农药残留快速检测用酶——胆碱酯酶的筛选

在常见易得的前提下,以猪血、鸡血、鸭血、链鱼和鸡肝为实验材料提取胆碱酯酶,通过比较不同来源、不同动物组织胆碱酯酶的活性,并进行了胆碱酯酶对常见农药的敏感性实验,结果表明:鸭血清BChE酶含量丰富、对常见的有机磷农药及氨基甲酸酯类农药较敏感、且来源广泛、廉价易得。可作为果蔬农药残留的快速检测用酶。      

驴血清胆碱酯酶的生化性质

从不同的动物组织中筛选胆碱酯酶,研究胆碱酯酶的酶学性质和检测有机磷农药残留的条件。实验结果表明:驴血清胆碱酯酶活力较高,确定驴血清为检测有机磷农药的最佳酶源。胆碱酯酶最适反应温度为35℃,最适pH值为7.5～8.0,底物碘化硫代丁酰胆碱对驴血清胆碱酯酶没有过量底物抑制现象,最适浓度为5mmol/L;该酶热稳定性较好,在35℃保温60 min,酶活力基本不变。以有机磷农药—敌敌畏检测为例,对胆碱酯酶的半抑制浓度IC50为0.124 mg/mL,抑制时间为15 min。     

鸡血清胆碱酯酶的提取纯化工艺研究

以鸡血清为实验材料提取农药残留快速检测酶制剂胆碱酯酶,确定了鸡血清胆碱酯酶的最佳提取和纯化工艺,即对粗酶液进行盐析、透析、吸附层析和葡聚糖凝胶柱层析等实验方法。结果表明:鸡血清胆碱酯酶经过硫酸铵盐析,透析、吸附层析和Sephadex G-100柱层析处理后,酶活力分别提高了1.548、.21、9.03、13.00倍,冷冻干燥后酶活力提高了13.58倍,比酶活力由粗酶液中的0.538 OD值/mg提高到层析后的7.304 OD值/mg。     

驴血清胆碱酯酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留

采用驴血清丁酰胆碱酯酶作为酶源,对不同的有机磷农药的检测条件和方法进行了研究,同时通过酶抑制法对锦州地区的部分蔬菜进行了农药残留检测。结果表明:乐果、敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷对驴血清丁酰胆碱酯酶(BChE)的IC50分别为0.094、0.179、0.124、0.0078mg/mL,驴血清BChE对这4种有机磷农药灵敏度的大小顺序为:马拉硫磷>乐果>敌敌畏>敌百虫。乐果、敌敌畏对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为15min;敌百虫、马拉硫磷对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为20min。用酶抑制法检测3个农贸市场的蔬菜样品,发现韭菜有2例检测结果超标,油菜有1例检测结果超标,尖椒有2例检测结果超标;蔬菜样品合格率为86.1%。      

驴血清胆碱酯酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留

采用驴血清丁酰胆碱酯酶作为酶源,对不同的有机磷农药的检测条件和方法进行了研究,同时通过酶抑制法对锦州地区的部分蔬菜进行了农药残留检测.结果表明:乐果、敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷对驴血清丁酰胆碱酯酶(BChE)的IC50分别为0.094、0.179、0.124、0.0078mg/mL,驴血清BChE对这4种有机磷农药灵敏度的大小顺序为:马拉硫磷＞乐果＞敌敌畏＞敌百虫 乐果、敌敌畏对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为15 min;敌百虫、马拉硫磷对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为20min 用酶抑制法检测3个农贸市场的蔬菜样品,发现韭菜有2例检测结果超标,油菜有1例检测结果超标,尖椒有2例检测结果超标;蔬菜样品合格率为86.1％.     

胆碱酯酶保藏方法的筛选及固定化研究

目的:对胆碱酯酶进行保藏研究,以期得到最佳的酶活力。方法:以小麦酯酶为实验材料,采取冷藏、冷冻和酶的固定化的措施,添加不同种类和不同比例的防腐剂,采用不同的包装材料进行比较研究。结果:能够保持胆碱酯酶的酶活力方法是:设定保藏温度为-20℃,添加0.1%硫柳汞采用塑料瓶包装储藏,这样可以很好地保持酶液的酶活力。结论:采用低温冷冻保藏胆碱酯酶并且添加一定剂量的防腐剂可以很好的保持胆碱酯酶酶活力。     

试纸法快速检测果蔬中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留

为了快速检测果蔬中的农药残留,研制基于酶抑制法的农药残留速测试纸。该试纸以鸭血浆胆碱酯酶为检测用酶,2,6-二氯靛酚乙酸酯为底物。反应后根据颜色变化目测判断农药残留情况,强阳性、弱阳性和阴性的颜色分别为白色、浅蓝色和蓝色。用该法检测只需13min,对敌敌畏的敏感性最强,对甲胺磷的敏感性较差,对几种常见的有机磷及氨基甲酸酯类农药的检出限在0.001～6mg/kg之间。该法简便、快速,成本低,适合果蔬中部分农药残留的现场监督检测。     

果菜中常用有机磷农药快速检测方法探讨

有机磷农药能够有效抑制胆碱酯酶酶促反应,在果菜中的应用十分广泛,它是最常见的农药之一。本文分析了果菜中常用有机磷农药快速检测的方法,通过试验得出结论,即通过颜色或是p H值进行测定。方法不仅操作便捷,而且节约资源,且适用性强。     

鸡血清丁酰胆碱酯酶与马血清丁酰胆碱酯酶对农药的敏感性的对比研究

测定鸡血清丁酰胆碱酯酶(butyrylcholinesterase,BChE)对农药的敏感性,为农药残留快速检测提供新的敏感酶源。本文以马血清丁酰胆碱酯酶为对照,以碘化硫代丁酰胆碱为底物,采用Ellman法,研究了鸡血清丁酰胆碱酯酶的酶学性质及其对有机磷和氨基甲酸酯类农药的敏感性,计算相关半抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)。结果表明,两种BChE在35℃、pH 8.0时达到最佳的反应活性,无底物抑制效应,对毒扁豆碱敏感,对盐酸多奈哌齐相对不敏感;鸡血清BChE对敌百虫、克百威、灭多威、速灭威、敌敌畏的IC50值分别为0.77、31.99、1.14、5.49、0.95μmol/L;马血清BChE对这五种农药的IC50值分别为3.88、1.22、22.58、24.18、5.46μmol/L。除克百威外,鸡血清BChE对供试农药的敏感性均高于马血清BChE。因此,鸡血清BChE具有较好的农药敏感性,可以作为农药残留快速检测的候选酶源。     

建立一种增强酶抑制法快速检测谷物中有机磷农药残留

本研究的目的是建立一种增强的酶抑制法,实现对谷物中有机磷农药残留的快速检测。通过对酶抑制法中所使用的提取剂、酶、增强剂的选择和优化,并比对抑制率的差异,最终确定使用丁酰胆碱酯酶作为催化酶、乙醇作为提取剂、溴代琥珀酰亚胺作为增强剂。在此条件下,建立了硫代磷酸脂类有机磷农药对硫磷、辛硫磷、毒死蜱和三唑磷的标准曲线(决定系数R² > 0.98),抑制中浓度(IC₅₀)分别为0.01、0.11、0.16和0.03 μg/L,满足了硫代磷酸酯类农药在不同谷物中的安全残留限量的检测需求。采用本研究改良的酶抑制法对200个不同来源的谷物样本(稻谷、小麦、玉米、糙米、杂粮)进行分析,检测出13个阳性样本,同时,因酶抑制法特异性的限制,产生了1个假阳性和1个假阴性样本。检测结果与气相色谱法符合率达到98%,表明该方法可有效用于谷物中有机磷农药残留检测。本研究可为我国粮食质量安全监管提供有力的技术支撑。

     

蔬菜中有机磷农药残留降解方法的研究进展

目前有机磷农药是应用最为广泛的化学农药之一,蔬菜是其主要作用对象,有机磷农药带来的药残严重威胁人类的健康。对于有机磷药残的降解方法主要有物理降解、化学降解和生物降解,其中生物降解法是应用前景最为广泛的降解方法之一。     

植物源性食品中有机磷农药残留检测前处理技术的研究进展

有机磷农药残留是重要的食品安全问题之一,有必要对食品中的有机磷农药进行监测。但植物源性食品成分复杂,进行有机磷农药检测前必须通过前处理进行提取和纯化。因此选择高效的有机磷农药残留前处理技术是非常重要的环节,已经成为当前研究者关注的重点。本文总结了有机磷农药分析的前处理方法的原理以及应用,包括传统提取法、加速溶剂萃取法、固相萃取法、QuEChERS法,介绍了有机磷农药的快速检测方法,包括分子印迹技术、酶抑制法、纳米材料富集法,并展望了对植物源性有机磷前处理技术的发展趋势。     

Headspace solid-phase microextraction for the evaluation of pesticide residue contents in cucumber and strawberry after washing treatment

The headspace solid-phase microextraction was developed to examine the organophosphorus (diazinon, malathion, chloropyrifos, quinalphos, profenofos) and organochlorine (chlorothalonil, α-endosulfan and β-endosulfan) pesticide residues in vegetable (cucumber) and fruit (strawberry) samples. The effects of washing by different solutions were evaluated for the reduction of organophosphorus and organochlorine pesticide residues contents. Gas chromatography with electron capture detection was used to analysis the investigated pesticides. The results showed that washing by a non-toxic solution can decrease the concentration of pesticide residues in the fruit and vegetable samples. The data further indicated that acetic acid was the most effective solution in removing the residues of the investigated pesticides from the fruit and vegetable samples when compared to sodium carbonate, sodium chloride and tap water. The amount of pesticides removed by solution washing is related to their water solubility and vapour pressure properties.     

2012~2018年曲靖市蔬菜中农药残留监测结果分析

目的 了解2012~2018年曲靖市市售蔬菜中农药残留状况。方法 2012~2018年随机采集市售蔬菜232份, 按照《国家食品中化学污染物及有害因素监测工作手册》检测农药含量, 依据GB 2763-2016《食品中农药最大残留限量》进行判断评价。结果 232件蔬菜中检出农药残留102件, 检出率43.97%, 超标13件, 超标率5.60%。机磷类农药、拟除虫菊酯类农药、氨基甲酸酯类农药检出率分别为25.86%、40.09%、21.71%。检出率最高的是拟除虫菊酯类农药; 检出超标最多的是有机磷类农药; 检出率和超标率最高的均为叶菜类蔬菜。结论 曲靖市售蔬菜存在不同程度的农药污染, 建议相关部门加大监测和监管力度。     

气相色谱法测定10种土壤有机磷农药残留

目的:制订10种土壤中有机磷农药的残留测定方法。方法:微波萃取方法提取,固相小柱净化获得土壤的样品溶液,采用安捷伦DB-608毛细管色谱柱,检测器是火焰光度检测仪器,分析土壤中速灭磷、甲拌磷、二嗪磷、异稻瘟净、甲基对硫磷、杀螟硫磷、溴硫磷、水胺硫磷、稻丰散和杀扑磷十种有机磷农药残留。结果:上述建立的气相色谱方法测定10种有机磷农药残留,检测限在0.045~0.312μg/L区间。计算回收率范围是86.5~94.9%,RSD范围是0.72~8.63%。结论:建立微波萃取方法提取,气相色谱仪测定土壤中10种有机磷农药残留方法,线性范围良好,同时具有较好的精密度和加样回收率,具有一定的研究意义。     

酶抑制-数字图像比色法检测和鉴别食品中二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药残留

目的 建立一种酶抑制-数字图像比色法检测和鉴别食品中二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药残留的分析方法。方法 采用简单的胶带黏贴剥离方式,结合低共熔溶剂洗脱对食品样品中的农药进行高效提取。基于二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药对酪氨酸酶的抑制活性,使酪氨酸酶对酚类物质的氧化能力降低,进而影响酚类物质与氯化铁生成有色物质的反应,建立酪氨酸酶、酚类物质和氯化铁的比色阵列传感器,实现农药的残留分析,并结合主成分分析实现多种农药的区分。结果 本研究建立的酶抑制-数字图像比色法对番茄、苹果和玉米中福美锌残留在0.008～8.000mg/kg的范围内线性良好,检出限为0.003 mg/kg,定量限为0.008 mg/kg,回收率为75.2%～94.9%,相对标准偏差小于5.0%。结论 本研究建立的酶抑制-数字图像比色法绿色环保、简单高效,且易于推广,适用于蔬菜、水果和谷物等食品样品中农药残留的检测,并且在多种农药的残留分析方面有良好的应用前景。     

食品中有机磷农药残留分析研究进展

有机磷农药在生物链中的积累较低,被广泛应用于农作物病虫害防治领域,但它对生物机体机能有着较为严重的毒害作用.建立有效、快速、灵敏的有机磷农药痕量残留的检测技术,成为当前研究者关注的课题.本文重点对农药残留的检测方法进行综述,内容涵盖了近年来国内外食品中有机磷农药残留的提取与分离新技术方法和现代分析方法.     

气相色谱法同时测定小麦胚片中26种有机磷农药残留

建立了气相色谱同时测定小麦胚片中敌敌畏、灭线磷、硫线磷等26种有机磷农药残留量的方法,并通过考察基质效应比较了两种不同前处理方式对测定结果的影响。通过选用DB-17型毛细管色谱柱和程序升温实现目标物的分离,采用火焰光度检测器进行定量测定。结果表明,26种有机磷农药在0.010~1.0 μg/mL的浓度范围内与其对应的峰面积呈线性关系,线性相关系数均大于0.999,方法定量限在0.005~0.010 mg/kg之间。对样品进行三个水平的加标回收试验,结果表明,加标回收率在80.61%~116.19%之间,测定结果的相对标准偏差在0.62%~6.83%之间,该方法可应用于小麦胚片中26种有机磷农药的定性筛查和定量测定,在实际样品测定中筛查出马拉硫磷、甲基毒死蜱和杀螟硫磷,含量分别为0.074±0.005、0.062±0.004、0.043±0.002 mg/kg。