响应面法优化终极腐霉生产EPA的发酵工艺

为进一步提高终极腐霉EPA产量,在初步优化发酵条件的基础上,通过Plackett-Burman和Box-Behnken实验设计优化终极腐霉生产EPA发酵工艺。获得的最优发酵工艺条件为:蔗糖8%,硝酸钾0.4%,酵母粉0.65%,磷酸氢二钠0.175%,硫酸镁0.065%,大豆油1.0%,起始p H6.0,装液量50 m L/250 m L。在最优发酵工艺条件下,EPA产量达到541.61 mg/L,比初步优化产量(456.39 mg/L)提高了85.22 mg/L。     

利用生物柴油副产物粗甘油发酵生产EPA

实验利用生物柴油副产物甘油为碳源,培养畸雌腐霉(Pythiumirregulare)发酵生产EPA。实验中所用废甘油为利用碱法催化大豆油与甲醇进行酯交换反应生成,粗甘油经过纯化精制作为碳源。EPA产量采用气相色谱分析,分析之前采用浓硫酸-甲醇酯化法进行脂肪酸甲酯化。由实验得出,最佳发酵条件为:温度为25℃,pH为6,转速为170r/min,粗甘油加入量为70g/L,此条件下获得的EPA产量为:105mg/L。     

轮枝霉(Diasporangiumsp.)产生EPA、AA发酵条件的初步研究

对本实验室分离的轮枝霉 (Diasporangiumsp )发酵产生含EPA、AA等多不饱和脂肪酸的条件 ,如碳源种类、氮源种类、pH、菌种的接种量和种龄、培养温度、通气量进行了研究 ,摇瓶发酵结果表明 ,以玉米粉和葡萄糖混合作为碳源能获得最高的不饱和脂肪酸产量 ;有机氮源有利于菌丝不饱和脂肪酸的产生 ;低温有利于菌丝中长链不饱和脂肪酸的产生 ,发酵接种量宜大 ;pH对菌丝生物量、EPA和AA的含量均有显著的影响。发酵培养 6d后菌丝中的不饱和脂肪酸含量达到最大值。在初步优化培养条件下 ,EPA、AA分别达到 2 5 3 7mg/L和 5 49 8mg/L。     

三孢布拉霉生产番茄红素发酵条件的研究

为了实现番茄红素的微生物法生产，研究了三孢布拉霉生产番茄红素的发酵条件。结果表明，种子培养基和发酵培养基的最佳碳源和氮源均为玉米糖化液和玉米浆。最佳发酵培养基为玉米粉糖化液40s／L，玉米浆40s／L，磷酸二氢钾0.5g/L。番茄红素发酵生产的最佳条件为发酵培养基pH6.5，发酵时间36h，三角瓶装液量40ml/250mL,接种量10％。     

米根霉产糖化酶发酵条件的研究

以R.SCLG 0319菌株的糖化酶催化活性为指标,研究了发酵时间、温度、装液量、初始pH值及相关金属离子等因素对该菌株发酵产糖化酶活力的影响.结果表明,R.SCLG 0319菌株摇瓶发酵产糖化酶40h为宜,最适发酵温度30℃,装液量100mL/250mL,培养基初始pH值6.0;菌株对低浓度乙醇作用呈现依赖性,培养基中6%vol酒精度时酶活力达到135 U/mL,可耐12%vol酒精度,在高浓度乙醇作用下酶活力迅速下降;Cu2+、Ca2+ 和Mg2+呈现激活效应,其中Mg2+的效应最明显,酶活力增强50%,Fe2+、Zn2+ 和Mn2+呈现出抑制效应,其中Fe2+的抑制作用最大,酶活力降低近80%.     

根霉产凝乳酶发酵条件的研究

对根霉经发酵产凝乳酶的发酵条件进行研究。结果表明,发酵培养基的最佳组成为4.5%的米粉麸皮（按2：3的比例）水解液、4.0%的黄豆粉水解液、0.3%的CaCl2、0.5%的KCl。摇瓶培养中培养基起始pH值为4.5,培养时间、温度分别为60h、34℃时,所产凝乳酶活力达161.14SU/mL且凝乳酶活力与蛋白酶活力的比值最大为27.88。     

特异腐质霉角质酶在大肠杆菌中的表达和发酵优化

应用大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)表达系统实现特异腐质霉(Humicola insolens,H.insolens)来源角质酶的重组表达。对重组角质酶进行酶学性质研究,发现其最适pH为8.5、最适温度为80℃,并有良好的pH稳定性和温度稳定性。经3L发酵罐中扩大培养并进行发酵条件优化,其最佳发酵条件:发酵前期控制菌体生长pH 7.0、温度37℃,培养时间12~14h;菌体浓度OD600达到50时进入诱导期,调节温度降至30℃,恒速流加0.2g/(L·h)的乳糖溶液进行诱导,总发酵周期为36h,最高酶活2 233U/mL,是摇瓶水平酶活的13倍。     

高山被孢霉生产多不饱和脂肪酸发酵条件的研究进展

高山被孢霉能发酵生产多不饱和脂肪酸如花生四烯酸等,具有安全性好、产率高、生产易控制等优点,适宜于工业化生产。本文论述了高山被孢霉产多不饱和脂肪酸发酵条件的研究进展,着重于论述发酵过程中碳源、氮源、溶解氧及培养条件等对产物产率的影响作用研究。     

短梗霉多糖发酵条件的优化研究

经正交试验确定产短梗霉多糖菌体Ａ４５的最佳发酵培养基组成的（ｇ／Ｌ），葡萄糖５０，酵母膏０．３（ＮＨ４）２ＳＯ４０．３，Ｋ２ＨＰＯ４２．０，ＭｇＳＯ４．５Ｈ２Ｏ０．２。并优化了发酵条件，在该条件下发酵多糖产量达３４．６ｇ／Ｌ，生物量为１６．７ｇ／Ｌ，残糖浓度８．８ｇ／Ｌ，并获得了Ａ４５的菌株的发酵动力学曲线。     

绿色木霉95106固态发酵生产纤维素酶条件优化研究

以稻草粉与麦麸为主料,对影响绿色木霉固态发酵生产纤维素酶的因素,如秸秆粉和麦麸的用量比、固液比、初始pH值、氮源及其浓度、发酵温度和时间等进行了研究.结果显示,稻草粉:友麸比为15∶5、料水比为1∶5、初始pH值为6.0、以0.25％尿素液为氮源、28℃培养72h的产酶活力最高,滤纸酶活和内切酶活分别比基础发酵条件下增加了1.21倍和0.726倍.该研究结果为高效率、低成本、工业化生产纤维素酶提供科学依据.     

产低温淀粉酶海洋细菌HYM-7发酵条件研究

采用平板初筛和摇瓶复筛等方法,从秦皇岛渤海海域的海水样品中,分离获得产淀粉酶活力较高的菌株HYM-7,初步鉴定为解淀粉类芽孢杆菌（Paenibacillus.amylolyticus）,设计单因素和正交实验,确定该菌的最佳发酵条件。结果表明:在装液量50mL液体培养基的250mL三角瓶中,采用单因素实验得最佳接种量为1%,最适产酶时间为48h,最适碳源为玉米淀粉,氮源为大豆粉,Ca2+和Mg2+可显著提高产酶量;采用正交实验得最适发酵培养基配方（g/L）:玉米淀粉4、大豆粉10、可溶性淀粉2、MgSO40.2、CaCl20.4。对优化的发酵培养基进行验证,测得酶活力为34.62U·mL-1,较基础培养基酶活提高60.8%。      

Halobacterium salinarium 5 L发酵罐中产细菌视紫红质(BR)发酵条件优化

优化盐沼盐杆菌（Halobacterium salinarium）在5 L发酵罐中的生物量及细菌视紫红质含量的发酵条件,为该菌株的进一步应用提供依据。通过单因素实验考察温度、p H、搅拌转速、通气量和不同流速的玉米浆对盐沼盐杆菌的影响。优化后发酵条件为:温度37℃,转速250 r/min,通气量1.3 vvm,p H在发酵的过程中不用酸液和碱液调节,补加玉米浆的流速为0.2 m L/min。在此条件下,菌体的生物量(用OD₆₀₀表示)达到4.531,细菌视紫红质的含量达到90.86 mg/L,与未优化的条件相比分别提高了43.8%、36%。      

Blakeslea trispora发酵生产番茄红素动力学的研究

番茄红素是类胡萝卜素生物合成途径中的一个中间产物,通过添加阻断剂,阻断代谢途径,可以达到番茄红素积累的目的。以Blakeslea trispora为生产菌,研究了番茄红素的发酵动力学,通过各自的模拟方程预测出菌体生长量,产物生成量,以及葡萄糖的消耗量,为工业放大生产番茄红素提供了理论依据和方法。     

基因重组毕赤酵母产蛋清溶菌酶发酵工艺及表达条件的优化

以甲醇诱导型蛋清溶菌酶基因重组毕赤酵母（Pichia pastoris）NCY-2为研究菌株,选用麦芽汁为培养基,首先通过单因素试验,对培养基锥形瓶种类、原麦芽汁稀释度及外加氮源进行了优化,在此基础上,采用均匀设计试验,得到菌株NCY-2的最佳发酵工艺条件为发酵温度31 ℃、pH 5.5,转速220 r/min,接种量4%;蛋清溶菌酶最佳表达条件为诱导温度18 ℃、诱导pH 4.4、转速190 r/min、甲醇初始添加量为0.3%（之后每隔24 h分别添加体积分数1.0%、1.5%、2.0%,诱导72 h结束）。在此优化条件下,摇床水平发酵液中蛋清溶菌酶酶活力可达到962.4 U/mL。     

米曲霉发酵牛乳工艺条件的研究

利用米曲霉对牛乳进行发酵,通过单因子及正交试验以菌丝体干重、氨基酸态氮为考察指标对其发酵牛乳工艺条件进行了研究。结果表明,发酵是在pH值自然状态下,接种量为5%,装液量为25mL,摇床转速为180r/min时,菌丝体干重可达到2.71g/100mL。氨基酸态氮达0.3088g/100mL。     

植酸酶产生菌产酶条件研究

经采样、分离，筛选出多株植酸酶产生菌；并将其中产酶水平较高的黑曲霉（Ａｓｐ．ｎｉｇｅｒ７０）和无花果曲霉（Ａｓｐ．ｆｉｃｕｕｍＮＲＲＬ３１３５）用固态培养法进行了产植酸酶条件的对比研究。     

利用根霉发酵生产L-(+)-乳酸

Ｌ－（＋）－乳酸是一种重要的有机酸,它在食品、医药、化工等领域具有广泛的用途。与乳杆菌相比,根霉发酵营养要求简单,所产Ｌ－（＋）－乳酸纯度高,是国内外生产Ｌ－（＋）－乳酸普遍采用的菌种。近十几年来,国内外学者对根霉发酵生产Ｌ－（＋）－乳酸的研究主要集中在下列五个方面：菌种、代谢机理、培养基、发酵工艺、发酵动力学。     

重组毕赤酵母产凝乳酶发酵条件研究

以重组毕赤酵母GS115/pPICZaA-Prochy为凝乳酶生产菌种,研究其在5L发酵罐水平的最佳产酶条件,为中试生产提供依据.采用批量发酵,甲醇浓度0.1％,诱导阶段每12h添加10g/L蛋白胨,发酵液pH值为3.0,油酸浓度0.2％,诱导初期批量加入10g/L山梨醇共基培养,诱导84h可获得152SU/mL的酶活力.采用十二烷基磺酸钠-苯琼脂糖凝胶电泳分析,在发酵液(去菌体后)样品盐离子浓度2mol/L,流速2.5mL/min,酶回收率达到82％,浓缩倍数20倍.     

聚乙烯醇(PVA)微珠发酵生产木糖醇能力的改进研究

聚乙烯醇作为主要包埋剂固定化季也蒙假丝酵母（Candida guilliermondii）,并添加海藻酸钠和活性炭作为添加剂,以小球强度和木糖醇得率为主要指标,确定发酵木糖生产木糖醇的最佳条件。结果表明,包埋剂最佳配比为聚乙烯醇8％、海藻酸钠（SA）1％、活性炭（C）1．5％,交联剂为饱和H28O3—4％CaCl2,固定化细胞微珠在缓冲溶液中的破裂时间提高到140h,并且可以连续进行24d以上的发酵,木糖醇得率提高到67．9％,机械强度也提高了近3倍。