中国部分食品中肠炎沙门菌分离株的PFGE分子型别分析研究

目的 研究中国食品中肠炎沙门菌分离株的分子谱别.方法 用脉冲场凝胶电泳分型技术对从中国11个省市食品中分离的51株肠炎沙门菌进行分子分型.结果 肠炎沙门菌经2种内切酶Xba I、Spe I处理后,均分为11个不同的带型.两种内切酶的分型结果不相同,但其中有部分交叉.2种内切酶的PFGE分型都有2个主要的带型,分别涵盖了分离株的70%,并在两型之间有部分兼容性.通过双酶系统的双重分型,还可以将其中的型别进一步区分为亚型.在各地区之间菌株的型别分布无明显规律,在各种食品之间菌株的型别分布,SpeI酶切后的结果更有规律.分离自羊肉中的4株菌经XbaI、Spe I酶切表现为同-PFGE型别,在Xba I分型结果中为XF型,在Spe I分型结果中为SE型,揭示了一定的亲缘关系.结论 脉冲场凝胶电泳分型技术是肠炎沙门菌分子分型的有效手段.     

单核细胞增生李斯特菌的毒力基因检测及PFGE分型的研究

目的了解福建省食品中单核细胞增生李斯特菌携带hly、plcA、plcB和prfA毒力基因的情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)的分型情况。方法将hly、plcA、plcB和prfA基因作为靶序列选取4对引物,通过聚合酶链反应(PCR)检测61株单核细胞增生李斯特菌和2株可疑单核细胞增生李斯特菌的毒力基因,用PulseNet单核细胞增生李斯特菌标准方法进行7株单核细胞增生李斯特菌的PFGE分子分型。结果61株单核细胞增生李斯特菌毒力基因为hly 、plcA 、plcB 和prfA ,2株可疑单核细胞增生李斯特菌的毒力基因分别为hly-、plcA 、plcB-、prfA-和hly-、plcA-、plcB-、prfA-。7株单核细胞增生李斯特菌的PFGE分为5个型。结论实验结果表明福建省食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌均含有hly、plcA、plcB和prfA基因,属于致病株。对2株可疑单核细胞增生李斯特菌进行了进一步的鉴定,排除了单核细胞增生李斯特菌,该毒力基因检测方法可用于可疑单核细胞增生李斯特菌的进一步鉴别。7株菌中有两对2株PFGE型别一致,一致的菌株来自不同年份不同销售地点的同一品牌,应用PFGE方法可以进一步调查该厂冻鸡肉中单核细胞增生李斯特菌的传播途径和污染源。     

中国食源性鼠伤寒沙门菌株耐药谱及PFGE分型研究

目的了解掌握中国食品中鼠伤寒沙门菌的耐药状况，并对2002—2005年国家食源性疾病监测网分离的23株鼠伤寒沙门菌进行耐药性监测及PFGE分型研究。方法利用血清学方法对2002—2005年食源性疾病监测网分离的沙门菌进行分型，并运用CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）推荐的纸片法对鼠伤寒沙门菌株进行耐药性检测。采用脉冲场凝胶电泳法（PFGE）进行PFGE分型。结果发现15株多重耐药鼠伤寒沙门菌，其中耐4～5种抗生素的6株（40％），耐6～9种抗生素的5株（33．3％），耐10种抗生素的4株（26．7％）；可分为16个PFGE型。其中5个PFGE型的菌株数超过1株。结论我国食源性鼠伤寒沙门菌分离株的多重耐药性严重，PFGE分型方法对鼠伤寒沙门菌的分型能力较好，同一PFGE型菌株的耐药谱非常接近。     

进出口食品中不同血清型沙门氏菌PFGE和MLST分型比较研究

目的通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)两种方法对进出口食品中不同血清型沙门氏菌的分辨力和应用价值进行了比较研究。方法采用PFGE和MLST两种方法对进出口食品中分离得到的鼠伤寒及肠炎两种血清型共30株沙门氏菌进行分型研究。结果两种血清型共30株沙门氏菌经PFGE分型可得到23种型别,DI值为0.9563;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经PFGE分型,DI值分别为1.000和0.9048。MLST对30株沙门氏菌分型得到4种ST型,DI值为0.5793;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经MLST分型,DI值分别为0.2571和0.1333。结论 在分辨力方面,PFGE更适合于同一沙门氏菌血清型的分型,MLST则适合于不同沙门氏菌血清型间的分型。MLST在替代、补充血清型分型方面有潜在的优势,PFGE在溯源研究方面更胜一筹。     

进出口食品中不同血清型沙门氏菌PFGE和 MLST分型比较研究

目的：通过PFGE和MLST两种方法对进出口食品中不同血清型沙门氏菌的分辨力和应用价值进行了比较研究。方法：采用PFGE和MLST两种方法对进出口食品中分离得到的鼠伤寒及肠炎两种血清型共30株沙门氏菌进行分型研究。结果：两种血清型共30株沙门氏菌经PFGE分型可得到23种型别,DI值为0.9563;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经PFGE分型,DI值分别为1.000和0.9048。MLST对30株沙门氏菌分型得到4种ST型,DI值为0.5793;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经MLST分型,DI值分别为0.2571和0.1333。结论：在分辨力方面,PFGE更适合于同一沙门氏菌血清型的分型,MLST适合于不同沙门氏菌血清型间的分型。MLST在替代、补充血清型分型方面有潜在的优势,PFGE在溯源研究方面似乎更胜一筹。     

SYBR~ GreenⅠ实时PCR快速检测沙门菌

为应用SYBRGreenⅠ实时PCR技术建立沙门菌的快速检测方法,根据沙门菌invA基因序列的特点设计特异性引物,进行SYBRRGreenⅠ实时PCR检测。以沙门菌及非同源性参考菌株做特异性检测;沙门菌不同群菌株做重现性检测;将沙门菌菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。该方法有较好的特异性、重现性,沙门菌属5个群菌株均为阳性,而其它非同源菌株均为阴性。该方法灵敏度较高,检测低限为19CFUml。该方法特异性强,重现性好,敏感性高,可以快速、准确检测食品中沙门菌。应用实时PCR技术,利用SYBRGreenI染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到沙门菌中invA基因特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过熔解曲线可知其熔点值约为80.4℃,而对其它非沙门菌则检测不到荧光信号。SYBRGreenⅠ实时PCR能通过熔解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是基因鉴定检测的新方法。     

江西省食源性沙门菌血清分型及脉冲场凝胶电泳指纹图谱研究

研究江西省食源性沙门菌的血清型,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对优势血清型进行分子分型,建立江西省食源性沙门菌PFGE指纹图谱资料库,为食源性疾病溯源提供数据。方法 对136株食源性沙门菌进行血清分型,对其中优势血清型德尔卑沙门菌菌株进行PFGE分型,获得分子分型指纹图谱,运用Bionumerics v6.6软件进行聚类分析。结果 136株沙门菌分离株血清群以B群为主,优势血清型主要是德尔卑沙门菌(49.26%),67株德尔卑沙门菌可分为41个型别的PFGE指纹图谱(相似值100%的为同一PFGE型别),主要集中在3个型别中。结论 江西省食源性沙门菌血清型分布呈多样性,优势血清型是德尔卑沙门菌,生肉制品是其主要的来源,同种血清型别的PFGE指纹图谱无相关性。     

SYBR(R) GreenⅠ实时PCR快速检测沙门菌

为应用SYBR(R) Green Ⅰ实时PCR技术建立沙门菌的快速检测方法,根据沙门菌invA基因序列的特点设计特异性引物,进行SYB(R) Green Ⅰ实时PCR检测.以沙门菌及非同源性参考菌株做特异性检测;沙门菌不同群菌株做重现性检测;将沙门菌菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测.该方法有较好的特异性、重现性,沙门菌属5个群菌株均为阳性,而其它非同源菌株均为阴性.该方法灵敏度较高,检测低限为19 CFU/ml.该方法特异性强,重现性好,敏感性高,可以快速、准确检测食品中沙门菌.应用实时PCR技术,利用SYBR(R) Green Ⅰ染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到沙门菌中inv A基因特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过熔解曲线可知其熔点值约为80.4℃,而对其它非沙门菌则检测不到荧光信号.SYBR(R) Green Ⅰ实时PCR能通过熔解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是基因鉴定检测的新方法.     

食品中沙门菌PCR检测方法的建立

为建立食品中快速检测沙门菌的PCR方法。选取沙门菌属侵袭性抗原保守基因invA基因上的靶序列设计一对引物,选择最适Mg 浓度和退火温度,建立最适PCR反应体系,用2%琼脂糖,5μl反应产物(包括EB),100V,40min进行电泳,显像。用该引物对已经传统方法鉴定的22种77株沙门菌和24种24株非沙门菌进行特异性检测,并对人工污染的食品进行检测条件的研究。Mg 浓度和退火温度对该反应体系的影响较小,稳定性较好;经传统方法鉴定的22种77株沙门菌和24种24株非沙门菌验证了该检验方法具有很好的特异性;该检测方法可以在19h内检出含有沙门菌102CFUg的食品(火腿肠、鸡蛋、散装肉馅)。与传统方法比较,该方法快速、敏感、特异,能在较短的时间内对大量样品同时进行检测,适用于食品中沙门菌的快速、敏感、特异检测。     

牛奶源金黄色葡萄球菌血清型、毒力基因及PFGE分型

目的：研究生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌分离、荚膜多糖血清型分布、毒力基因携带及脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）分型情况。方法：从河南省4?个地区奶牛养殖场采集生鲜牛奶样品按照国标法进行分离,扩增耐热核酸酶基因nuc鉴定金黄色葡萄球菌,利用聚合酶链式反应方法测定荚膜多糖血清型和毒力基因携带情况,采用PFGE分析菌株间的相关性和遗传关系。结果：从350?份生鲜牛奶样品中分离鉴定到80?株金黄色葡萄球菌,分离率为22.86%。荚膜多糖血清型测定发现,cap5（60%）是流行血清型。从这些阳性菌株中,发现有62?株（77.5%）携带有毒力基因,毒力基因set、hlb、hld、lukED、ebp、clfA和clfB,检出率分别为40.00%、51.25%、57.50%、60.00%、58.75%、57.50%和58.75%。此外,47?株（58.75%）菌携带不少于6?个毒力基因,流行的毒力基因谱型为set-hla-hlb-hld-lukED-cna-ebp-clfA-clfB。PFGE结果显示,获得72?株菌的PFGE图谱,按90%的相似性可分为12?个簇和46?种PFGE型。D簇（3?种PFGE型）、G簇（3?种PFGE型）和J簇（5?种PFGE型）菌株中均检出一定基因类型的毒力基因,表明河南地区生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌毒力基因广泛存在于多种PFGE型别中。结论：生鲜牛奶均有一定程度的金黄色葡萄球菌污染,多数菌株携带毒力基因,且毒力基因的类型较为复杂,这对消费这些牛奶的人群构成潜在的健康威胁。PFGE分型菌株主要以克隆形式进行传播,且克隆型具有多样性和差异性,故临床应加强生奶及乳品血清型、毒力基因检测及分子分型研究。     

进口水产品及肉制品中沙门菌的检测分析

为保证进口食品安全，2004年2月～9月，对送检的262批进口水产品和45批进口肉制品进行增菌及分离培养。经miniVIDAS和API20E鉴定，确定3批水产品(2批印尼冻虾，一批印度冻黄姑鱼)、1批肉制品(产自美国的冻火鸡肉)沙门菌阳性。检出率分别为1．15％和1．22％。经血清学试验鉴定，冻虾中检出山夫登堡沙门菌(Salmonella senftenberg)，冻黄姑鱼中检出巴雷利沙门菌(Salmonella bareilly)，冻火鸡肉中检出蒙德维的亚沙门菌(Salmonella montevideo)。从上述产品中检出沙门菌，说明产品存在被沙门菌污染的可能，有可能引起肠道疾病。     

鸡禽肉中的沙门氏菌和现代工业控制其污染的方法

从食品加工的角度论述了鸡在孵化、运输和深度加工过程中受沙门氏菌污染的机制,介绍了工业上去除鸡肉制品上的沙门氏菌污染的几种方法,及使用疫苗培养无沙门氏菌感染的活鸡群,使鸡从根本上摆脱受沙门氏菌感染的方法。     

涂布平板计数法与MPN法定量检测禽肉和蛋中沙门菌的比较

为选择良好的禽肉和鸡蛋中沙门菌定量检测方法 ,通过染菌实验 ,分析比较了涂布平板计数法和MPN法 ,结果表明平板计数法优于MPN法。应用平板计数法检测了 16份鸡蛋和 2 6份禽肉试样。沙门菌检出限分别为 1CFU ml和 10 0CFU g。 16份蛋类试样中均未检出沙门菌。 2 6份鸡肉试样中 ,2 0份为沙门菌阳性 ,阳性率为 77%。其中 9份试样沙门菌数低于检出限 10 0CFU g ,其余试样菌数范围为 1 5× 10 2 ～ 2 5× 10 5CFU g。对 3份 - 2 0℃保存 5d的阳性禽肉试样应用MPN法进行了冷冻前后沙门菌含量的比较分析 ,储存后的菌数比冷冻前略有增加。实验结果表明 ,在食物试样中杂菌污染严重或沙门菌水平较低的情况下 ,平板法不能准确进行沙门菌计数 ,仍需进行MPN定量检测。     

环境胁迫下沙门氏菌应激反应及抗性机制研究进展

细菌为了生存能够适应多种不利于生长的环境条件,因此许多食源性致病菌能够在某些食品保鲜处理中存活下来。沙门氏菌（Salmonella）是世界范围内常见的食源性致病细菌,在食品保鲜中可承受极端pH、温度、渗透压、寡营养和高压等胁迫。在与宿主相互作用过程中,沙门氏菌应对不同环境胁迫,可产生应激蛋白、进行系统自我调节和表达相关基因等,进而影响其致病能力,产生交叉抗性从而更好的生存和繁殖。因此,沙门氏菌能在遗传和表型水平上适应不同的极端环境。本文综述了沙门氏菌耐受环境胁迫,暴露于这些环境胁迫时发生的适应性变化,对细菌致病性的影响,以及产生的交叉保护机制。这些方面将有助于了解沙门氏菌的发病机制,对于制定抗击沙门氏菌感染的新策略,保障食品安全具有重要意义。     

食源性致病沙门氏菌血清型生物标志物的研究

寻找食源性致病沙门氏菌(Salmonella)血清型生物标志物,是研发食源性致病微生物鉴定及监控技术的基础。本文基于代谢组学技术提取5种沙门氏菌血清型8株标准菌株胞内代谢产物,对各菌株进行胞内代谢轮廓分析,并构建指纹图谱和PCA分析。研究发现,各血清型之间的产物在种类和丰度上具有较大差异,其中肠炎沙门氏菌血清型的特异性产物为硫基乙酸和α-羟基-戊二酸,伤寒沙门氏菌血清型特有产物为N-乙酰基-天冬氨酸、2(1H)-嘧啶酮和L-苏糖酸,鼠伤寒沙门氏菌血清型特有产物为肉豆蔻酸甲酯和甘油醚葡萄糖苷,猪霍乱沙门氏菌血清型特有产物1,4-萘醌,亚利桑那沙门菌血清型特有产物为3-吡啶甲酸三甲酯;通过聚类分析和PCA分析可以明显区分这5种沙门氏菌血清型。因此以上特异性产物有望作为各自血清型的潜在生物标志物。     

利用糖芯片技术快速检测沙门氏菌

为了探讨糖芯片在沙门氏菌检测上的应用,以沙门氏菌ATCC31685为主要研究对象,制作不同类型的糖芯片用于优化糖芯片检测条件;在优化条件的基础上,降低糖浓度或细菌浓度用于确定糖芯片检测限值;继而系统地研究了糖芯片在沙门氏菌和凝集素FimH拮抗剂筛选上的应用,并探究糖芯片对菌株的破坏性。由实验现象可知,沙门氏菌可与甘露糖化合物修饰的糖芯片结合,其中,以Man-1与NHS玻片所构建的糖芯片效果最优,并且两种不同的沙门氏菌(ATCC31685和ATCC9184)与糖芯片的结合能力不同,因此糖芯片可作为沙门氏菌的一种快速检测手段;在糖浓度为313 mmol/L或细菌浓度106个/mL时荧光信号接近背景值,并且糖芯片检测后对菌株无破坏性,可继续其他检测项目;此外,实验结果表明糖芯片可作为FimH蛋白拮抗剂的筛选工具。     

中草药提取物对沙门氏菌的抑菌效果研究

主要选用黄连、蒲公英、黄柏、半枝莲、黄芩、石榴皮、板蓝根、连翘、柴胡、丁香等十味中草药,采用煎煮法提取其有效成分,并对这十味中药提取物在体外对致病性沙门氏菌的抑菌效果进行了测定。实验结果表明:不同中药提取物对沙门氏菌有不同的抑制效果,其中黄连、石榴皮、黄柏三味中药的抑菌效果较好;测得其最小抑菌浓度(MIC)分别为0.0625、0.125、0.125g/mL;最小杀菌浓度(MBC)分别为0.125、0.25、0.25g/mL。经线性回归计算,50%抑制时的有效浓度(EC50)分别为0.1414、0.3289、0.3598g/mL。     

肠炎沙门氏菌gDNA标准物质的研究

作者对制备肠炎沙门氏菌核酸标准物质(g DNA)进行初探,共制备200支样品,每支约含有肠炎沙门氏菌g DNA 1μg。方差分析结果显示,F值为0.835 7,小于F0.05(14,30)=1.68,表明在95%显著性水平时,样品的g DNA含量均匀;稳定性试验表明样品在-20℃下保存12个月,g DNA含量维持在1μg/支,0.8 g/d L的琼脂糖凝胶电泳的目标条带清晰,以inv A基因为引物的PCR反应产物电泳条带清晰,样品均具有较好的稳定性。