酶解鸢乌贼组织蛋白制备酸溶性肽的工艺优化

为有效利用鸢乌贼资源,对酶解鸢乌贼组织蛋白制备酸溶性肽的工艺进行了研究。比较了不同蛋白酶对鸢乌贼组织蛋白水解能力的差异,确定胰蛋白酶为水解鸢乌贼组织蛋白的最佳蛋白酶类型。先后采用单因素和响应面试验对酶解工艺条件进行了系统的研究及优化。确定了胰蛋白酶水解鸢乌贼组织蛋白的最佳工艺条件为:蛋白浓度3%,加酶量4210 U/g蛋白,pH9.23,酶解温度52.3 ℃,酶解时间5 h。在优化的工艺条件下,酸溶性肽的得率可以达到(74.02%±0.41%)。此外,氨基酸分析结果表明,经酶解得到的酸溶性肽基本保持了原鸢乌贼组织蛋白的氨基酸组成,8种必需氨基酸含量丰富,约占氨基酸总量的38%。试验结果表明,采用胰蛋白酶水解鸢乌贼制备酸溶性肽的工艺具有可行性。     

不同解冻方式对鸢乌贼胴体肌肉品质的影响

以鸢乌贼胴体肌肉为研究对象,研究高压静电场解冻（4℃、3.8 kV）、静水解冻、流水解冻、常温空气解冻4种解冻方式对鸢乌贼肌肉品质特性的影响。分析不同解冻方式对解冻速率、解冻损失率、蒸煮损失率、pH、色泽、水分质量分数、挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）、质构特性、菌落总数（total viable count,TVC）等指标变化对肌肉品质的影响。结果表明：通过高压静电场解冻的鸢乌贼肌肉品质优于其他3种,解冻速率2.89℃/min,亨特白度值24.21,水分质量分数67.44 g/hg,TVB-N值2.76 mg/hg,菌落总数的对数值2.740,解冻损失率及蒸煮损失率较低。此种方式可降低解冻过程中肌肉汁液流失、延缓肌肉pH下降引发的肌肉酸度上升、抑制微生物生长,但高压静电场解冻后的鸢乌贼水分质量分数较高,货架期较短。     

九孔鲍鱼纤维素酶的分离纯化与性质分析

采用SP-Sepharose阳离子葡聚糖凝胶交换柱层析、Sephacryl S-200丙烯葡聚糖凝胶柱层析和Hydrox-yapatite羟基磷灰石柱层析,从九孔鲍鱼(Haliotis diversicolor)消化腺中分离纯化到一种纤维素酶。SDS-PAGE结果显示,该酶的分子质量约为55kDa。该酶水解羧甲基纤维素钠的最适温度50℃,最适pH5.5。该酶在温度40℃以下,pH5.0～7.0之间具有较好的稳定性。     

槟榔果仁多酚氧化酶分离纯化及其酶特性研究

以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为29.2 ku。在此基础上,对提取的PPO进行酶学特性研究,结果表明,槟榔果仁中PPO最适温度为20℃,最适pH为7.0;以邻苯二酚为底物,该酶的最大反应速度(Vmax)为140.84 U/mL·min,Km为3.22 mmol/L。     

秘鲁鱿鱼TMAOase性质及其与甲醛生成相关性研究

为分析酶催化途径对秘鲁鱿鱼内源性甲醛产生的影响,研究了秘鲁鱿鱼不同组织中氧化三甲胺脱甲基酶(TMAOase)的活性及酶学性质,并通过体外重组实验分析冻藏过程中TMAOase活性与甲醛生成的相关性.结果显示,鱿鱼不同组织TMAOase活性均较低,而肝脏酶活相对较高.肝脏和肌肉TMAOase酶学性质相似,较佳反应温度40～50℃,表现为热不稳定性.TMAOase催化活性需要一个辅助因子系统,包括Fe2+、抗坏血酸(Asc)和半胱氨酸(Cys).鱿鱼肝脏-肌肉重组体和TMAOase-肌肉重组体在冻藏过程中甲醛和二甲胺(DMA)含量显著提高,而肌肉中DMA和甲醛含量无显著增加.电镜扫描结果显示,酶促生成的甲醛促进了重组体肌肉组织的交联,使肌肉网络组织结构更加致密.鱿鱼甲醛生成相关酶TMAOase主要集中在内脏组织中,肌肉中酶活性较低,因此酶学途径并非鱿鱼及制品中高含量甲醛的主要来源.     

苹果过氧化氢酶的纯化及性质研究

新鲜苹果经匀浆、抽提、硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose柱层析,获得纯化苹果过氧化氢酶(CAT)液。纯化CAT酶液蛋白含量26.8mg/mL,活力843Units/mL,比活力31.5Units/mg。经过温度和pH考察,酶的最适温度为50℃、最适pH值为5.0。金属离子影响为:Cu2 和Mn2 对该酶有不同程度的激活作用,Na 对该酶有一定程度的抑制作用。以过氧化氢为底物,Lineweaver-Burk双倒数作图法求得此酶的Km和Vmax分别为2.27mmol/L和2.5μmol/min。     

谷氨酸生产菌S_(9114)中依赖于NADPH谷氨酸脱氢酶的纯化及性质

利用DEAE 纤维素离交柱层析、疏水柱层析和凝胶过滤层析等从谷氨酸棒杆菌S9114 中分离纯化出依赖于NADPH的谷氨酸脱氢酶 (GOH NADPH )。经HPLC测定 ,该酶的分子量为 188ku ;经SDS -PAGE电泳测得该酶的亚基分子量为 3 2ku。提示该谷氨酸脱氢酶由 6个亚基组成。该酶对NADPH具有高度专一性 ,在pH 7 5、3 7℃下 ,以α 酮戊二酸、NH4Cl和NADPH为底物时的米氏常数Km 分别为 9 2 2mmol/L、5 2 7mmol/L和 2 3 1× 10 -3mmol/L。最适反应pH为 7 5 ,最适反应温度为 42℃ ,并对热比较稳定。此外 ,KCl对GDH NADPH的活性具有激活作用。     

干酪乳杆菌胞壁蛋白酶提取条件优化及其水解特性研究

干酪乳杆菌细胞壁蛋白酶是其蛋白水解系统中一个关键的蛋白酶.采用Ca2+-free法研究干酪乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取方法,确定其最佳实验条件.菌体用含有30 mmol/L CaCl2的50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.0)缓冲液洗涤3次,然后用含有50.03 mmol/LEDTA-Na2的50 mmol/LTris-HCl(pH6.98)缓冲液悬浮,39.75℃保温,60 min后取出离心(4 500 r/min、20 min、4℃),上清液即粗酶液.用粗酶液与纯化后的酶分别水解各种酪蛋白,粗酶较纯化后的酶能产生更高的ACE抑制能力,而纯化后的酶水解β-酪蛋白产生的抗ACE活性能力最强.     

胞外单宁酶纯化及酶学性质的研究

采用黑曲霉B0201固态生料发酵生产胞外单宁酶,经过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素层析、葡聚糖G-150凝胶柱层析纯化,得到电泳纯的单宁酶,纯化倍数达到18.44。对该酶的性质研究表明:单宁酶的相对分子质量大小约为58800,该酶的最适反应温度是40℃,最适反应pH值是5.0;以PG为底物,米氏常数Km为1.08mmol/L,Vmax为104.1μmol/(L.min)。     

烟叶铜锌超氧化物歧化酶的分离、纯化与性质

先用50mmol/LpH7.6磷酸盐缓冲液(PBS)提取,再经55%~60%(质量分数)硫酸铵盐析分级分离、冷冻乙醇—氯仿沉淀除杂和丙酮再沉淀分级由成熟的K326鲜烟叶得到含CuZn-SOD的粗酶液,粗酶液经DEAE-52柱层析(20mmol/LPBS平衡洗脱6h,流速0.25mL/min;600mL20mmol/LPBS和600mL100mmol/LPBS线性梯度洗脱,流速0.25mL/min)和DEAE-52离子交换柱层析(30~100mmol/LPBS线性梯度洗脱,流速0.25mL/min),成功将3种CuZn-SOD同工酶分开;再通过G-75凝胶柱层析(10mmol/LpH7.6PBS洗脱,流速0.3mL/min)和-20℃下冷冻干燥,得到CuZnSODI和CuZnSODIII纯品,经测定,CuZnSODⅠ由302个氨基酸残基组成,其相对分子质量为36682Da,最大吸收波长262nm,最适pH6.0左右,最适温度40℃;CuZnSODⅢ含187个氨基酸残基,相对分子质量为22976Da,最大吸收波长269nm,最大荧光激发波长和发射波长分别为280和338nm,最适pH5.0~6.0,最适温度30℃。     

GS0202菌产人参皂苷糖苷酶的酶性质研究

对Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌产人参皂苷糖苷酶进行分离纯化并对其性质进行了研究。结果表明,电泳纯人参皂苷糖苷酶的分子质量约为66ku,最适反应pH值为5.0,最适温度为40℃,在pH3.0～7.0,20～60℃酶活力相对稳定。K+、Na+、Zn2+对酶活性影响很小;Ca2+、Mg2+、Cu2+对酶活性有明显的抑制作用。Km值为4.392mmol/L,Vmax值为0.1275mmol/(h.L)。     

番石榴多酚氧化酶的部分纯化及其特性研究

番石榴PPO的粗提取液经过80%硫酸铵盐析和DEAE-Toyopearl 650M、CM-Sephadex C-50离子交换柱层析分离后,被纯化了约126倍,回收率为16.13%。该酶迅速地催化焦性没食子酸的酶促氧化反应,而对对苯二酚和绿原酸则完全无催化活性。该酶对焦性没食子酸的Km值为4.6 mmol/L,其最适pH为7.5,pH稳定性范围在pH4.0~11.0,最适温度为50℃,热稳定性相对较高,在≥90℃加热10 min后仍残留约15%的酶活性。该酶的最佳抑制剂是抗坏血酸和NaHSO3,其次是植酸、盐酸-L-半胱氨酸、柠檬酸,Ca2+、Mg2+等金属离子对该PPO也有较强的抑制作用。     

茶叶多酚氧化酶三相分离纯化及酶学性质研究

为研究一种快速高效的茶叶多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)制备方法,本试验采用三相分离法(three phase partitioning,TPP)获取茶叶PPO,并研究其酶学特性.结果表明,通过两次三相分离纯化后可获得酶比活力210.46 U/mg、纯化15.76倍、回收率8.04％的茶叶PP...     

荔枝壳中多酚氧化酶活性研究

本文对荔枝壳中多酚氧化酶(PPO)的活性及不同抑制剂的抑制效果进行研究。结果表明:荔枝壳多酚氧化酶的最佳底物浓度为0.04mol/L,最适pH为7.0,最适温度为40℃;柠檬酸、抗坏血酸、硫代硫酸钠对PPO活性表现出较好的抑制效果,三种抑制剂联合作用的最佳条件为0.01mmol/L的柠檬酸+0.04mmol/L的抗坏血酸+0.004mmol/L的硫代硫酸钠,PPO活性的抑制率达85.8%。     

韭菜过氧化物酶的分离纯化及性质

经匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的韭菜过氧化物酶(POD)。该酶比活力达到14031.41U/mg,纯化倍数为102.96,回收率为10.85%。该酶分子质量约为28.4kD,最适温度40℃、最适pH值为4.6。该酶在20～40℃以及pH 4.0～8.0有较好的稳定性,在最适条件下测得其Km值为18.15mmol/L。低浓度草酸、Zn2+、Mg2+等对该酶有较强激活作用;甲醇、乙醇、异丙醇、SDS、抗坏血酸(AsA)以及Mn2+、Fe3+等对该酶有较强的抑制作用。     

一株嗜酸乳杆菌突变株亚油酸异构酶的纯化及性质

亚油酸异构酶可以把亚油酸转化为共轭亚油酸。用硫酸铵沉淀、透析、凝胶过滤等步骤 ,从 1株嗜酸乳杆菌突变株中分离纯化了该酶。纯化倍数为 5 2 .0倍、比活力达 5 1 3 .0U/mg、活力回收 7.0 %。用SDS PAGE测得该酶亚基的分子量为 40 .7ku ;该酶的最适反应pH值为 4.0左右 ,最适反应温度为 3 0～ 40℃ ,在 pH 2 .0～ 7.0和 60℃以下较稳定。Fe2 + 、Mg2 + 、Zn2 + 、Na+ 能提高酶活性 ,Hg2 + 、Cu2 + 、Mn2 + 、Fe3+ 能抑制酶活性。以亚油酸为底物时该酶的动力学常数为 2 1 .6mmol/L。     

杨桃多酚氧化酶的部分纯化及其特性研究

杨桃多酚氧化酶粗酶液经过DEAE-Toyopearl650M离子交换柱层析,Butyl-Toyopearl650M疏水柱层析后,被纯化了21.6倍,回收率为45.2%。该酶能迅速地催化焦性没食子酸的酶促氧化反应,而对邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和绿原酸则完全无催化活性。该酶对焦性没食子酸的Km值为7.92mmol/L,其最适pH为8.0,pH稳定性范围在pH4.0-11.0,最适温度为60℃,热稳定性相对较高,在≥90℃加热30min后仍残留约9%的酶活性。该酶的最佳抑制剂是抗坏血酸,其次是NaHSO3和盐酸-L-半胱氨酸,Cu2+、Zn2+、Ca2+等金属离子对该酶也有一定的抑制作用。     

紫甘薯多酚氧化酶性质研究

采用含有30 mmol/L Vc的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液从紫甘薯中提取多酚氧化酶(PPO),用分光光度法对紫甘薯中多酚氧化酶的酶学特性进行了系统的研究,其中包括PPO的活力测定、热稳定性、pH稳定性以及pH、温度、抑制剂对PPO活力的影响。实验结果表明,多酚氧化酶催化反应的最佳条件为:温度25℃,pH 7.0,NaHSO3和Vc对酶活力有很强的抑制作用。     

金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质

采用三相分离法提取纯化金银花中过氧化物酶,结果表明最优纯化条件为pH?5.60、硫酸铵质量浓度39.49?g/100?mL、提取液与叔丁醇体积比1∶1.38,在该条件下纯化倍数为5.849,回收率为87.64%。金银花过氧化物酶比活力为1 021.6 U/mg,色素清除率为92%;酶学性质研究表明:金银花过氧化物酶最适温度为30℃,热稳定范围为10~40℃;最适pH值为5,pH值稳定范围为4~7。在金银花过氧化物酶催化的双底物酶促反应中,当H_2O_2浓度一定时,酶对愈创木酚的Km值为8.12?mmol/L,vmax值为1.71?mmol/(min·L)。当愈创木酚浓度一定时,H_2O_2的Km值为0.822?mmol/L,vmax值为1.38?mmol/(min·L)。金银花过氧化物酶与底物的亲和力由强到弱依次是邻苯三酚、邻苯二酚、联甲氧基苯胺、愈创木酚。Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)对金银花过氧化物酶有激活作用,Mg~(2+)、Mn~(2+)、柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、十二烷基磺酸钠对金银花过氧化物酶有不同程度的抑制作用。     

大豆脂肪氧合酶的提取纯化及其特性研究

本实验以大豆为原料,经硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶柱G200分离沉淀,得到2种脂肪氧合酶（L0x）：LOX．1,LOX．2。对这两种同工酶的部分特性进行研究。其中LOX-1的反应最适pH为7．0,在pH9．0时无活性。而LOX-2最适pH为9．0,在pH7．0时也表现出较强活性。最适温度均为25℃。两种同工酶的热稳定性结果表明,LOX．1和LOX．2在40℃活性稳定,加热温度高于50℃时,活性急剧下降。在亚油酸为底物的反应体系中,LOX．1和LOX．2的K。值分别为8．2、12．2mmol／L。并对Ca2＋、Na＋、Cu2＋、和Fe3＋等不同的金属离子表现出不同的反应活性。