缺铁乳铁蛋白体外抗HBsAg分泌的研究

研究缺铁乳铁蛋白体外抑制HBsAg作用,为乳铁蛋白应用于临床治疗乙肝病毒感染提供理论和实验依据。以天然HBV感染HepG2细胞为模型,通过应用ELISA法测定细胞上清中的HBsAg水平来检测缺铁乳铁蛋白抗HBsAg分泌效果,并用MTT法进行缺铁乳铁蛋白对HepG2细胞毒性研究。结果表明,缺铁乳铁蛋白对细胞的半数中毒剂量（TD50）L为8.312g／L,最大无毒剂量（TD0）为1．5g／L;用乙肝病毒对HepG2细胞进行感染,分别加入不同浓度的缺铁乳铁蛋白,24,36,48h测定HBsAg水平,各实验组蛋白对HBsAg分泌几乎没有抑制作用。当HepG2细胞感染乙肝病毒后,缺铁乳铁蛋白不能抑制HBsAg分泌,乳铁蛋白GHBsAg分泌与其铁饱和度有关,但其机理有待进一步深入研究。     

乳铁蛋白体外和体内铁结合能力的研究

采用超滤-离子交换色谱法制备的乳铁蛋白的铁结合能力为87.7%,铁饱和度为15.1%。当pH值为7.5,NaHCO3浓度为100mmol/L时,铁结合能力最强。采用低强度的巴氏杀菌可以保持乳铁蛋白的铁结合性能。SD大鼠的动物试验表明,50μg/g·d和250μg/g·d的乳铁蛋白剂量具有显著的升高血红蛋白浓度的作用。乳铁蛋白改善缺铁性贫血的最小有效作用剂量为50μg/g·d。     

乳铁蛋白铁吸收效果的研究

对乳铁蛋白和硫酸亚铁中铁的吸收进行了研究。结果表明,乳铁蛋白比硫酸亚铁更容易吸收。     

乳铁蛋白体外抗氧化性的研究

目的:研究乳铁蛋白的抗氧化活性。方法:利用分光光度法测定乳铁蛋白的脂质过氧化抑制率、羟自由基(.OH)清除率和DPPH自由基清除率。结果:乳铁蛋白对各种自由基的作用能力由大到小为:脂质过氧化抑制率>.OH清除率>DPPH自由基清除率。结论:乳铁蛋白对上述3种自由基有明显的清除作用,初步判断是由于乳铁蛋白结合上述反应所需铁离子从而起到抑制作用。     

乳铁蛋白铁饱和度检测方法的对比

乳铁蛋白铁饱和度与其的生物活性有密切关系,对比了目前常用的三种乳铁蛋白铁饱和度的检测方法的差异,旨在为其他研究者选择乳铁蛋白检测方法提供一定参考。结果显示方法一(原子吸收法)虽然精准度高,但得到的结果偏低,同时方法一和方法三均假设了乳铁蛋白处于理想状态下,可能与测试样品实际情况不符,综合考虑实验原理及测试精准度,方法二为最佳方法。     

乳铁蛋白及乳铁素对嗜酸乳杆菌生长影响的研究

本实验主要针对乳铁蛋白和乳铁素对嗜酸乳杆菌的生长影响进行研究。结果表明,在37℃恒温培养下,添加一定浓度的乳铁蛋白或乳铁素,可促进嗜酸乳杆菌生长繁殖。乳铁蛋白的最适添加浓度为2.5mg/ml,乳铁素的最适添加浓度为0.15mg/ml,培养26h后活菌数分别达到6.7×108CFU/ml和8.0×108CFU/ml。     

乳铁蛋白的国内外研究动态及趋势

乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,具有多种生物学功能,近年来成为国内外研究的热点。本文综述了乳铁蛋白的近期研究热点:活性乳铁蛋白的开发应用,高效表达人乳铁蛋白的转基因技术进展,工业化生产途径的最新研究以及乳铁蛋白的开发应用前景。     

铁饱和度对乳铁蛋白缓解溃疡性结肠炎作用的影响

目的:评价不同铁饱和度的乳铁蛋白对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的作用。方法:动物试验全程21 d,雄性BALB/c小鼠随机分成4组,即:正常组、模型组、低铁乳铁蛋白(Apo-LF)组和高铁乳铁蛋白(Holo-LF)组。14~21 d时,模型组、Apo-LF组和Holo-LF组小鼠饮用含2.5%DSS的饮用水7 d,诱导小鼠形成溃疡性结肠炎模型。在第21天时处死小鼠。通过炎症相关指标评价各组小鼠的反应,结果:Apo-LF组与模型组和Holo-LF相比,疾病活动指数(DAI)、结肠缩短量、组织病理学评分显著降低。结肠组织中促炎因子表达量、肠道中脂多糖(LPS)浓度、革兰氏阴性菌菌落数显著降低。而Holo-LF组与模型组相比各项指标均无显著性差异。结论:不同铁饱和度的乳铁蛋白对DSS诱导的溃疡性结肠炎的治疗效果不同。Apo-LF能显著缓解溃疡性结肠炎症状,而Holo-LF无明显效果。这与不同铁饱和度的LF对促症因子,LPS,革兰氏阴性菌的影响不同有关。     

乳铁蛋白热稳定性研究

研究了乳铁蛋白的热稳定性。对乳铁蛋白中性水溶液进行不同程度的热处理,从电泳、表面疏水性、游离巯基质量分数、铁结合能力和抑菌性角度评价乳铁蛋白的热稳定性。结果表明,随热处理强度增加,乳铁蛋白的电泳特征条带减弱;表面疏水性增加;游离巯基增加;铁结合能力和抑菌性降低。乳铁蛋白属于热敏性物质,过强的热处理对乳铁蛋白具有不同程度的损害。     

脱铁乳铁蛋白铬络合物制备方法的研究

以乳铁蛋白(lactoferrin,LF)和六水三氯化铬为主要原料制备脱铁乳铁蛋白铬,确定脱铁乳铁蛋白与Cr3+ 络合的条件,并对络合物采用红外吸收光谱进行表征。结果表明：乳铁蛋白经醋酸调pH 值到2.25 或经柠檬酸调pH 值到2.50 后,均能使Fe3+ 游离出来;脱铁乳铁蛋白与Cr3+ 络合的条件为：温度60～70℃,pH7.0～7.6,脱铁乳铁蛋白与六水三氯化铬物质的量的浓度比1:2,搅拌时间2h 以上。     

牛乳中乳铁蛋白的分离纯化研究

牛乳经酸沉淀除酪蛋白后,通过超滤、离子交换法分离纯化得到乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝、SDS-PAGE电泳定性定量检测。结果表明:每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.22mg,纯度为95%。     

Effect of bovine lactoferrin and human lactoferrin on the proliferative activity of the osteoblast cell line MC3T3-E1 in vitro

We conducted a comparative in vitro study on the proliferative effects of natural human lactoferrin (nhLF) and bovine lactoferrin (bLF) on osteoblasts. We investigated cell proliferation, cell survival, cell cycle, and mRNA and protein expression of proliferating cell nuclear antigen. Results indicated that treatment with 100 μg/mL of bLF or nhLF promoted the proliferation and sustenance of osteoblasts, and increased the length of the G₂/M and S phases compared with the untreated osteoblasts. Results of real-time quantitative PCR and Western blot showed that mRNA and protein expression of proliferating cell nuclear antigen by osteoblasts treated with bLF or nhLF were greater than those of the untreated control. At the same concentration, bLF demonstrated a greater effect on osteoblast proliferation than did nhLF. This study provides insights of significance in the utlization of bLF in healthy food formulas.     

Screening of Bifidobacterium spp. based on in vitro growth responses to bovine lactoferrin

In the present study, we investigated the in vitro growth responses of fourteen strains of four Bifidobacterium spp. (Bifidobacterium infantis, B. breve, B. bifidum, B. longum) against bovine lactoferrin (bLf) at various concentrations. Bacterial strains were grown in deMan, Rogosa and Sharpe (MRS) broth with or without bLf, and growth was monitored by measuring absorbance at 660 nm. A dose‐dependent and strain‐dependent growth response was observed. Bifidobacterium spp. were ranked into high, medium and low according to their calculated relative growth response levels against lactoferrin (Lf). Strains showed better growth responses against holo‐type Lf. However, no inhibitory effects at high concentrations (4 mg mL^?1) or with apo‐type Lf were observed. These results strongly suggest that the growth response of Bifidobacterium spp. against bLf may be a selection criterion for their use in fermented products. In addition, use of holo‐type Lf in fermented food products may be more effective for probiotic growth, and could also be used as a source of iron to the host.     

Enhancement of hepatitis B surface antigen production by adenosine 5'-monophosphate in culture of recombinant Chinese hamster ovary cells

Adenosine 5'-monophosphate was found effective in enhancing hepatitis B surface antigen (HBsAg) production in the culture of recombinant Chinese hamster ovary (CHO) cells, but it markedly inhibited cell growth. A culture strategy with periodical medium changes was established to increase HBsAg production and avoid the AMP-induced inhibition of cell growth. The enhanced energy supply might be one of the reasons for the increase in HBsAg production in the presence of AMP.     

体外模拟消化对四种杂粮中酚类物质及其降脂活性的影响

杂粮中富含具有生理活性的多酚类化合物。本实验研究了4种常见杂粮(薏米、荞麦、青稞、红豆)在体外模拟消化过程中酚类物质的变化以及其降脂活性。结果表明,经模拟体外消化后荞麦具有最高的总酚含量(27.78±0.14)mg GAE/100 g及黄酮增长率57.9%。并利用油酸诱导HepG2细胞建立高脂模型,测定以2.5 mg/mL为上样浓度的4种杂粮多酚提取物干预前后细胞内TG及LDL-c含量的变化。结果表明荞麦多酚表现出了最佳的生物利用度及降脂活性,其干预组与模型组相比甘油三酯浓度下降了1/3,达到(0.156±0.032) mmol/g prot,低密度脂蛋白降至(0.025±0.005) mmol/g prot,表现出最佳的降脂活性,为进一步研究其作用机理以及降脂相关的功能食品及保健品的开发提供参考。     

Simultaneous expression of the S and L surface antigens of hepatitis B, and formation of mixed particles in the methylotrophic yeast, Hansenula polymorpha

An expression system has been developed for the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha and used to co-express both the L (preS1-S2-S) and S hepatitis B surface antigens (HBsAg) under the control of strong methanol-inducible promoters derived from the methanol oxidase and from the formate dehydrogenase genes. A unique feature of this H. polymorpha expression system is the possibility of integrating up to 100 copies of an expression cassette via a multimeric integration mechanism. Several multimeric integrants containing various numbers of L and S expression cassettes were constructed to give a spectrum of strains characterized by different L to S ratios. The expression level of S antigen was 5-8% of the total soluble cell protein. Analysis by sucrose and CsCl density gradient centrifugation and by particle-specific immunoassays demonstrated that the synthesized HBsAg spontaneously assembled into composite subviral particles containing both S and L proteins. Only a minor portion of the L protein was found to be glycosylated. These H polymorpha-derived composite particles can be used for the production of a hepatitis B virus vaccine with the potential for improved immunogenicity due to the presence of a wider spectrum of epitopes and negligible glycosylation.     

琐琐葡萄总黄酮在体外对乙型肝炎病毒的影响

目的：考察琐琐葡萄总黄酮体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的效果。方法：用HBV DNA转染人肝癌细胞所得的HepG 2.2.15细胞株为模型,ELISA法测定用药后8d细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg含量,计算琐琐葡萄总黄酮对HBsAg和HBeAg分泌的抑制率,荧光定量PCR法测定HBV DNA的变化,MTT比色法检测细胞毒性。结果：琐琐葡萄总黄酮在12.5～100μg/mL范围内,均能不同程度地减少细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的含量,且细胞毒性小,半数中毒剂量(TC50)为284.91μg/mL,对HBsAg半数有效剂量(IC50)为327.56μg/mL、对HBeAg为215.34μg/mL,对HBsAg治疗指数(TI)为0.87、对HBeAg治疗指数为1.32;总黄酮质量浓度100μg/mL时对HBV DNA的抑制率为47.63%。结论：琐琐葡萄总黄酮具有一定的体外抗HBV作用。     

小黑药亲电成分干预混合游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG2脂肪变性研究

采用GSH功能化磁珠靶向敲出小黑药亲电成分并用LC-MS表征,基于游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,评价小黑药亲电成分降低肝细胞脂质累积和氧化应激的作用和机制。结果表明:小黑药亲电成分主要集中在乙酸乙酯部位;在0.5~2.0mg/mL浓度下,小黑药石油醚部位、乙酸乙酯部位、水部位均具有降低脂肪变性细胞脂质累积和ROS生成的活性,其中乙酸乙酯部位在各浓度下效果最好;乙酸乙酯部位在各浓度下具有降低细胞内TG、TC水平和提高细胞内抗氧化酶活性的作用;经过GSH功能化磁珠靶向敲出亲电化合物后,乙酸乙酯部位在2.0μg/mL浓度下对细胞内TG水平的降低和细胞内抗氧化酶水平的提高效果显著减弱。乙酸乙酯部位萃取物上调Nrf2及下游NQO1、HO-1、GCLC基因,下调脂质合成基因SREBP1c、ACC1、FAS的表达,促进脂质分解基因PPARα、CPT1A的表达;而靶向敲出亲电成分后,乙酸乙酯部位萃取物调控脂代谢和抗氧化相关基因的作用明显下降。LC-MS表征亲电成分敲出前后乙酸乙酯部位样品,发现了7个变化的主要质谱峰,推测其为主要的亲电化合物。小黑药中亲电化合物可以改善脂肪酸诱导的脂肪变性,其机制主要与抗氧化和脂代谢相关基因的调节有关。     

棉籽蛋白ACE抑制肽的酶法制备及其体外稳定性研究

食源性血管紧张素转化酶(angiotensin-I-converting enzyme, ACE)抑制肽因安全、无副作用、易吸收等优点,对防治高血压、提高居民健康水平具有重要作用。利用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解棉籽蛋白制备ACE抑制肽,通过单因素实验优化水解条件,分离纯化水解物并鉴定其活性肽段组成,评价水解物的体外消化吸收稳定性。结果表明,棉籽蛋白经复合蛋白酶(1500U/g)在pH值为8.0和55℃下水解5h,蛋白回收率为39.8%,ACE抑制率可达93.7%。棉籽蛋白复合蛋白酶水解物经分离得到5个组分,其中组分4(F4)的ACE抑制活性最高(IC₅₀=220.1μg/mL)。从该组分中发现3条新型ACE抑制肽:VFNNNPQE、LLSQTPRY和VFPGCPET,其中LLSQTPRY的活性最高(IC₅₀=105.2μmol/L)。经人工胃肠液消化和Caco-2细胞单层膜吸收后,棉籽蛋白复合蛋白酶水解物仍具有一定ACE抑制活性,分别为53.8%和20.5%。研究结果表明,棉籽蛋白的复合蛋白酶水解物有望作为一种功能性食品配料,用于开发降压食品。