微波法提取川木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯的研究

∶微波法提取川木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯,考察了微波功率、辐射时间、料液比对提取率的影响。最优工艺条件是微波辐射功率为400 W,辐射时间为3 min,料液比为1∶30(g/mL)。在此工艺条件下,提取率可以分别达到0.76%和2.31%。     

GC法同时测定五香丸中丁香酚、去氢木香内酯及木香烃内酯含量

目的：建立GC法同时测定五香丸中丁香酚、去氢木香内酯及木香烃内酯含量的方法。方法：气相色谱条件：HP-5毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm);检测器：FID;进样口温度：230℃;检测器温度：250℃;程序升温,初始温度80℃,25℃/min升温至180℃,保持3 min,20℃/min升温至200℃,保持8 min;流速：1.0 mL/min,氢气流量40 mL/min,空气流量400 mL/min;分流进样,进样量1μL,分流比10∶1。结果：丁香酚、去氢木香内酯及木香烃内酯线性范围分别为16.99～45.31μg/mL、7.43～19.81μg/mL、12.76～34.02μg/mL,平均回收率分别为102.07%(RSD=0.75%)、97.85%(RSD=0.61%)、97.67%(RSD=0.76%)。结论：本研究所建立的方法可靠易行,专属性强,可以有效对五香丸中丁香及木香进行定量控制。     

HPLC测定香砂六君丸中木香烃内酯的含量

目的:测定不同批次香砂六君丸中的木香烃内酯的含量。方法:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(65∶35);检测波长为225 nm;流速为1.0 mL/min;柱温:30℃,进样体积10μL。结果:木香烃内酯1.05～21.00μg/mL与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为101.08%,RSD=1.3%(n=6);5批次香砂六君丸中的木香烃内酯的含量为0.12%。     

木香及其水提药渣的UPLC指纹图谱和含量对比研究

目的:测定木香药材和水提药渣的UPLC指纹图谱和含量,建立木香水提药渣利用价值的评估方法。方法:采用UPLC法对木香药材和药渣样品进行测定,分析各特征峰的残存量,并比较其木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量差异。结果:不同干燥温度木香药渣中木香烃内酯和去氢木香烃内酯峰残存量均较高,表明木香药渣具有二次开发前景。结论:本研究可作为木香水提药渣有效成分的多指标评价模型,并通过优选最适保存温度,为木香药渣进一步利用提供研究基础。     

联氨基姜黄素对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨联氨基姜黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测联氨基姜黄素对MCF-7细胞的抗增殖效应,Hochest33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞的周期分布和凋亡情况,Western blot检测MCF-7细胞中Bcl-2、Bax、Cyclin D1和Survivin蛋白的表达变化。结果联氨基姜黄素可抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为2.56μmol/L,而姜黄素的IC50为21.22μmol/L;联氨基姜黄素染色24 h后,MCF-7细胞出现核荧光强度增强、颗粒状荧光等凋亡特征;凋亡细胞比率明显增加,并可阻滞细胞周期于G1期,且呈一定的剂量依赖性;联氨基姜黄素可使MCF-7细胞中Bcl-2、Cyclin D1、Survivin蛋白表达水平明显降低,而Bax表达增加。结论联氨基姜黄素具有抑制MCF-7细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期于G1期的作用,其机制可能与Bcl-2、Bax、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达改变有关。     

过表达BRIT1基因对鼻咽癌HNE-1细胞凋亡的影响及其机制

目的研究BRIT1(BRCT-repeat inhibitorof h TER expression)基因对鼻咽癌HNE-1细胞凋亡的影响,并初步探讨其相关的分子机制。方法利用免疫组织化学法检测30份鼻咽癌组织及30份鼻咽正常组织中BRIT1蛋白的表达;利用质粒pc DNA3.1(-)/BRIT1及pc DNA3.1转染HNE-1细胞,TUNEL法、Hoechst33342染色法及流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blot法检测转染细胞中BRIT1蛋白及caspase-3、active caspase-3、Bax、bcl-2蛋白的表达。结果 BRIT1在鼻咽癌组织中的BRIT1蛋白表达水平低于鼻咽正常组织(P0.05);转染质粒pc DNA3.1(-)/BRIT1的HNE-1细胞中,BRIT1蛋白水平明显上调(P0.05);过表达BRIT1明显促进HNE-1细胞的凋亡,并导致抗凋亡蛋白caspase-3、bcl-2表达下调(P0.05),促凋亡蛋白active caspase-3、Bax表达上调(P0.05)。结论BRIT1基因通过调控线粒体凋亡途径相关基因的表达,促进鼻咽癌细胞HNE-1凋亡的发生。     

青蒿素对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的探究青蒿素(artemisinin,ART)对乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法实验分为对照组(加入1μL/mL DMSO)和ART处理组(加入终浓度为300μmol/L的ART)。ART作用48 h后,采用平板克隆试验检测乳腺癌细胞与乳腺上皮细胞(MCF-10A)的克隆形成能力,免疫荧光染色法检测细胞增殖标记Ki-67蛋白的表达,流式细胞术分析3种细胞的凋亡变化,RT-qPCR检测乳腺癌细胞中DNMTs家族与抑癌基因FHIT、CDH1、PTEN等的表达变化,Western blot分析BAX、BCL-2、DNMT1和DNMT3A蛋白的表达水平,亚硫酸氢盐测序法分析FHIT和CDH1基因的甲基化水平。结果 ART显著抑制乳腺癌细胞的增殖,并诱导乳腺癌细胞的凋亡(P 0. 01),同时对正常人上皮细胞有明显的诱导凋亡作用(P 0. 01);ART抑制DNMT1的表达,促进DNMT3A的表达(P 0. 05);ART处理乳腺癌细胞后,抑癌基因FHIT和CDH1的甲基化水平降低,表达水平增加。结论 ART通过改变DNMT1和DNMT3A的表达,降低某些抑癌基因如FHIT、CDH1的甲基化水平,促进这些抑癌基因的表达,从而发挥抑制乳腺癌细胞增殖与诱导凋亡的作用。此外,ART用于乳腺癌治疗的安全性需进一步评估。     

藁本内酯对脂多糖诱导的肺上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的 探讨藁本内酯(ligustilide,LIG)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的肺上皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法 将人肺上皮细胞BEAS-2B分为对照组、LPS组和LPS+LIG组,分别加入空白溶剂或对应药物培养,采用CCK-8法检测LIG对LPS诱导的BEAS-2B细胞增殖的...     

丹皮酚对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其可能的机制

目的探讨丹皮酚对人卵巢癌SKOV3细胞的促凋亡作用及其可能的机制。方法用25、50、100、200、400μg/ml丹皮酚处理SKOV3细胞,设未经丹皮酚处理的细胞为对照组,24 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;用50、100、200μg/ml丹皮酚处理SKOV3细胞,设未经丹皮酚处理的细胞为对照组,24 h后,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、Hoechst染色法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测caspase3及survivin蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度丹皮酚对SKOV3细胞的增殖均有明显的抑制作用,呈浓度依赖性(P<0.05),IC50值为200.06μg/ml;100、200μg/ml浓度组中SKOV3细胞凋亡率分别为(35.33±1.32)%、(39.56±1.27)%,与对照组[(9.01±1.21)%]相比明显增加(P<0.05);丹皮酚100、200μg/ml浓度组中发生凋亡的细胞数量较对照组多;丹皮酚处理后细胞凋亡相关蛋白survivin表达降低,而caspase3表达增加,高浓度组与低浓度组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹皮酚能显著抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与其调控凋亡相关蛋白survivin、caspase3表达变化有关。     

NIRF蛋白对妊娠早期绒毛滋养细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的观察NIRF蛋白对妊娠早期绒毛滋养细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法取正常妊娠妇女人工流产绒毛组织(8~10周),按常规分离方法获得滋养细胞,进行原代培养。通过上/下调NIRF在滋养细胞中的表达后,采用qRT-PCR法检测p53基因mRNA的转录水平;Western blot法检测p53蛋白的表达水平;MTT法检测滋养细胞的增殖能力;Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况。结果与未转染组比较,NIRF上/下调后,p53基因m RNA转录水平差异无统计学意义(P0.05);NIRF上调,p53蛋白表达水平明显下降(P0.05),早期绒毛滋养细胞增殖能力显著增强(P0.05),凋亡率差异无统计学意义(P0.05);NIRF下调,p53蛋白的表达水平明显升高(P0.05),早期绒毛滋养细胞增殖能力明显减弱(P0.05),凋亡率明显上升(P0.05)。结论 NIRF在蛋白水平上抑制了p53的表达,促进了滋养细胞的增殖。     

RNA干扰CXCR7基因对人肝癌MHCC97H细胞生物学特性的影响

通过构建针对CXCR7的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰表达质粒,转染人肝癌细胞系MHCC97H,嘌呤霉素筛选建立低表达CXCR7基因的稳转株,分别采用qRT-PCR和Western Blot检测shRNA靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与流式细胞术研究CXCR7抑制对细胞增殖及凋亡的影响;通过划痕愈合实验研究CXCR7抑制对MHCC97H细胞迁移能力的影响。结果表明:成功构建了慢病毒表达载体pLKO.1-CXCR7shRNA,显著下调MHCC97H细胞中CXCR7mRNA及蛋白的表达。增殖实验显示,与阴性对照组相比,干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(p<0.001);干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡,尤以早期凋亡率上调为著;划痕实验显示抑制CXCR7表达延长细胞的伤痕愈合时间。     

白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。     

基于SPSS因子分析的α-烯烃磺酸盐中磺内酯影响因素的综合评价

以单因素实验为基础,结合因子分析法研究了不同因素对α-烯烃磺酸盐(AOS)中磺内酯的影响。结果表明:AOS产品中的磺内酯含量与时间、温度和pH存在负相关;漂白剂的增加会导致AOS产品中磺内酯含量的降低,且氧化性越强,磺内酯含量下降得越多;4个因素对AOS产品中磺内酯下降的影响权重大小为:漂白剂pH温度时间。     

体外连续传代培养对生物工程细胞CHO凋亡的影响

采用Annexin V-FITC/PI双染法检测磷脂酰丝氨酸外翻、JC-1染色法检测线粒体膜电位、底物切割法检测Caspase-3及Caspase-8酶活性等4个指标来评估连续传代培养的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的凋亡情况。结果表明,随着连续传代培养代次的增加,CHO细胞发生内部凋亡途径介导的凋亡,同时对凋亡诱导剂的反应更为敏感。因此,可以采用凋亡指标来监测细胞状态,从而提高基因工程蛋白的生产效率及化学品毒理学评价的准确性。     

水飞蓟宾与阿霉素联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨水飞蓟宾(silibinin)与阿霉素(doxorubicin)联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的水飞蓟宾、阿霉素单独或联合作用SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blot法检测细胞周期调控蛋白Cdk1、Cyclin B1和细胞凋亡调控蛋白pro-caspase 3、pro-caspase 8、pro-caspase 9、PARP、Fas、Fas L表达量的变化及Bcl-2/Bax的比例。结果 0.01μmol/L阿霉素联合水飞蓟宾(25、50、100、200μmol/L)作用SGC-7901细胞后,产生了明显的协同作用,联合作用指数(combined index,CI)分别为0.634、0.418、0.224、0.472,有效提高了细胞的抑制率,同时降低了Cdk1和Cyclin B1蛋白的表达量,引起细胞G2/M期阻滞;Fas和Fas L的表达量升高,pro-caspase 3/8/9的表达量降低,PARP被剪切,Bcl-2/Bax的比例降低,促使SGC-7901细胞凋亡。结论水飞蓟宾与阿霉素联合作用SGC-7901细胞后,水飞蓟宾能有效降低阿霉素的使用浓度,并提升其诱导凋亡的效果。     

外源紫杉醇作用下南方红豆杉细胞凋亡及其动力学研究

利用光学显微照相技术、细胞总DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL标记等手段 ,研究了外源紫杉醇(Taxol)作用下南方红豆杉细胞的凋亡及其动力学。研究结果表明 ,外源紫杉醇能显著提高南方红豆杉细胞凋亡的速率和发生率 ,表明高浓度紫杉醇不利于细胞的生长。凋亡动力学研究对指导大规模植物细胞培养生产紫杉醇具有重要意义     

和厚朴酚衍生物对肝癌细胞(HepG2)凋亡的影响

为探讨和厚朴酚衍生物对肝癌细胞的毒性,在合成了6个和厚朴酚衍生物的同时,并应用MTT分析和细胞流式分析等手段研究了活性较好的厚朴酚3#H对肝癌HepG2细胞凋亡的影响。采用倒置显微镜观察细胞的形态学的改变,用流式细胞分析技术测定亚二倍体峰等方法检测该药物对细胞凋亡影响,结果表明和厚朴酚3#H可明显诱导HepG2细胞凋亡。     

氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞的抑制作用及其机制

目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响。建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,观察氨氯地平对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织的病理改变;免疫组织化学方法检测肿瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达水平。结果氨氯地平作用48h可显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,且呈剂量依赖性,其半数抑制浓度为5.6×10-3mg/ml。体内试验显示,氨氯地平(3和10mg/kg·d)灌胃给药10d能显著抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长;HE染色可见,氨氯地平给药组小鼠肿瘤细胞核染色变浅,细胞排列紧密;免疫组化显示,氨氯地平给药组小鼠肿瘤组织内bcl-2蛋白表达下调,而bax蛋白表达上调。结论氨氯地平具有明显的抑瘤作用,其抑瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡相关。     

重组腺病毒介导的FOXO/MDA-7对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨重组腺病毒介导的FOXO/MDA-7对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制。方法将MDA-MB-231细胞分为Ad-FOXO/MDA-7组、Ad-FOXO组、Ad-MDA-7组和空白对照组,采用Real-time PCR、q RTPCR和Western blot法检测各组细胞中FOXO和MDA-7基因的转录及蛋白表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Transwell法检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测细胞中Ras、Raf、MEK和ERK蛋白的表达情况。结果与其他各组相比,转染Ad-FOXO/MDA-7后,MDA-MB-231细胞中FOXO和MDA-7的表达明显增强,细胞的增殖活力和侵袭能力明显被抑制(P0.05),凋亡率明显升高,细胞中Ras、Raf、MEK和ERK蛋白的表达也明显被抑制。结论重组腺病毒Ad-FOXO/MDA-7能明显促进乳腺癌细胞的凋亡,为乳腺癌的基因治疗提供了新的思路。     

热疗与化疗联合应用抑制肝癌细胞DNA损伤修复诱导细胞凋亡的机制研究

在肿瘤的综合治疗中,热疗作为一种非常重要的辅助手段,在临床上可与化疗发挥协同作用,提高癌症患者的生存率,但是,其中的机制尚未完全阐明。本研究在热疗促进caspase-8积累的基础上,结合化疗药物顺铂(CDDP),我们探索了热疗联合顺铂促进癌细胞死亡的分子机制。即最佳处理条件下联合应用诱导caspase-8的积累和激活,同时使caspase-3的激活增加,细胞活力下降,细胞凋亡增加。进一步探讨得出CUL3作为E3连接酶与caspase-8通过K63连接泛素化积累有关。另外,我们的结果表明,联合应用诱导HepG2细胞中DNA-PK的降解,抑制DNA-PKcs、Ku80活性,抑制DNA修复,提高CDDP化疗效果。