检测伐地那非的单克隆抗体的制备方法

为了能够获得检测伐地那非的单克隆抗体,采用戊二醛作为连接剂,将伐地那非连接到载体蛋白上,使伐地那非药效必需基团暴露在人工抗原表面作为主要抗原决定簇。经条件优化,偶联比为6.8:1 的抗原免疫小鼠后产生的抗体滴度最高。通过杂交瘤技术获得了4 株能够同时识别伐地那非及其类似物Piperidenafil 的单克隆抗体。     

液相色谱-质谱联用法检测保健品中非法掺入的硫代伐地那非

目的：建立了保健品中非法掺入的硫代伐地那非HPLC-MS专属检测方法。方法：保健品样品经甲醇超声提取得提取液,再通过液相色谱-串联四级杆质谱进行分析,根据相对分子量、液相色谱保留时间等,对保健品中非法掺入的硫代伐地那非进行定性以及定量分析。 结果表明：硫代伐地那非在浓度为10ug/mL~200ug/mL范围内,呈良好线性关系,R2=0.998,精密度和稳定性良好,加样平均回收率为99.9%,RSD为0.613%,方法准确可靠,专属性强,并测得某市售保健品中硫代伐地那非的含量为0.34%。结论：液相色谱-质谱联用法专属性强,灵敏度高,可作为检测保健品中非法掺入硫代伐地那非的有效方法。     

保健酒中舒林酸免疫学检测方法的建立

舒林酸是常用非甾体抗炎药物,近期常发现不法生产者在保健酒中添加舒林酸增加治疗效果,这种现象对消费者健康构成威胁。为了建立快速检测舒林酸的免疫学方法,本文以活泼酯法将舒林酸分别连接到BSA制备免疫抗原,连接到OVA上制备检测抗原。用免疫抗原免疫家兔制备多克隆抗体,配合检测抗原经条件优化建立竞争抑制酶联免疫吸附检测方法。实验结果表明,检测体系IC50值为18.1 ng/mL,最低检测限为3.5 ng/mL,检测保健酒中舒林酸加标回收率在82.1-94.2%,变异系数小于7.6%。与8种相关药物交叉反应率都小于0.05%。与用ELISA方法与HPLC检测市售保健酒,2例阳性和28例阴性结果全部吻合。因此,本文所建立的舒林酸免疫学检测方法具有灵敏度高和特异性强的特点,能够满足保健酒中快速筛选舒林酸的需要。     

保健酒中萘普生免疫学检测方法的建立

萘普生是疗效显著但有一定副作用的非甾体抗炎药物,近期频繁发现不法生产者在抗风湿保健酒中添加萘普生增加治疗效果,这种现象对消费者健康构成威胁。为了究建立快速检测萘普生的免疫学方法, 本文以活泼酯法将萘普生分别连接到BSA制备免疫抗原,连接到OVA上制备检测抗原。用免疫抗原免疫家兔制备多克隆抗体,配合检测抗原经条件优化建立竞争抑制酶联免疫吸附检测方法。实验结果表明,检测体系IC50值为23.0 ng/mL,最低检测限为3.1 ng/mL,检测保健酒中萘普生加标回收率在87.3~102.1%,变异系数小于8.9%,与8种相关药物交叉反应率都小于0.05%。且与用ELISA方法与HPLC检测市售保健酒,1例阳性和19例阴性结果全部吻合。因此,本文所建立的免疫学检测萘普生的实验方法,具有高灵敏度和特异性,能够满足保健酒萘普生快速筛选的需要。     

检测伐地那非的单克隆抗体制备方法

为了能够获得检测伐地那非的单克隆抗体,采用戊二醛作为连接剂,将伐地那非连接到载体蛋白上,使伐地那非药效必需基团暴露在人工抗原表面作为主要抗原决定簇。经条件优化,偶联比为6.8:1的抗原免疫小鼠后产生的抗体滴度最高。通过杂交瘤技术获得了4株能够同时识别伐地那非及其类似物Piperidenafil的单克隆抗体。     

三聚氰胺及其类似物国内外检测方法综述

介绍了近年来国内外三聚氰胺及其类似物的定量和定性检测方法,主要涉及食品、饲料中同时检测三聚氰胺及其类似物的国际、国内标准方法,国内外文献报道方法和快速筛选分析方法。并介绍了检测的注意事项。     

保健食品中西地那非检测方法的研究进展

枸橼酸西地那非作为一种特异性磷酸二酯酶5型抑制剂, 常被非法应用于保健食品中。由于西地那非毒副作用大及滥用问题突出, 研究其检测方法十分必要。目前已报道的西地那非检测的方法主要有分光光度法、色谱法、光谱法、毛细管电泳以及免疫分析法, 但这些方法各有利弊。本文针对当前保健食品中西地那非检测方法作了综述, 以期为该类食品的安全检测提供方法学思路。     

纸喷雾离子化质谱法快速筛查保健食品中违禁添加的磷酸二酯酶5抑制剂

目的建立纸喷雾离子化质谱(PSI-MS)法快速检测保健食品中3种非法添加的磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂(西地那非、伐地那非和他达拉非)的方法。方法利用PSI-MS法对样品中非法添加物进行初步定性鉴别,并通过内标法进行半定量分析。结果 24种包括胶囊、片剂、丸剂、粉末、酒剂、糖浆及口服液等剂型在内的待测市售保健品的PSI-MS检测结果与HPLC-UV检测结果基本一致。各目标物在一定范围内线性关系良好,相关系数r~2均0.99,检出限均在1.0 mg/L以下,相对标准偏差为20%~24%。结论本方法快速、准确、专属性强,适用于大批量复杂基质样品中PDE5抑制剂的快速筛查。     

食品中-种新型PDE-5抑制剂的快速筛查和定量测定

摘要：目的对食品中发现的一种非法添加的新型PDE-5抑制剂进行结构解析并建立定量测定方法。方法采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法（HPLC-DAD）发现了一种未知的新型伐地那非类似物,采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱质谱（UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS）对其结构进行质谱解析,并依据解析的化学结构购买对照品,确定该物质为O-丙基伐地那非。采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)建立典型食品中O-丙基伐地那非的定量测定方法。结果O-丙基伐地那非在0.5025~50.25ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数（r）为0.9998,方法检出限为0.025mg/kg,方法的定量限为0.05mg/kg,在咖啡、压片糖果、保健酒基质中3个水平加样回收率分别为92.5%、86.3％、98.6%,RSD均小于4.6％。采用该方法对市场监管部门送检的93批样品进行测定,结果其中17批检出O-丙基伐地那非,其含量为28.3~359mg/kg。结论所建立的方法快速、灵敏、准确,可用于O-丙基伐地那非的筛查和定量。研究思路可给其他非法添加未知物的鉴定提供参考。     

食品及食品接触材料中三聚氰胺及其类似物色谱检测方法研究进展

本文以食品及食品包装材料中三聚氰胺及其类似物为重点,对现有检测方法的样品提取、色谱分析、基质效应等进行综述,为我国开展食品领域三聚氰胺及其类似物的限量制定和研究提供一定的参考。     

Development and evaluation of an immunochromatographic strip for rapid screening of sildenafil-type compounds as illegal additives in functional foods

Sildenafil is a phosphodiesterase-5 inhibitor (PDE-5) for the treatment of erectile dysfunction. Undeclared sildenafil and related analogues adulterated in functional foods are a threat to public health. To screen these illegal drugs rapidly in herbal samples, an immunochromatographic (IC) assay was developed based on polyclonal antibodies specific to both sildenafil and its analogues. A group that is pharmacological necessary for sildenafil and its analogues was employed as a representative hapten for the generation antibodies against the target compounds. The desired antisera showed satisfactory specificities to sildenafil and major analogues with IC₅₀ values ranging from 19.3 to 34.6 ng ml^–1 in a referring enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The optimised IC assay showed detection thresholds in the range 5.0–20 μg g^–1 for sildenafil and major analogues in herbal samples. Sixty herbal food supplements were screened and six were found to be positive using the IC strip. It was confirmed by ELISA and UPLC-PDA-MS/MS that positive samples contain target illegal additives in levels of 10–40 mg g^–1 (1–4%). In this range, sensitivity of the IC strip is adequate to screen sildenafil-type compounds in herbal commodities under a dilution ratio of 1:10³. Thus, the current IC assay is a suitable tool for screening sildenafil and its analogues as illegal additives in herbal food supplements.     

苯甲酸及其类似物与酪氨酸酶分子对接研究

以AutoDock 4.2和iGEMDOCK 2.1分子对接软件对13 种苯甲酸类似物与酪氨酸酶进行模拟对接研究,探讨苯甲酸类似物对接结合自由能与实验测得的酶抑制活性的关系,并对分子对接结果进行分析。结果表明：AutoDock 4.2程序中Cu电荷数的设置对结合自由能有显著影响,铜电荷数为2.0时,苯甲酸类似物结合自由能和pIC50（－lgIC50）线性相关系数可达0.803 6。iGEMDOCK 2.1预测苯甲酸类似物的结果线性较差,即AutoDock 4.2较iGEMDOCK 2.1预测酪氨酸酶抑制剂的可靠性更高。     

表面增强拉曼光谱在食品添加剂和违法添加物检测中的应用

表面增强拉曼光谱技术作为一种新兴的分析检测技术,在食品快速检测行业具有广阔的应用前景。文章简述了表面增强拉曼光谱技术在食品添加剂及违法添加物快速检测中的最新研究状况,并展开讨论,以期为表面增强拉曼光谱技术在食品检测领域提供参考。     

基于近红外光谱对婴幼儿配方奶粉中非法添加物的快速鉴别方法

利用近红外光谱技术结合Adulterant Screen算法建立婴幼儿配方奶粉中非法添加物快速鉴别方法。采集婴幼儿配方奶粉样品及非法添加物近红外光谱,建立婴幼儿配方奶粉分类模型及掺假物模型,运用Adulterant Screen算法进行计算分析,建立了婴幼儿配方奶粉中非法添加物的快速鉴别方法。方法对单组份掺杂婴幼儿配方奶粉的识别最低检出浓度为:三聚氰胺0.04%、环丙氨嗪0.05%,尿素、双缩脲及硫脲0.1%,双氰胺0.2%。对于二组分和三组分掺假奶粉在两倍到十倍检出限浓度的准确识别率分别达到了83.3%和50%,对无掺假样品的识别率100%,同时,该鉴别模型可以通过一个模型即可实现快速鉴别多个非法添加物。本研究建立的模型能为婴幼儿配方奶粉提供了一种操作简单、快速、可靠、样品无损的掺假鉴别方法,能有效的运用于掺假鉴别的日常检测工作,为婴幼儿配方奶粉的检测和监管提供强有力的技术支持。     

Development of an indirect competitive immunoassay for parathion in vegetables

An indirect competitive immunoassay for the insecticide parathion has been optimized and characterized. This assay is based on a monoclonal antibody (2H₉) produced from an immunogen, a bovine thyroglobulin (BTG) conjugate wherein the reduced form of parathion was multiply bound to the carrier protein via diazo bonds. Assay was performed in the parathion-HSA coated (0.25 μg/ml) ELISA format in which antibody was diluted 1:2000. Several physicochemical factors (pH, ionic strength, BSA concentrations and organic solvent) that influence assay performance were studied and optimized. Finally, the assay was applied to the analysis of parathion in spiked vegetable samples. The sensitivity, estimated as the IC₅₀ value, was 360 ng/ml, with a practical working range between 47 and 6000 ng/ml, a limit of detection of 26 ng/ml, and inter-assay and intra-assay variations less than 10%. The average recovery of parathion added to potato, celery and Chinese cabbage were 173 ± 34%, 108 ± 15% and 98 ± 6%, respectively.     

恩诺沙星化学发光免疫分析试剂盒的研制

主要研制一种基于鲁米诺-辣根过氧化物酶体系的化学发光免疫分析试剂盒,用于检测食品中的痕量恩诺沙星残留。反应条件优化结果为:最佳包被抗原浓度为0.5ng/mL,最佳抗体稀释倍数为1:2000,药物稀释液为0.01mol/L的PBST溶液,一抗反应时间为30min。研究结果显示:本文研制的试剂盒的回归曲线方程是y=-22842x+172936,检测线性范围是0.024～2.76ng/mL,IC50为0.106ng/mL,对蜂蜜、牛奶、鱼肉和虾肉样本的添加回收率在96%～116%、90%～97%、92%～112%、86%～112%之间,批内和批间变异系数均小于15%,试剂盒在4℃下有效期为180d。