β-半乳糖苷酶产生菌的筛选和发酵条件优化

以X-gal为显色剂,从大连三寰乳制品厂区周围土壤中筛选到15株β-半乳糖苷酶产生菌,以ONPG为底物,测定该15株菌液体发酵后的β-半乳糖苷酶活力,复筛到1株β-半乳糖苷酶高产菌株MFY-03。对菌株MFY-03摇瓶发酵产β-半乳糖苷酶的工艺条件进行了优化,确定了发酵培养基的组成为:葡萄糖1.0%,乳糖1.0%,酵母粉0.5%,蛋白胨1.0%,吐温80 1.0%,pH 6.8,于45℃、200 r/min条件下培养24 h,β-半乳糖苷酶活力达到3.74 U/mL。     

β-半乳糖苷酶荧光探针的研究进展

β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶,在食品工业、基因工程、酶工程、蛋白质工程、生物医学等领域发挥着重要作用。β-半乳糖苷酶活性及含量的异常与癌症的发生发展密切相关,因此该酶检测对早期癌症诊断有着重要意义。传统酶活性检测方法具有一定的局限性,无法实现对β-半乳糖苷酶的原位无损检测。荧光探针因灵敏度高、选择性好、可用显微镜直接观察、分辨率高、响应时间短、操作方便、成本低等优点深受研究者青睐。在简述荧光探针设计原理的基础上,对近年来β-半乳糖苷酶荧光探针的设计合成研究进展进行了综述,阐述了β-半乳糖苷酶荧光探针在生物成像、早期癌症诊断等应用进展,为β-半乳糖苷酶高效检测技术的研究提供了帮助。     

荧光传导机理构建β-半乳糖苷酶探针的研究进展

?β-半乳糖苷酶（β-Gal）是细胞溶酶体中的一种糖苷水解酶，在催化糖苷键水解以及维持正常生命活动等领域起着至关重要的作用。开发能精确、快速检测?β-Gal活性的方法对于卵巢癌、细胞衰老引发疾病的早期诊断和分子生物学领域的研究是十分重要的。考虑到荧光探针具有检测灵敏、响应迅速和时空分辨率高等特性，该综述对近年来报道的?β-Gal荧光探针研究进展及其疾病诊断效果进行了总结，介绍了依据ICT、FRET、AIE和PET等信号传导机理构建?β-Gal荧光探针的分子设计策略及应用特点，并重点介绍了二维检测体系能够突破探针使用单一信号传导机理进行检测时常遇到的局限。综上，合理应用荧光信号传导机理构建具有灵敏性、空间分辨率高，化学稳定性好和细胞蓄积能力强等特点的β-Gal荧光探针，能够推进β-Gal荧光探针在卵巢癌诊断及治疗效果评价，细胞衰老程度评估和个体健康寿命预测等生物领域的高效应用。     

一种新的半乳糖苷酶检测底物的合成

设计合成了一种新的半乳糖苷酶(GALase)检测底物—2-氯-4-乙酰基苯基-β-D-半乳糖苷(CAP-GAL),产物结构经红外光谱、核磁共振谱及元素分析得到确证.合成方法如下:以2-氯-4-乙酰基苯酚和溴代乙酰半乳糖为原料,在丙酮-无水碳酸钾体系中进行缩合反应,得到固体粗品经重结晶后,在甲醇-甲醇钠体系中进行脱乙酰基反应即得目标化合物.     

采用压敏凝胶和变压循环增强传质──改善固定化酶促反应的新途径

引言聚合物凝胶是最常用的酶固定化材料．然而凝胶固定而曲折的孔结构又具有较大的传质阻力．底物、产物、营养物等在固定化材料中受到的阻滞使催化反应减慢，从而成为固定化酶促反应中最严重的问题．环境敏感性凝胶为克服固定化酶中的高传质阻力提供了新思路．这种凝胶可随pH值、温度、溶剂组成或电场等的微小变化而产生体积的显著改变，并已在生化分离，化学驱动器、药物控制释放及人工肌肉等领域显示了良好的实用前景．Hoffman等的研究又显示了温敏性凝胶在固定化酶和细胞上的潜在应用价值。以此为基础，并基于Lee等关于凝胶压敏性的新…     

复合多肽延缓小鼠皮肤衰老的功效研究

通过细胞增殖、抗氧化、抗炎以及促进胶原蛋白4个细胞实验研究了棕榈酰三肽-5,五肽-3,大豆多肽,类蛇毒肽和六肽-11 5种多肽的抗衰能力和复合后的效果提升作用,采用UVB联合D-半乳糖皮下注射造模方式研究了5种多肽复合后的皮肤抗衰老作用。结果表明,5种多肽具有一定的促细胞增殖、抗氧化、抗炎及促胶原蛋白合成能力,且5种多肽复合后具有显著的效果提升作用,复合多肽能够显著改善和缓解UVB联合D-半乳糖皮下注射引起的小鼠皮肤表皮增厚、胶原较少、弹性蛋白减少情况,并且能够显著抑制造模引起的IL-1,IL-6,TNF-α表达上调,抑制MMP3,MMP9,β-半乳糖苷酶的表达。以上结果表明5种多肽复合能够通过缓解UVB联合D-半乳糖皮下注射造模造成的表皮增厚、炎症、细胞外基质流失及衰老相关酶表达增加来发挥皮肤抗衰老作用。     

静电纺丝制备苯乙烯马来酸酐共聚物纳米纤维及其固定化β-D-半乳糖苷酶

采用静电纺丝技术制备苯乙烯-马来酸酐共聚物纳米纤维,最佳电纺条件为:聚合物浓度0.35g/mL、针尖到接收板距离25cm、电纺液流量250μL/h、电压21kV.该条件下获得了直径约300nm且分布均一的纳米纤维.利用该纳米纤维固定β-D-半乳糖苷酶,固定化反应的最适pH值为4.0,此时酶负载量为(15.1±0.5)mg/g.固定化酶催化2-硝基苯酚-β-D-半乳吡喃糖苷水解反应的米氏常数K_m=2.7mmol/L,略大于游离酶的K_m值(2.2mmol/L);最大反应速率V_(max)为97.2μmol/(min·mg),为游离酶的47.8%.固定化酶在37℃下重复操作21次后活性损失仅为15%.在连续搅拌式反应器中将固定化酶用于催化乳糖的水解反应,连续使用17d仍能稳定运行.     

正相高效液相色谱法同时测定奶粉中维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E醋酸酯及α-生育酚

使用正相液相色谱紫外、荧光双检测器系统,建立了奶粉中维生素A、维生素E类4种化合物的分析方法.采用SI60色谱柱(15 cm×3.0mm,3 μm),以1％二氯甲烷和0.06％异丙醇的异辛烷溶液为流动相,DAD检测波长:313mm(维生素A),280 nm(维生素E醋酸酯),FLD检测波长:Ex 295 nm,Em 330 nm(α-生育酚),外标法定量.结果表明各组分线性关系良好,方法精密度较高,相对标准偏差在2.0 ％～5.6％之间,样品回收率在90.4 ％～107％之间.与GB 5413.9-2010相比,该法简单、快速、准确,适用于奶粉中维生素A和维生素E异构体的定量分析.     

氯甲基化-SnCl2/HCl法转化天然维生素E工艺研究

利用丙酮作溶剂,使氯甲基化-SnCl2／HCl还原工艺转化天然维生素E的SnCl2消耗降低了50％、35％盐酸消耗降低了60％,α-VE提纯更容易。通过实验得出溶剂较佳用量是50％VE油(g)：丙酮体积(mL)=1：4、SnCl2较佳用量是50％VE油(g)：SnCl2(g)=3．5：1。     

B→O血型转换批量制备通用型红细胞的研究

目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品。方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200ml)的B型红细胞进行预处理。在专门设计的转型密闭处理系统中,用α半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能。结果酶解前用pH4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH2.8缓冲液处理组;经α半乳糖苷酶(100Uml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围。结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺。通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格。     

-木糖苷酶的分离纯化、酶学性质及水解机理研究

通过硫酸铵沉淀、超滤脱盐、离子交换层析、凝胶过滤层析等手段,从里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30木聚糖酶粗酶液中分离纯化得到分子质量110.8 ku、比活力为61.99 IU/mg的电泳纯β-木糖苷酶。酶学性质研究结果表明:该酶反应以温度60 ℃、pH值3.5为宜,在60 ℃以下、pH值3.0～8.0酶活性稳定,且该酶作用于对硝基苯基-β-D-木糖苷的K_m值和V_max值分别为0.29 μmol/mL和169.99 IU/mg。酶水解机理研究结果表明,该酶从低聚木糖的非还原性末端切断β-1,4-糖苷键释放出木糖,其最适作用底物是短链的低聚木糖,随着低聚木糖碳链的增长,酶作用效率逐渐下降,而对木聚糖几乎不降解。