨论在图像处理过程中利用Hough变换进行边缘检测，提取缝隙轮廓信息的方法，并且用Maflab6．0编程实现。