拟南芥CRY1基因C末端导入甘蓝型油菜的遗传及表达

通过卡那霉素抗性鉴定,对甘蓝型油菜westar转基因后代T2代株系进行了研究.结合PCR检测及序列比对验证,对拟南芥CRY1基因C末端导入甘蓝型油菜后的遗传表现进行了分析,并利用GUS染色和花色素苷积累量的比较,对CRY1基因C末端在转基因油菜中的表达进行了研究.结果表明:转化的外源目的基因多数以嵌合形式,少数以单拷贝和嵌合的混合形式整合到转基因油菜的基因组中;目的基因能稳定地遗传给后代,株系间遗传传递率为62.5%;T2代的遗传行为少数呈现孟德尔遗传,多数呈现非孟德尔遗传现象;拟南芥CRY1基因能在转基因油菜中表达,但也出现了沉默现象.     

转拟南芥AtNHX1基因促进烟草对钾吸收的研究

提取拟南芥总RNA,反转录合成Na /H 逆向转运蛋白基因AtNHX1,构建了植物高效表达载体,用叶盘法将其导入烟草,经筛选获得了抗卡那霉素和GUS染色阳性的转化子38株.应用荧光定量PCR方法对转化材料部分含AtNHX1基因的烟草内源钾通道基因、烟草K 转运蛋白基因和烟草焦磷酸酶基因的转录水平进行了分析.结果表明:在转化烟草中可以检测到AtNHX1基因mRNA,与未转化材料相比,烟草钾离子转运蛋白基因NtHAK1的转录降低,H -ATPase基因NHA1转录增加,钾通道基因NKT转录无显著变化,T1代转化烟叶中K 含量显著增加,Na 、Ca2 无显著变化,烟叶中总糖含量降低,证明了编码拟南芥AtNHX1基因与植物的K 吸收有关.     

胸腺素α1基因在钝顶螺旋藻中的表达

将钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）在24℃培养，并经2mmol/L EDTA预处理16－24h，以本实验室构建的基因整合平台系统供体质粒pEUTISI进行超声波转化螺旋藻，经筛选获得了具G418抗性的转化藻株。通过PCR扩增和Southern杂交证实，pEUTISI中目的的基因UB－Tα1和nptII基因已整合到钝顶螺旋藻染色体上。转化藻株经45℃热诱导40min后，进行蛋白质SDS－PAGE电泳和Western blot，杂交结果证实，外源胸腺素α1基因在螺旋藻中得到有效表达。     

拟南芥膜相关蛋白基因CP5的克隆及其表达研究

CP5是利用人ACA血清筛选拟南芥cDNA文库的过程中克隆的一个新基因，GenBank注册号为AF130253。Blast软件比对表明它位于拟南芥的第一条染色体上，氨基酸序列与动物的磷脂酰胆碱转移蛋白的同源性为25％。软件预测它是一种膜蛋白。Southern杂交结果表明CP5在拟南芥基因组中为单拷贝。原位杂交结果表明CP5 mRNA在根部主要在根的皮层，在叶片和叶柄组织中在维管组织附近的细胞，花序其部成熟小花中、内果皮和成熟的种子中高表达。兔抗CP5的多克隆抗体识别拟南芥愈伤组织中27.5KD抗原；游离朱生质体的间接免疫荧光结果表明CP5主要定位在核膜、内质网和质膜等膜系统上，上述结果表明CP5可能是一种重要的膜蛋白。     

Patatin启动子驱动的乙肝表面抗原基因在马铃薯中的表达

按常规分子克隆方法将马铃薯中高表达的ｐａｔａｔｉｎ启动子和乙肝表面抗原基因分别插入双元质粒ｐＢＩ１０１成为植物表达载体ｐＰＨＧ９,由前者驱动后者表达;通过农杆菌转化法将乙肝表面抗原基因导入马铃薯并获得再生植株;用ＥＬＩＳＡ方法检测经ＰＣＲ鉴定的转基因植株中乙肝表面抗原的含量,对照标准曲线得知转基因马铃薯植株中的乙肝表面朱含量高达１００￣１７４ｎｇ／ｍｇ可溶性蛋白。     

可在鱼体内表达hu-IFN-α的基因重组构建及转化

通过分子重组,将人α－干扰素（hu-IFN-α）基因编码序列克隆到鲤鱼β－肌动蛋白基因启动子下游,构成成能在鱼体内组成型表达hu-IFN-α的基因重组分子。经限制性酶切分析、Southern杂交和序列测定,证明重组分子构建的正确性。采用显微注射法将这一重组基因转化草鱼受精卵,获得了表达人α-干扰素的转基因草鱼。     

莴苣1-FFT基因的克隆及其功能分析

利用反转录PCR技术和cDNA末端快速扩增(RACE)技术从莴苣中分离出1-FFT(果聚糖:果聚糖1-果糖基转移酶)候选全长cDNA,序列分析表明该基因的开放阅读框中具有β-果糖苷酶单元(蔗糖结合框)、RDP域和EC域三个活性中心域.Southern杂交分析表明该基因在莴苣基因组中以单拷贝形式存在.利用农杆菌介导的叶盘转化法将该基因转入无1-FFT基因的烟草细胞,获得了转基因植株.体外酶反应证实转基因叶片提取物中具有1-FFT活性,该基因编码1-FFT.     

修饰的cpti基因在转基因棉花后代中的表达及其抗虫性分析

对转修饰cpti基因（即sck基因）的抗虫棉T3代进行了分子检测和抗虫性检测，PCR，Southern杂交证明外源基因已稳定遗传给后代植株，抑制剂活性检测表明转sck基因后代比转未修饰cpti基因后代具有更强的县蛋白酶抑制剂活性，抗虫性分析表明，转基因后代对棉铃虫的生长发育具有明显的抑制作用，结果进步说明，将外源蛋白细胞内靶向定位的策略应用于棉花抗虫基因工程，可以提高外源蛋白在细胞内的积累量，进而提高转基因植株及其后代的抗虫性。     

一种新的钙依赖性的蛋白激酶基因CP4的克隆及其表达研究

在利用人ACA(Anti-Centromere/Kinetochore Autoantibody)血清研究拟南芥ACA相关蛋白的过程中克隆了钙依赖性的蛋白激酶基因家族的一个不典型基因，称为CP4，GenBank注册号为AF130252。Southern杂交结果表明，拟南芥基因组中至少存在两种以上等位形式的CP4。原位杂交结果表明，CP4 mRNA在拟南芥的花和根中高表达，在果实和叶片中没有表达。此外还构建了CP4的高效表达载体，为进一步研究CP4的功能打下了基础。     

低能离子束对拟南芥诱变效应的研究

依据不同生态型的拟南芥接受不同剂量、不同能量以及不同类型离子的注入，种子成苗率受到的影响程度的不同，选定适合于拟南芥诱变、转化的离子能量和剂量。然后结合RAPD方法检测了离子注入拟南芥种子在当代和后代中引起的变异情况，结果是离子束在当代中可引起DNA水平上丰富的变异，突变频率较高，并且某些变异条带可传递至后代。     

MnO2-TiO2-MgO复相添加剂对氧化铝陶瓷烧结温度的影响

用注浆成型方法,通过加入MnO2-TiO2-MgO复相添加剂,在1300℃下获得了相对密度为95%的氧化铝陶瓷。研究了MnO2-TiO2-MgO复相添加剂对氧化铝陶瓷力学性能、显微结构的影响。通过比较在添加相同质量MnO2、MgO的情况下,添加不同质量的TiO2对氧化铝陶瓷烧结性能的影响。结果表明,该复相添加剂能有效降低氧化铝陶瓷的烧结温度,尤其Al2O3+0.5%MgO+3%MnO2+3%TiO2体系烧结效果最好,晶粒分布均匀,几乎无晶粒异常现象,平均粒径为1μm,烧结体密度达到3.78g/cm3。     

基因枪法转化水稻(Oryza sativa L.)获得可育的转抗虫基因水稻再生植株

应用基因枪（particle bombardment)转化技术成功地将豇豆胰蛋白酶抑制剂（cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因分别导入三个水稻粳稻栽培品种（Oryza sativa L.,japonica)中花8、中花10和中作321的幼胚和胚性愈伤组织中,并由此获得了可育的再生植株,抗性植株的筛选频率为6．1％－12．24％。经PCR、Southern blot分子检测和ELISA检测等证实所获得的潮霉素抗体植株为转基因植株。抗虫性分析结果表明,部分转基因水稻植株对玉米螟虫（Ostrinia nubilalis)有较好的抗性。     

转Bt＋CpTI双价基因抗虫棉铃虫性的时空表达

以转单价Bt基因抗虫棉品系中心Bt和常规棉苏棉12号对照,研究了转Bt＋CpTi双抗－1抗虫棉对棉铃虫,抗性的时空表达特征,在棉花生长发育进程中,用4－21叶位主茎叶饲喂棉铃虫初孵幼,虫,5天后观察：双抗－1和中心Bt的4－21叶上存活棉铃虫中均无3龄幼虫,苏棉12号中3龄幼虫存占活幼虫的40％以上,双抗－1和中心B棉铃虫的死亡率相近且随叶位升高而下降,分期播 抗虫性测验与各叶位抗虫性测定相似,即双抗－1和中心Bt各播种期的存活棉铃虫中没有3龄虫,苏棉12号各播种期都有3龄虫出现,双抗-1棉铃虫的死亡率与中心Bt相近,且随播种日期推迟棉铃虫死亡率逐渐升高,试验结果表明：双抗－1对棉铃虫的抗性水平与中心Bt相近,且抗性表现为前期高后期低,也对双价抗虫棉的时空表达特征与棉铃虫产生抗性的风险关系进行了讨论。     

抗温耐盐聚合物冻胶的低温合成及性能

以过硫酸铵/亚硫酸氢钠(APS/SHS)氧化还原体系为引发剂,利用丙烯酰胺(AM)、N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)等组成的共聚交联体系实现了黏弹性聚合物冻胶的低温聚合。探讨了单体、交联剂、引发剂用量及反应温度等合成条件对冻胶强度的影响,并采用环境扫描电子显微镜(ESEM)、红外光谱(FTIR)、热重-差热分析(TG-DSC)对聚合物冻胶进行了表征。确定其优化合成条件为:反应温度30℃,AM用量8wt%、MBA用量0.15wt%、引发剂(APS/SHS,质量比3∶2)用量0.15wt%(以反应物总质量计),在该条件下合成的聚合物冻胶强度较大、黏弹性较好。溶胀实验显示,在清水、1wt%NaCl、1wt%+0.5wt%CaCl2、5wt%NaCl、10wt%NaCl水溶液中浸泡6d的溶胀率分别为44%、50%、50%、62%和71%,最高可达1.71g/g,表明该聚合物冻胶具有一定的耐盐性。ESEM结果显示聚合物冻胶具有多孔结构,且孔隙度高,孔径分布均匀,溶胀性能良好;TG-DSC表明聚合物冻胶具有良好的热稳定性;岩心封堵实验表明该聚合物冻胶封堵效果良好,具有逐级封堵调剖特性。     

低温等离子体制备改性催化剂

低温等离子体在催化剂制备与改性中具有一些特殊效应,本文通过分析低温等离子体处理代替焙烧制备催化剂、低温等离子体处理结合传统热力学改性强化催化剂两个方向的研究,总结了低温等离子体在改善催化剂结构和表面性能、强化负载-载体之间的相互作用、构建传统制备不易得到的催化剂化学形态等方面的研究发现,并对低温等离子体处理所取得的优良效果进行作用机理分析总结。此外,概述了不同低温等离子体发生装置在强化制备催化剂过程中的应用,并对不同发生装置所造成的影响进行分析、对比。最后,根据目前研究进展对低温等离子体制备与改性强化催化剂的现状进行分析与未来展望。     

转水稻巯基蛋白酶抑制剂基因毛白杨的获得

通过农杆菌介导法将水稻巯基蛋白酶抑制剂基因导入毛白杨。毛白杨叶片到农杆菌共培养，采用卡那霉素３０ｍｇ／Ｌ筛选转化子获得抗性芽，然后转到卡那霉素５０ｍｇ／Ｌ的培养基上继续筛选，待转化芽长至１～２ｃｍ时切下移至卡那霉素５０ｍｇ／Ｌ的生根培养基上获得完整再生植株。通过ＰＣＲ检测和ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明水稻巯基蛋白酶抑制剂基因已整合到杨树基因组中。     

抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)的单链抗体在转基因烟草根分泌物中的初步表达

为探索利用植物根分泌表达重组蛋白的可行性，构建了含有抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20—47)单链抗体(ScFv)基因的表达载体。该ScFv基因转化烟草后在烟草根部细胞的细胞质和内质网中获得表达。实验结果表明，5’端融合ER导向信号肽的重组ScFv可通过根分泌表达。