烟草NtHCT基因对次生代谢物质绿原酸和类黄酮合成的影响

为验证NtHCT是否参与烟草类黄酮的合成,构建pCXSN::NtHCT超量表达载体,利用农杆菌转化法将NtHCT基因转入野生型烟草三生烟,通过HPLC (High Performance Liquid Chromatography高效液相色谱)检测转基因烟草中绿原酸和类黄酮物质的含量变化。结果表明,转基因烟草叶片中绿原酸的含量最高比野生型对照提高了6.3倍,类黄酮成份芦丁和山奈酚芸香苷分别提高了41.6和13.6倍,而生长表型未见明显差异。从而证明NtHCT基因不仅参与调控绿原酸的合成,也正向调控了类黄酮的合成。      

烟草HQT基因超量表达对次生代谢物质一咖啡酰奎尼酸和黄酮醇合成的影响

  背景和目的  一咖啡酰奎尼酸（CQAs）和黄酮醇是植物重要的苯丙烷类次生代谢物质,对人体健康有益,然而在烟叶中含量甚微。  方法  NtHQT是烟草中调控一咖啡酰奎尼酸合成最后一步的一种酰基转移酶,为验证NtHQT是否参与黄酮醇的合成,本研究构建了pCXSN::NtHQT超量表达载体,转化野生烟草三生烟。  结果  转基因烟叶中一咖啡酰奎尼酸的含量最高可提高10.34倍,芦丁和山奈酚芸香糖苷含量最高可分别提高17.83和16.97倍,而生长表型与野生型烟草没有明显差异。  结论  NtHQT基因在不影响烟草的生长发育的前提下,不仅参与调控一咖啡酰奎尼酸的合成,也具有正向调控黄酮醇的生物合成的功能,提高烟叶中芦丁和山奈酚芸香糖苷含量。      

烟草中异源表达番茄HQT基因对多酚物质合成的影响

羟基肉桂酰辅酶A：奎尼酸羟基肉桂酰转移酶（Hydroxycinnamoyl-CoA：quinate hydroxycinnamoyl transferase,HQT）是催化茄科植物咖啡酰奎尼酸生物合成最后一步的关键酶。为培育富含多酚物质的烟草,提高烟草品质,通过克隆番茄HQT基因,构建P35S：：SlHQT超量表达载体,在野生型三生烟草（SS）中异源表达,利用高效液相色谱技术（HPLC）及液质联用（LC-MS/MS）技术对转基因烟草叶片中一咖啡酰奎尼酸及黄酮醇含量进行检测,探究SlHQT基因对三生烟草一咖啡酰奎尼酸及黄酮醇物质合成的影响。结果显示,转SlHQT烟草叶片中一咖啡酰奎尼酸总含量最高可提高14.98倍,芦丁和山奈酚芸香糖苷含量最高可分别提高11.47和9.32倍,且生长表型与野生型烟草没有明显差异;转SlHQT基因烟草叶片中有4种（1-CQA,3-CQA,4-CQA,5-CQA）一咖啡酰奎尼酸,野生型烟草叶片中只检测到3种（3-CQA,4-CQA,5-CQA）。SlHQT基因在烟草中的异源表达促进了1-CQA的生物合成且提高了一咖啡酰奎尼酸总含量,同时增加了黄酮醇的生物合成。     

烟叶多酚含量的品种间差异及其与感官质量的关系

为考察南平烟区翠碧一号、云烟87和K326三个品种间烟叶多酚含量的差异及其与感官质量的关系,采集了邵武、光泽、蒲城、建阳和武夷山等5个县（市、区）初烤C3F和B2F等级烟叶样品,测定了新绿原酸、4-O-咖啡奎尼酸、绿原酸、莨菪亭、芸香苷和山奈酚葡萄糖苷等6种物质含量,分析其在品种间的差异及对感官质量的影响。结果表明,绿原酸和芸香苷是烟叶中两种最主要的多酚化合物,莨菪亭含量最低。翠碧一号的新绿原酸、4-O-咖啡奎尼酸、绿原酸、山奈酚葡萄糖苷及多酚总量的含量高于K326和云烟87。C3F等级烟叶中新绿原酸、4-O-咖啡奎尼酸、绿原酸和多酚总量高于B2F。随着烟草中新绿原酸和绿原酸含量的增加,烟气的香气质、杂气、余味、回甜感等指标趋好。香气量和杂气是影响透发性的两个主要因素,且香气量居于主导地位。     

转OjDREB基因提高烟草耐盐能力的研究

利用农杆菌介导法将沿阶草OjDREB基因转入烟草植株中.通过RT-PCR检测,获得转OjDREB基因的烟草植株.以400 mmol/L NaC1处理转基因烟草植株和野生型对照10 d后,结果显示:转基因烟草体内叶绿素含量和SOD酶活性是野生型对照的16.98倍和1.91倍;体内的MDA含量和电解质渗透率分别是野生型对照的59.23％和55.07％,说明过量表达OjDREB基因可以提高烟草的耐盐能力.     

干旱胁迫对转BnDREB1-5烟草碳氮代谢和渗透调节物质的影响

在干旱胁迫后检测了转BnDREB1-5基因烟草碳氮代谢指标和渗透调节物质的变化。结果表明,干旱胁迫后转基因烟草碳代谢指标淀粉酶活性、转化酶活性和可溶性糖含量都明显升高,野生型烟草淀粉酶活性和可溶性糖含量稍微升高,转化酶活性反而降低;转基因烟草氮代谢指标硝酸还原酶活性、可溶性蛋白质含量稍微下降,而野生型烟草两者都明显降低;转基因烟叶中有BADH活性,干旱胁迫后BADH活性升高,而野生型烟草中检测不到BADH活性;干旱胁迫后转基因烟叶中脯氨酸含量是野生型的1.08倍。因此,干旱胁迫后转基因烟草碳氮代谢、防御酶活性等方面明显优于野生型。     

甜叶菊花和叶中酚类成分分析及含量测定

以高效液相色谱-串联四极杆质谱分析仪,结合质谱分析及比对对照品或文献报道化合物的保留时间和质谱参数,在甜叶菊花和叶中鉴定了16种酚类化合物。建立一种利用高效液相色谱法测定甜叶菊中16种酚类化合物含量的方法,并对甜叶菊一新品种盛花期花和叶中酚类的含量进行测定。结果表明,甜叶菊花和叶中酚酸化合物以新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C为主,异绿原酸A含量最高,绿原酸含量次之;花和叶中类黄酮化合物主要为芦丁、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-芸香糖苷、槲皮素-3-O-木糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-阿拉伯糖苷、山奈酚-3-O-鼠李糖苷,槲皮素-3-O-鼠李糖苷含量最高;盛花期甜叶菊花和叶中酚类总量达（22.31±0.51）mg/g和（91.11±2.32）mg/g。     

采收成熟度对烤烟多酚含量和组成的影响

分析了不同采收成熟度鲜烟叶和初烤烟叶的多酚类物质含量及其组成,结果显示:①中部烟叶以生理成熟的多酚含量最高,上部鲜烟叶多酚含量随采收成熟度增加而逐渐增加,上部初烤烟叶以工艺成熟的多酚含量最高;②欠熟鲜烟叶多酚中芸香苷含量最高,其他处理鲜烟叶和所有初烤烟叶多酚类物质组成为:绿原酸＞芸香苷＞4-O-咖啡奎尼酸＞新绿原酸＞山奈酚糖苷＞莨菪亭;③中、上部初烤烟叶多酚中绿原酸比例随采收成熟度的提高而增加,达到过熟时略有降低,而新绿原酸和4-O-咖啡奎尼酸比例与其相反,其他多酚类物质所占比例不同处理间差异不明显;④烤后烟叶多酚类物质含量均明显高于鲜烟叶,随着采收成熟度的提高,烤后烟叶多酚含量的增幅逐渐减小,初烤烟叶绿原酸类物质占多酚总量比例均高于其鲜烟叶,而芸香苷和山奈酚糖苷比例均明显低于其鲜烟叶.     

吉林晒烟多酚类物质及其相关酶活性的变化动态

选取吉林当地3个主栽晒烟品种研究了不同晒烟品种叶片发育过程中多酚类物质及其相关酶活性的动态变化以及两者之间的关系。结果表明,不同晒烟品种中总酚含量表现为青黄叶＞大叶黄＞大白花,总酚在整个生育期的含量为0.16%~1.2%。不同晒烟品种中总酚含量随着叶龄的增加而提高,在成熟期稍有降低;青黄叶和大叶黄中绿原酸、芸香苷和莨菪亭在叶片发育过程中整体上表现出上升趋势,而大白花中绿原酸、芸香苷和莨菪亭含量呈单峰曲线。各品种中苯丙氨酸解氨酶活性与绿原酸和芸香苷的变化规律相同,多酚氧化酶活性和过氧化物酶活性呈单峰趋势。在烟叶生长过程中,各晒烟品种中苯丙氨酸解氨酶活性与绿原酸、芸香苷、莨菪亭和总酚的变化呈正相关,且与绿原酸和芸香苷达到显著水平;多酚氧化酶活性变化与绿原酸、芸香苷、莨菪葶和总酚的相关性表现为负相关,但未达到显著水平;过氧化物酶活性与绿原酸、芸香苷、莨菪葶和总酚呈正相关,且与总酚达显著水平。由此可见,苯丙氨酸解氨酶和过氧化物酶与多酚类物质之间有显著的相关性,可以通过调节这两种酶的活性来控制多酚的含量,从而改善烟叶质量。     

烟草重要基因篇:14.烟草类黄酮合成相关基因

类黄酮是烟草中普遍存在的多酚化合物,是烟草重要的致香前体物质,其合成代谢是烟草香气物质形成的重要途径。对近年来烟草类黄酮合成相关基因的研究进展进行了综述,并展望了其在烟草中调控重要基因表达和提高烟叶品质中的应用潜力。     

枸杞晒干过程中黄酮类化合物和苯丙氨酸解氨酶活性的变化

本实验在枸杞表面涂抹Na2CO3、Na2SO3溶液作为除蜡剂,以不涂抹除蜡剂为空白对照,研究晒干过程中总黄酮和苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonialyase,PAL）活性的变化,并利用高效液相色谱（highperformance liquid chromatography,HPLC）法检测枸杞中山奈酚、芦丁和槲皮素含量的变化。对总黄酮含量和PAL活性、3 种不同处理方式条件下3 种黄酮类化合物含量之间进行相关性分析。结果表明：Na2CO3、Na2SO3和空白对照处理下的枸杞在晒干过程中PAL活性、总黄酮含量呈现持续上升的趋势,山奈酚、芦丁和槲皮素含量均呈现先增加后下降趋势;同一处理下的PAL活性和总黄酮含量变化呈显著极强正相关,山奈酚、芦丁和槲皮素含量变化呈正相关;除蜡剂影响同一干燥时间下PAL活性、总黄酮、山奈酚、芦丁和槲皮素含量的大小,并且其达到最高值的时间也受除蜡剂的影响。     

红甜菜根中类黄酮类差异代谢物的比较分析

该研究以一品红和俄罗斯红甜菜块根为原料,使用UPLC-MS/MS检测平台和Metware自建数据库对两种红甜菜块根中的类黄酮物质进行检测和分析其代谢物质的成分及差异。利用多元统计分析方法,根据检测到的类黄酮类代谢物的数据来筛选差异代谢物;随后再利用KEGG网站分析差异代谢物参与的合成途径。结果表明,两种甜菜块根共检测出类黄酮代谢物69个,分成黄酮、黄酮醇、查尔酮、二氢黄酮、橙酮类和其他类黄酮六种类型。差异代谢物29种,一品红中12种差异代谢物含量高于俄罗斯红,17种低于俄罗斯红。根据代谢物log2FC判定差异倍数较大的成分主要是五羟基查耳酮类、异鼠李素、二甲氧基黄酮、蒽酮、多甲氧基黄酮、槲皮素、山柰酚、香叶木素、高车前素类衍生物。被注释到KEGG 通路上的代谢物有7个：依次是3-O-甲基槲皮素、木犀草甙、3''-O-甲基木犀草素、芦丁、异槲皮苷、异牡荆素、三叶豆甙。由此表明,两种甜菜物质中存在具有显著差异的类黄酮类代谢物,建议可作为特征代谢物做进一步分析。     

蜂蜜黄酮类化合物检测方法建立及其在云南5种特色蜂蜜中的分布

建立蜂蜜中芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇4种黄酮化合物含量的固相萃取-高效液相色谱检测方法。蜂蜜样品用pH2的盐酸溶液溶解、离心后,用Oasis HLB固相萃取柱吸附与净化,4种黄酮经VP-ODS色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)分离,紫外检测器检测,检测波长270nm。流动相为甲醇-水(pH3.0)(60:40,V/V),流速0.7mL/min。检出限：芦丁、杨梅酮均为0.05mg/kg,槲皮素、莰菲醇均为0.04mg/kg;回收率：芦丁91%～92%、杨梅酮82%～85%、槲皮素84%～86%、莰菲醇86%～89%。分析云南省的5种特色蜂蜜样品,结果表明不同品种蜂蜜中4种黄酮类化合物含量差异显著,显示蜂蜜黄酮类化合物含量可作为鉴别蜂蜜品种的一个指标。     

富含γ-氨基丁酸的黑苦荞发芽的条件优化及成分分析

为提高黑苦荞的有效利用率和附加值,在单因素实验基础上,采用响应面法优化黑苦荞发芽富集γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的工艺条件。在此基础上,进一步考察发芽前后黑苦荞中的基本营养成分和活性成分含量的变化。结果表明:发芽时间为4 d、发芽温度为25 ℃、浸泡温度为25 ℃、浸泡时间为6 h时,发芽黑苦荞中GABA含量最高可达33.40 mg/100 g。发芽会显著提高黑苦荞碳水化合物、总酚、总黄酮、槲皮素、山奈素、表儿茶素、绿原酸的含量。其中,绿原酸和表儿茶素分别是发芽前的16.14、11.05倍,山奈素和槲皮素分别增加了86.4%、83.5%、总酚和总黄酮分别增加了57.1%、28.6%。发芽前后,粗蛋白质和粗脂肪含量相差不大,而灰分和芦丁含量却显著（P<0.05）下降。研究结果为黑苦荞的精深加工开发提供了新思路和理论支持。     

Study of the physicochemical properties of the BSA: flavonoid nanoparticle

A method to design a nanoparticle using bovine serum albumin and flavonoid was introduced in this work. Kaempferol and rutin were used here as models of hydrophobic flavonoids. Bovine serum albumin molecules formed nanoparticle with diameter of X–30 nm, promoted by dimethyl sulfoxide and flavonoid. The adsorption of kaempferol or rutin on bovine serum albumin was mainly hydrophobic, particularly happened in the region of tryptophan residue of the protein, and promoted the formation of a hydrophobic core surrounded by hydrophilic outer layer. One bovine serum albumin molecule could load at least 12 kaempferol or 5 rutin molecules. The controlled-releasing measurements showed that the bovine serum albumin nanocarrier has a long-term protection effect on the stability of kaempferol and rutin in the neutral aqueous medium. Moreover, the antioxidant activity evaluation indicated that the activities of kaempferol and rutin were not hindered by the embedding of bovine serum albumin nanoparticle.     

INHIBITION OF β-GALACTOSIDASE OF APPLE BY FLAVONOIDS AND OTHER POLYPHENOLS

The inhibition of a purified β-galactosidase from "Spartan" apples by flavonoids and related compounds has been studied with a fluorimetric assay using the substrate 4-methylumbelliferyl β-D-galactoside. Certain flavonoids, flavonoid glycosides, phenolic acids, and polyphenols (quercetin, fustin, rutin, p-coumaric acid, and catechol) gave classical noncompetitive inhibition at moderate substrate concentrations. Others (kaempferol, chlorogenic acid) gave nonlinear Dixon plots. The best inhibitors were flavones. In general, the degree of inhibition increased with the degree of hydroxylation and glycosylation of the phenol. Correlation of the structure of these substances with the observed inhibition suggests that the trans-3-(4-hydroxyphenyl)-propenoyl group, common to 4'-hydroxyflavones and p-hydroxyphenolic acids, is important for effective inhibition.     

黄酒酿制过程中黄酮类和多酚类物质含量变化的研究

黄酮类和多酚类物质具有多种重要的生理功能.实验采用毛细管电泳-电化学检测法(CE-ED)同时分离测定了不同年份的黄酒中6种黄酮类和多酚类物质(表儿茶素、芦丁、金丝桃甙、山萘酚、绿原酸、槲皮素)的含量,详细研究了这6种物质的含量随酿制时间的变化规律.结果表明,上述6种活性物质的含量会随着酿制年份的延长而增加.