BEP2D细胞受照前后蛋白质组学研究

本研究利用蛋白质组学技术对受1.5Gy、3Gy γ射线照射的人支气管上皮(BEP2D)细胞和未经照射的人支气管上皮细胞蛋白差异表达谱进行了分析与鉴定。研究结果表明:2-D电泳后在分子量14.4～94kD,等电点3～10范围内分离出约1000多个不同蛋白质斑点。凝胶图象显示1.5Gy的γ射线照射后与对照组相比有15个蛋白点上调,104个下调;3Gy的γ射线照射后有26个蛋白点上调,144个下调;二个不同照射剂量共同表达的差异蛋白点有18个,其中上调的有3个,下调的有15个。通过对选取的10个蛋白点进行质谱分析,有2个蛋白点(样品D和样品660)经检索鉴定为肌球蛋白轻链(MLC)。这些蛋白表达量的改变可能与辐射诱发肺部肿瘤的发生有关,为进一步研究肺癌的发病机理提供了一定的基础。     

辐射诱导BEP2D细胞蛋白质表达的改变

利用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,研究与人肺永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。结果表明,提取样品蛋白进行二维凝胶电泳,找到差异表达蛋白质点约18个,质谱鉴定获得10张肽质指纹图,经数据库搜索后初步鉴定差异表达的蛋白质有7种,即亲环素A、肌球蛋白轻链2、细胞角蛋白9、α-烯醇酶、磷酸丙糖异构酶1、MKRN1、c-myc启动子结合蛋白1。该7种蛋白质与辐射诱导肺癌的发生、发展过程密切相关。     

^60Coγ射线诱导HL-7702细胞子代蛋白质表达的改变

利用双向凝胶电泳（2-DE）和质谱技术,采用不同剂量60Coγ射线照射人正常肝细胞系HL-7702细胞,观察比较受照细胞克隆子代2-DE图谱的变化,并对差异蛋白质进行鉴定。结果表明,受照肝细胞克隆子代蛋白质表达发生了改变,串联质谱测序和串联质谱数据的Mascot共鉴定出17个差异表达的蛋白质点,4个是上调蛋白质,13个是下调蛋白质;上调蛋白质中,线粒体热休克蛋白60（HSP60）和珠蛋白转录因子1（GATA-1）明显高表达;免疫印迹技术进一步证实HSP60和GATA-1的表达随照射剂量的增加而增强。结果提示,在辐射诱发基因组不稳定性过程中,HSP60和GATA-1蛋白质可能发挥着作用。     

~(137)Csγ射线累积照射SD大鼠后肝脏蛋白质组的分析

采用相对和绝对定量的同位素标签技术(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)分析累积受137Csγ射线照射大鼠肝脏组织的蛋白质表达,筛选出差异蛋白质,对差异表达的蛋白质进行GO注释分析及相互作用网络分析,探讨137Csγ射线累积照射对SD大鼠肝脏蛋白质的影响。结果显示,质谱数据经蛋白质数据库搜索,在3组样品中有定量信息的蛋白质有2 220个;0.2 Gy照射组与对照组相比,差异蛋白有149种,52种蛋白上调,97种蛋白下调;2 Gy照射组有243种差异蛋白,123种上调,120种下调;两组共同表达差异的蛋白有122种,其中,52种蛋白表达上调,70种蛋白表达下调;利用GO注释对122个共同差异蛋白质功能进行聚类分析,结果表明:根据分子功能注释,差异蛋白以酶催化、蛋白质结合、核酸结合等功能为主,另外少数蛋白还有翻译调控活性;根据细胞组成注释,多数蛋白参与细胞胞浆、细胞核、细胞膜的组成;根据生物学过程注释,多数蛋白参与代谢调节和生物过程调节。利用PAJEK软件对两个剂量组共同差异表达的蛋白进行相互作用网络分析。结果显示SF3B1、ATP6V1C1是蛋白相互作用网络的重要节点,这两个蛋白直接或间接地与其它差异蛋白存在相互作用。上述研究结果表明,137Csγ射线累积照射可诱导SD大鼠肝脏组织蛋白质组的改变,SF3B1、ATP6V1C1蛋白可能在累积照射的肝脏损伤机制中发挥作用。     

结直肠癌细胞辐射敏感性的定量比较蛋白组学研究

为筛选结直肠癌细胞辐射敏感相关的蛋白质,用于结直肠癌放疗的个体化选择,采用荧光差异显微凝胶电泳(DIGE)技术分离并筛选Cy3、Cy5及Cy2荧光素标记的不同辐射敏感性的结直肠癌细胞系SW480和LOVO的移植瘤组织的差异表达蛋白质,结果共筛选出35个差异表达蛋白点,其中,在SW480组肿瘤组织中表达上调的蛋白点有17个,在LOVO组肿瘤组织中表达上调的蛋白点有18个。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行鉴定并分析,成功鉴定蛋白质点27个,LOVO组肿瘤组织表达上调蛋白17个,SW480组肿瘤组织表达上调蛋白15个。这些差异表达蛋白质有可能在结直肠癌辐射敏感性的预测中作为特异性的标记物,在结直肠癌患者的放疗选择中发挥重要作用,为结直肠癌患者的治疗选择提供技术参考。     

氡染毒大鼠支气管肺泡灌洗液蛋白质的双向电泳分析

观察氡染毒后大鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)蛋白质表达谱的变化.雄性Wistar大鼠吸入氡的累积剂量达200工作水平月(Working level month,WLM)后,收集大鼠BALF,提取BALF细胞总蛋白,采用双向电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质的分析.ImageMaster 2D Platinum软件分析结果显示正常组和氡染毒组大鼠BALF细胞总蛋白双向电泳图谱上分别可见到645和554个蛋白点,共获得48个显著的蛋白质差异点,其中23个点在正常大鼠BALF中表达或表达明显增强,25个点在染毒大鼠BALF中表达或表达明显增强.结果提示,正常大鼠与氡染毒大鼠BALF细胞的蛋白质表达谱存在差异.     

电离辐射所致肾损伤引起的骨代谢异常的机制探讨

研究了大剂量γ射线照射大鼠肾脏后诱发骨代谢异常的细胞分子机制。以15Gyγ射线照射大鼠肾脏,3个月后分析骨骼的病理形态、相关基因mRNA和蛋白质表达量的改变。肾辐射致骨小梁体积、骨小梁宽度、骨小梁数目分别降低13．2％、18．3％（p〈0．05）和20．1％（p〈0．05）,骨小梁间距增加34．8％（p〈0．05）,骨吸收表面提高20．2％（p〈0．05）。骨骼RANKL／OPG（细胞核因子κB受体活化因子配基,Receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL;骨保护蛋白,Osteoprotegerin,OPG）mRNA比值提高52．2％（p〈0．05）。TGF—β（转移生长因子β,Transforming growth factor-β）、IGF-Ⅰ（胰岛素样生长因子Ⅰ,Insulin—like growth factor Ⅰ,）、OPN（骨桥蛋白,Osteopontin）mRNA和蛋白质表达量明显升高。结果表明：大剂量γ射线照射大鼠肾脏可导致明显骨代谢异常,其发生机制主要与肾1α羟化酶活性降低致活性维生素D减少及PTH升高,成骨细胞表达的RANKL／OPG比例失调,以及TGF—β、IGF—Ⅰ、OPN表达明显升高有关。     

60 Coγ射线对人线粒体COXI和ATPase6表达水平的影响

目的：观察60 Co γ射线对人外周血线粒体COXI和ATPase6基因和蛋白质水平表达的影响,探讨线粒体编码基因用于辐射生物剂量估算的可行性。方法采用60 Coγ射线照射正常人离体外周血,照射剂量率为1．013 Gy/min ,剂量分别为0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0 Gy,。照后6小时,用RT-PCR技术检测基因的表达水平,用流式细胞仪检测蛋白质的表达水平,分别拟合最佳回归方程,建立剂量-效应曲线。结果（1）0～3．0 Gy ,COXI基因表达水平的最佳回归方程为 Y＝0．629＋0．256 D （ r2＝0．920,p＜0．01）,ATPase6基因表达水平的最佳回归方程为 Y＝0．221＋0．805 D （ r2＝0．912,p＜0．01）。（2）0～5．0 Gy ,COXI蛋白质表达水平的最佳回归方程为 Y＝1．054＋0．595 D （ r2＝0．919,p＜0．01）;ATPase6蛋白质表达水平与照射剂量间的关系不明显,不能拟合出最佳回归方程。结论60 Coγ射线照射人离体外周血,随着照射剂量的增加,线粒体COXI的基因与蛋白质表达水平一致,呈增加趋势,且有良好的线性关系,有望用于辐射生物剂量的估算。     

γ刀单次大剂量(200Gy)照射所致脑损伤的病理研究

采用普通病理检查、原位杂交、透射电镜方法,观察了使用旋转式头部γ刀以4mm直径准直器单次200Gy剂量定点照射正常大鼠右侧尾状核头部后长达1年的不同时间点的靶区和靶周围区的病理改变。结果表明,γ刀照射后脑损伤病变经历4个阶段：1．急性水肿阶段（照射后即刻14d）,2．坏死形成阶段（21d至2个月）,3．吸收阶段（3至6个月）,4．增生阶段（9至12个月）;照射后2h血脑屏障通透性即开始增加,其程度在一定时间内与照射后生存时间呈正相关;血管内皮细胞和胶质细胞超微结构的改变先于神经元;照射引起TNF－α、IL-1β mRNA表达增加,照射前给予地塞米松可以抑制其表达。     

辐射诱发细胞内活性氧增高与DNA氧化损伤研究

用60 Coγ射线照射人支气管上皮细胞 (BEP2D)。细胞内过氧化氢 (H2 O2 )和超氧阴离子(O2 · - )分别用分子探针 2’ ,7’ -二氯荧光黄双乙酸盐 (DCFH -DA)和氢化乙锭 (HE)进行标记 ,并通过流式细胞仪测定荧光产物 2’ ,7’ -二氯荧光黄 (DCF)和溴乙锭 (EB)荧光强度进行相对定量分析。DNA氧化损伤产物 8-羟基脱氧鸟嘌呤 (OH8dG)含量用高压液相色谱结合电化学方法 (HPLC-ECD)测定。结果表明 ,60Coγ射线诱发BEP2D细胞内活性氧 (ROS)水平和OH8dG含量均显著增高 ,并有良好的剂量效应关系。进一步分析显示 ,60 Coγ射线照射诱发BEP2D细胞内ROS增高与DNA氧化损伤产物OH8dG含量呈明显正相关 ,提示辐射对细胞的损伤效应可能与其诱发细胞内ROS增高及其对DNA氧化损伤机制有关     

同位素稀释质谱法测定空心玻璃微球内氘气总量

作为惯性约束核聚变(ICF)第一代靶丸,空心玻璃微球(HGM)内充燃料气体的组分、比例和密度均有严格要求,气体总量的测定至关重要。介绍了同位素稀释质谱法(IDMS)测定空心玻璃微球内氘气气体总量的分析方法。该方法采用氢气为稀释剂,活性炭作为吸附剂制备氘气和氢气的混合气体,用质谱计测定样品中氢同位素丰度。通过热力学公式推导、计算,求得HGM内氘气摩尔数。实验结果表明:用IDMS法测量HGM内痕量氘气总量切实可行,其测量下限为10-8 mol,测量结果的相对标准偏差小于5%(n=4或3,按照极差法计算),符合测量要求。     

Reconstruction of 3D ion beam micro-tomography data for applications in Cell Biology

The DISRA (Discrete Image Space Reconstruction Algorithm) reconstruction code, created by A. Sakellariou, was conceived for the ideal case of complete three-dimensional (3D) PIXET (Particle Induced X-ray Emission Tomography) data. This implies two major difficulties for biological samples: first, the long duration of such experiments and second, the subsequent damage that occurs on such fragile specimens. For this reason, the DISRA code was extended at CENBG in order to probe isolated PIXET slices, taking into account the sample structure and mass density provided by 3D STIMT (Scanning Transmission Ion Microscopy Tomography) in the volume of interest. This modified version was tested on a phantom sample and first results on human cancer cells are also presented.     

锕系、镧系元素分离中新萃取剂的研究(Ⅰ)--两种新型吡唑硫酮类萃取剂的合成及表征

本文通过酰基化、氯化、硫化反应合成两种新的酰代吡唑硫酮，即1－苯基－3－甲基－4－（2－氯）苯甲酰基吡唑硫酮－5和1－苯基－3－甲基－4－（2－氟）苯甲酰基吡唑硫酮－5。产物的结构用红外、氢核磁共振谱、质谱、元素分析及X衍射进行了表征。     

~(14)C-AMS技术用于油田示踪研究

为满足油田示踪样品量大、需快速分析的要求,建立简单的CaCO_3样品制备方法,利用加速器质谱(AMS)测量~(14)C标记的油田示踪样品。实验中将两口采油井中的示踪样品平均分成两份,分别用于碳酸盐提取制备法与尿素载体提取法。AMS测量结果显示,1#碳酸盐系列样品中,示踪剂~(14)C的含量略高于本底,升高趋势不明显,2#碳酸盐系列样品中可能有示踪剂~(14)C的贡献,但与~3H示踪结果不符;尿素载体法提取的两个系列样品中均无明显示踪剂采出。对比~(14)C示踪与~3H示踪结果,表明~(14)C-AMS技术应用于油田示踪可以显著降低示踪剂的使用剂量。     

Quantitative determination of the bulk deuterium content of zirconium alloys using nuclear reaction analysis

The use of the D(³He,p)⁴He reaction to study the bulk deuterium concentration in thick Zr alloy targets has been reported previously. In the present paper, we report on new measurements where the technique is extended to larger sample depths using higher projectile energies. This development is important since deuterium is known to concentrate at free surfaces and defects that may occur near surfaces; this effect might yield values unrepresentatively higher than the true bulk concentration. The bulk concentration has been extracted from a detailed comparison of experimental data with simulated proton spectra. In contrast to conclusions reached in an earlier study, the effect of ion beam desorption is unimportant with regard to the measurement of bulk deuterium concentrations when modest ³He fluences are used. Analyses using beams at energies of 2 and 4.5 MeV are consistent and in good agreement with bulk deuterium concentration measured by high vacuum extraction mass spectrometry (HVEMS).     

锆铀合金中痕量硼的同位素稀释质谱法测定

本文介绍了用同位素稀释技术测定锆铀合金试样中痕量硼的方法。选用富集~(10)B为同位素稀释剂,用硫酸-硫酸铵溶样,使硼形成挥发的硼酸甲酯与基样分离,用热电离质谱仪进行硼的同位素比值测量。方法的检测下限为1.5ng(硼)。对于含硼量小于1.0μg/g(样)的锆铀合金试样,相对标准偏差小于±1.0%。