葛仙米藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗氧化活性比较研究

在体外模型上,对人工养殖的葛仙米藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗氧化活性进行比较研究。通过考察羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、脂质过氧化抑制能力,对葛仙米中藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗氧化活性进行评价。体外抗氧化作用结果显示藻胆蛋白、藻红蛋白和藻蓝蛋白都有明显的抗氧化作用,但作用方式和抗氧化程度也有不同,在羟基自由基清除试验中,抗氧化活性由强到弱依次为藻胆蛋白藻蓝蛋白藻红蛋白;在超氧阴离子清除试验中藻红蛋白≧藻蓝蛋白藻胆蛋白;在抑制脂质过氧化试验中藻红蛋白藻胆蛋白藻蓝蛋白。人工养殖的葛仙米中藻蓝蛋白、藻红蛋白及藻胆蛋白粗提物具有很好的体外抗氧化活性,但三者抗氧化方式略有差异。     

葛仙米藻胆蛋白提取工艺及藻蓝蛋白稳定性研究

对葛仙米藻胆蛋白的提取工艺及其稳定性进行了研究。采用单因素实验优化葛仙米藻胆蛋白的提取工艺。结果表明，NaCl浓度为0．24mol／L，pH7及提取时间为4．2h时，藻胆蛋白的得率最高，分别为7．004％，7．438％，5．924％；藻蓝蛋白的稳定性实验表明，藻蓝蛋白在30℃以下，酒精浓度在10％以下，pH值在6～8的范围内比较稳定，     

葛仙米藻胆蛋白提高小鼠免疫功能的研究

研究葛仙米藻胆蛋白对昆明小鼠的免疫增强活性。分别以100、300、500 mg/（kg·d）的葛仙米藻胆蛋白溶液剂量对小鼠连续灌胃30 d。然后分别对腹腔巨噬细胞吞噬率、自然杀伤（natural killer,NK）细胞活性,T淋巴细胞增殖、细胞因子、抗体、迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH）等免疫参数进行测定。结果表明：葛仙米藻胆蛋白可以提高腹腔巨噬细胞吞噬率、NK细胞活性、T淋巴系统增殖以及血清中白细胞介素（interleukin-2,IL-2）和IL-4细胞因子水平。同时葛仙米藻胆蛋白处理组的小鼠DTH显著高于对照组,表明葛仙米藻胆蛋白是一种潜在的免疫增强剂。     

葛仙米藻胆蛋白的提取工艺优化及其纯化研究

以葛仙米为原料,研究葛仙米藻胆蛋白的超声辅助提取工艺。以藻胆蛋白提取率为评价指标,对提取工艺中葛仙米粉粒径数、超声功率、处理方法、液料比、提取时间、提取温度共6个因素进行单因素试验,并结合响应面分析对提取工艺进行优化。结果表明:采用超声辅助处理方法(超声功率700 W),当葛仙米粒径数120目~200目、液料比58∶1(m L/g)、提取温度42℃、提取时间6 h时,葛仙米藻胆蛋白的提取率达到最大为26.13%,达到预测值的99.54%。采用一步离子交换树脂层析法纯化藻蓝蛋白(Phycocyanin,PC)和藻红蛋白(Phycoerythrin,PE),经聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、凝胶过滤色谱(Gel filtration chromatography,GFC)、紫外可见吸收光谱(Ultraviolet-visible absorption spectroscopy,UV-Vis),藻蓝蛋白纯度达到93%,藻红蛋白纯度83.5%。     

葛仙米藻蓝蛋白抗氧化作用研究

通过非脂质体系抗氧化实验、体外抗氧化实验研究了葛仙米藻蓝蛋白的抗氧化能力。结果表明:葛仙米藻蓝蛋白对清除O2·、·OH自由基和H2O2具有较好的量效关系。在体外反应体系中,葛仙米藻蓝蛋白能显著地降低MDA生成和血和肝中过氧化物的含量,起到保护细胞膜和红血球的作用。显示葛仙米藻蓝蛋白对小鼠肝线粒体损伤具有保护作用,并能显著影响血浆的抗活性氧能力。     

葛仙米藻胆蛋白和藻蓝蛋白对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及其作用机制

目的:对人工养殖的葛仙米藻胆蛋白和藻蓝蛋白在S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及作用机制研究。方法:通过考察S180荷瘤小鼠肿瘤体积、小鼠脏器指数和肿瘤组织切片观察,对葛仙米中藻胆蛋白、藻蓝蛋白的体内抗肿瘤活性进行评价,并初步研究了其作用机制。结果:体内抗肿瘤作用结果显示,葛仙米藻胆蛋白12.5、25、50 mg/kg剂量组对小鼠肉瘤S180的抑瘤率分别为11.19%、20.14%、37.65%。葛仙米藻蓝蛋白12.5、25、50 mg/kg剂量组对小鼠肉瘤S180的抑瘤率分别为19.74%、35.00%、52.06%。藻蓝蛋白能够明显促进抑癌蛋白P53和促凋亡蛋白Bax的表达,抑制凋亡抑制蛋白Bcl2的表达。结论:葛仙米藻蓝蛋白高剂量组可显著减少S180肉瘤细胞的增殖,葛仙米藻蓝蛋白低、中剂量和葛仙米藻胆蛋白高剂量也有一定的抑制作用,人工养殖的葛仙米中藻胆蛋白和藻蓝蛋白具有较好的体内抗肿瘤活性。     

葛仙米藻胆蛋白与色度降解动力学

以葛仙米藻胆蛋白为原料,研究pH值、温度和光照对其色度和含量的影响,建立葛仙米藻蓝蛋白及其色度的降解动力学,结果发现pH 3色素溶液在可见光区几乎没有藻蓝蛋白特征吸收峰,随pH值增加藻蓝蛋白特征吸收峰值逐渐增强,至pH 6达最高,之后逐渐下降;pH值增加藻蓝蛋白特征峰有轻微的蓝移效应。pH 4色素溶液Hunter-b最小,其蓝色最深,且每种pH值色素溶液的Hunter-b差异极显著。藻蓝蛋白在50 ℃半衰期分别是60 ℃和70 ℃的8.09 倍和11.05 倍;而色度在50 ℃半衰期分别是60 ℃和70 ℃的29.17 倍和72.74 倍。     

3种处理方式对葛仙米藻胆蛋白清除超氧阴离子自由基能力的影响

主要研究反复冻融、溶剂、pH值等对葛仙米藻胆蛋白清除超氧阴离子自由基能力的影响,并探讨藻胆蛋白的模拟胃肠液降解产物对超氧阴离子自由基清除能力的变化情况。结果发现反复冻融不会影响葛仙米藻胆蛋白清除超氧阴离子自由基的能力,磷酸缓冲液可提高藻胆蛋白清除超氧阴离子自由基的能力。pH 5.6和pH 7.3浸提物清除超氧阴离子自由基的能力差异不显著,但pH 8.1浸提液略优于其他两种。随着处理时间延长,模拟肠液消化产物清除超氧阴离子自由基能力逐渐增强,模拟胃液消化产物却逐渐下降。     

葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗炎和抗紫外活性比较研究

目的:对葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎和抗紫外活性进行体外比较研究。方法:通过Lipopolysaccharide(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α,比较葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎活性;通过Ultraviolet radiation B(UVB)辐照诱导NIH-3T3成纤维细胞损伤,考察藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗紫外损伤活性。结果:体外抗炎结果显示LPS能极显著诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α(P<0.01),藻蓝蛋白和藻红蛋白均能极显著抑制LPS诱导RAW264.7分泌的NO和TNF-α的含量水平(P<0.01),其中藻红蛋白抑制NO分泌能力高于藻蓝蛋白,藻蓝蛋白对TNF-α的分泌抑制作用高于藻红蛋白。体外抗紫外损伤结果显示UVB 4000 mJ/cm²可以成功诱导NIH-3T3细胞的紫外损伤,但是藻蓝蛋白和藻红蛋白对NIH-3T3细胞的紫外损伤并无明显保护作用。结论:葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白具有很好的体外抗炎活性,但两者对UVB诱导的细胞损伤并无明显保护作用。     

紫菜藻胆蛋白的制备及其体外模拟消化研究

以紫菜为原料,采用藻胆蛋白提取率为评价指标并结合显微镜观察,通过比较水冻融、缓冲液冻融、水溶胀、氯化钙浸提、超声波破碎、酶水解、超微粉碎等方法筛选最佳方法;建立紫菜藻胆蛋白模拟消化模型,以游离氨基酸含量和DPPH自由基清除率作为评价指标并结合SDSPAGA电泳技术考察藻胆蛋白的消化情况。结果表明,磷酸盐缓冲液浸泡辅以超声波破碎技术是藻胆蛋白制备的最佳方法,工艺条件为:磷酸盐缓冲液浓度0.06 mol/L、超声功率400 W、处理时间20 min、溶液温度40℃、料液质量体积比为1 g∶50 mL,藻胆蛋白的提取率为7.05%,在光学显微镜和扫描电镜下皆观察到紫菜细胞结构与形态的变化;在紫菜藻胆蛋白的模拟人体胃肠消化过程中,紫菜藻胆蛋白的消化主要集中在胃肠液开始消化的30 min,随后消化速度趋缓,紫菜藻胆蛋白是容易被消化的优质蛋白质。     

葛仙米多糖的单糖组成分析

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法及HPLC-质谱联用法测定葛仙米多糖的单糖组成,两种方法测定结果相互吻合。同时采用HPLC法测定了相关单糖的标准曲线,相关系数达到0.995以上,经计算,葛仙米多糖的单糖组成物质的量比甘露糖∶葡萄糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖为1∶1.12∶3.24∶1.72∶1.21。     

富硒蓝莓全果果酒体外消化特性研究

为分析富硒蓝莓全果果酒的体外消化特性,以非富硒酵母发酵蓝莓全果果酒为对照,对两种果酒在模拟胃肠液消化前后的总多酚含量、抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性及酚酸含量进行测定。结果表明,两种果酒在模拟胃肠液消化后总多酚含量、抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性均有所下降,3.0 h模拟胃液及1.0 h模拟肠液消化后富硒蓝莓全果果酒中总多酚含量是对照的1.28倍,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、超氧阴离子（O2-）自由基清除率及对α-葡萄糖苷酶抑制活性分别是对照的1.27倍、1.85倍、1.07倍、1.18倍。富硒蓝莓全果果酒经模拟胃肠液消化后主要的酚酸为没食子酸（0.98μg/mL）、绿原酸（0.11μg/mL）、芦丁（0.17μg/mL）。富硒蓝莓全果果酒较对照在模拟胃肠液消化后具有更高的抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶活性,具有更强的生物活性。     

茶多酚在模拟胃肠消化过程中含量及活性的变化规律

通过模拟消化模型分析茶多酚在胃肠消化过程中成分和抗氧化活性的变化规律,及其对肠道细菌生长的影响。结果表明,与胃部相比,茶多酚在肠部降解能力更为显著;经过模拟胃消化,茶多酚含量降低了12.00%,GCG显著降低了32.50%,EGC增加了13.80%;模拟肠消化后,茶多酚含量大幅度地降低了35.90%～46.10%,EGCG显著降低了98.40%～98.70%,GC则显著增加了97.00%～114.00%;模拟胃肠消化后,茶多酚的总抗氧化能力、DPPH·和ABTS~+·的清除能力均大幅度降低(p0.05),除肠消化阶段清除ABTS~+·的能力外,其余消化阶段的抗氧化能力均与茶多酚含量呈正相关;此外,研究模拟消化前后茶多酚对肠道细菌生长的影响,发现消化前其具有显著抑制大肠杆菌和增殖嗜酸乳杆菌生长的作用,模拟胃肠消化后,茶多酚对大肠杆菌抑菌效果增强,但对嗜酸乳杆菌无显著作用。     

纸型海藻食品的氨基酸构成和模拟胃肠消化特性的研究

研究纸型紫菜食品和纸型海带食品的氨基酸构成特点及2种海藻食品模拟胃肠消化的特性。分别以紫菜和海带为原料,制作纸型紫菜和纸型海带,通过氨基酸分析、模拟胃消化、模拟肠消化分析纸型海藻食品的营养成分和消化特性。纸型紫菜和纸型海带均含有人体必需的8种氨基酸,2种半必需氨基酸及8种其他氨基酸。纸型紫菜的氨基酸含量为19.62g/100g,纸型紫菜和纸型海带的鲜味氨基酸占氨基酸的总量超过20%。纸型紫菜经5h模拟胃消化的消化率为57%,高于非纸型紫菜消化率(36%),纸型海带经5h模拟胃消化的消化率为18%,高于非纸型海带消化率(13%)。纸型紫菜和纸型海带经5h模拟肠消化的消化率分别为78%和28%,均显著高于非纸型海藻模拟肠消化的消化率。纸型紫菜和纸型海带具有合乎FAO/WHO的氨基酸参考模式,具有优良的胃消化特性和肠消化特性。     

紫花芸豆蛋白体外消化产物的抗氧化活性及结构特征分析

为探究芸豆蛋白在体外模拟胃部消化期间抗氧化活性及结构特征,本实验以紫花芸豆蛋白为原料,采用体外模拟消化模型,并运用多种蛋白分析方法进行检测。结果表明：在消化期间因酶解作用,其水解度及溶解度明显提高,并且随着芸豆蛋白低分子质量肽段数量的增加,消化产物的抗氧化活性显著增加,其中总抗氧化能力、铁离子还原能力分别提高了296.97%、54.01%;通过傅里叶变换红外光谱分析发现,消化过程使芸豆蛋白二级结构发生显著变化,随消化时间的延长,消化产物中α-螺旋相对含量、β-转角相对含量不断提高,β-折叠相对含量不断降低;经模拟消化后的芸豆蛋白暴露巯基、总巯基含量下降幅度均较大,两者随消化时间延长均略有增加;扫描电子显微镜分析发现芸豆蛋白经胃部模拟消化后呈现颗粒状,且无序排列形成细密的网状结构。     

体外消化对金瓜籽抗氧化肽抗氧化活性的影响

本实验以金瓜籽为原料,以还原力、羟自由基清除率、DPPH自由基清除率为考察指标,采用响应面试验探讨了制备金瓜籽抗氧化肽的工艺参数,并研究了其经体外模拟人体胃肠道消化后的游离氨基酸组成、分子质量分布及抗氧化活性变化。结果表明：制备金瓜籽抗氧化肽的最优工艺条件为底物（金瓜籽粕）质量分数为6%、添加碱性蛋白酶3%、在pH?8.5的体系中55?℃酶解90?min,此条件下所得羟自由基清除率、DPPH自由基清除率、还原力分别为（58.19±0.80）%、（60.27±1.73）%和0.49±0.01;分子质量小于3?kDa、3～5?kDa及大于5?kDa的抗氧化肽经体外模拟胃肠道消化后分别含游离氨基酸41.72%、36.94%和33.93%,其主要为分子质量小于500?Da的肽段,占比分别为73.50%、60.15%和53.30%;与消化前相比,消化产物对羟自由基的清除能力分别提高了26.04%、29.06%和34.43%,还原力分别提高了50.98%、64.53%、67.35%。该研究可为金瓜籽抗氧化肽作为功能性抗氧化剂的生产和应用提供参考。     

生物解离大豆蛋白酶解物体外模拟消化抗氧化活性变化

挤压膨化大豆在生物解离过程中,通过酶解（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）产生的大豆蛋白酶解物（soybean protein hydrolysate,SPH）有良好的抗氧化活性,因此,需要探索模拟胃肠道（gastrointestinal,GI）消化对蛋白酶解物抗氧化活性的影响。分别以蛋白酶（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）酶解得到的SPH和经过模拟GI消化后的产物作为研究对象,采用水解度、氨基酸组成、分子质量分布、氧化自由基吸收能力（oxidative radical absorption capacity,ORAC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力及2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt,ABTS）阳离子自由基清除能力对样品抗氧化活性进行分析。结果显示：相对于风味蛋白酶酶解,采用碱性蛋白酶进行酶解时抗氧化活性更高;但是经过模拟GI消化后,风味蛋白酶酶解得到的SPH抗氧化活性更高,ORAC为69.15 μmol/mg、DPPH自由基清除能力为27.29%、ABTS阳离子自由基清除能力为56.21%,肽的相对含量更高,为75.86%,并且肽中具有抗氧化活性的氨基酸含量更高,分子质量小于1 kDa的肽相对含量最高,为17.35%。     

黄河鲤鱼鳞明胶消化过程中的抗氧化活性

为探索黄河鲤鱼鳞明胶在体内的消化特性,在37 ℃条件下,先采用胃蛋白酶对黄河鲤鱼鳞明胶酶解2 h（pH 2.0）,随后调整pH值至7.5,采用胰蛋白酶对其酶解2 h,考察黄河鲤鱼鳞明胶在模拟消化过程中的水解度变化规律。采用体外抗氧化模型考察了黄河鲤鱼鳞明胶在模拟消化过程中的羟自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除能力、总还原力、脂质氧化抑制能力和金属离子螯合能力等抗氧化活性。结果表明,胃蛋白酶对黄河鲤鱼鳞明胶的消化能力较差,对其α链和β链的酶解作用较弱,而胰蛋白酶对黄河鲤鱼鳞明胶肽链有较强的酶解作用,黄河鲤鱼鳞明胶经模拟消化后水解度可达到16.9%,消化产物的抗氧化性能与其消化过程中水解度有较强的相关性。