催乳素、雌激素和胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞中瘦素及其受体的影响

以荷斯坦奶牛为实验材料,通过体外培养奶牛乳腺上皮细胞,添加催乳素、雌激素和胰岛素运用激光扫描共聚焦显微技术、Western Blot Analysis、Real-Time PCR等技术来观察乳腺上皮细胞中瘦素表达和泌乳功能的变化规律。结果表明,应用Western Blotting方法对泌乳期奶牛乳腺上皮细胞中瘦素和瘦素受体的蛋白表达量进行研究,催乳素、雌激素能显著提高瘦素及其受体的分泌,且催乳素高于雌激素,胰岛素影响不显著。荧光定量RT-PCR结果表明,催乳素和雌激素能提高瘦素及其受体mRNA表达量,胰岛素没有明显影响。     

王不留行促进奶牛乳腺泌乳的信号转导途径

应用Western blot检测王不留行水浸提液作用后,乳腺上皮细胞泌乳信号转导基因P-AKT1、cyclinD1、PRLR、P-STAT5a和AMPK、GULT1的变化,结果表明:中药王不留行对P-AKT1、cyclinD1、PRLR、P-STAT5a和AMPK、GULT1基因表达具有一定作用,可能通过mTOR信号转导途径促进乳腺上皮细胞的增殖;通过激活PRLR从而激活Stat5a泌乳信号转导途径激活其下游β-酪蛋白基因的表达;且可能通过激活AMPK而促进GLUT1表达的增强,从而增加细胞对葡萄糖的摄取能力促进乳糖的合成。     

王不留行增乳单体对牛乳产量和乳品质的影响

研究了对王不留行活性单体进行分离.采用聚酰胺柱层析、硅胶柱层析、制备型HPLC等分离技术对增乳活性单体进行制备,利用增乳单体注射液对奶牛进行注射来验证其增乳效应.结果表明,该增乳单体为邻苯二甲酸二丁酯,注射该增乳单体后提高了奶牛的泌乳性能.其中泌乳量增加了17.82%,乳脂率增加了6.39%,乳糖增加了6.97%,乳蛋白和非脂固形物变化不明显.     

小G蛋白RagD对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的影响

以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究了RagD对细胞中β-酪蛋白(CSN2)的合成及蛋氨酸调节CSN2合成信号通路的影响。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(WB)检测添加蛋氨酸后细胞中CSN2与Rag D的表达;对Rag D进行过表达和抑制,用q RT-PCR和WB检测细胞中CSN2、mTOR和p-mTOR的表达。结果表明:添加蛋氨酸使细胞中CSN2和RagD的表达显著增加;RagD过表达时,细胞中CSN2与p-mTOR的表达显著增加,mTOR表达变化不显著,此时添加蛋氨酸,细胞中CSN2与p-m TOR的表达继续显著增加;RagD抑制时,细胞中CSN2与p-m TOR的表达显著下降,mTOR表达变化不显著(P0.05),此时添加蛋氨酸,不能使细胞中CSN2与p-m TOR的表达恢复。RagD作为信号分子,能接收并传递蛋氨酸信号,使细胞中mTOR磷酸化,正向调节奶牛乳腺上皮细胞中CSN2的表达。     

DNA甲基化对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳糖合成的影响

以健康的泌乳期中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞(DCMECs)为实验模型,构建DNMT3A过表达载体pcDNA3.1-DNMT3A,用脂质体转染奶牛乳腺上皮细胞,采用荧光定量PCR技术检测奶牛乳腺上皮细胞中DNMT3A的mRNA表达,采用Bovine milk fat ELISA KIT检测细胞中的乳脂含量,采用Bovin...     

microRNA-148b对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成的影响

以奶牛乳腺上皮细胞(Dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)为研究模型,探讨microRNA-148b对DCMECs增殖和β-酪蛋白合成的影响.应用脂质体转染技术将miR-148b转染DCMECs,qRT-PCR观测其表达量,采用双荧光素酶实验验证miR-148b与转化生长因...     

人α-乳白蛋白在奶牛乳腺上皮细胞中的表达

将人α-乳白蛋白(α-LA)0.76 kb的cDNA序列连接到PSV载体SV40启动子后,构建真核表达载体hα-LA-psv.将构建的真核表达载体转染奶牛乳腺上皮细胞,Aα-乳白蛋白的表达量约为0.85 g/L.结果表明,构建的真核表达载体能够在体外培养的牛乳腺上皮细胞中高效表达Aα-乳白蛋白.     

Thrsp在不同乳品质奶牛乳腺中的表达及其对乳脂合成的影响

利用数字基因表达谱及荧光定量PCR对不同乳品质奶牛及干奶期奶牛乳腺甲状腺激素应答蛋白(Thyroid Hormone Responsive Spot 14 protein,THRSP)基因Thrsp mRNA差异表达进行分析,并克隆奶牛乳腺上皮细胞THRSP基因,构建THRSP过表达载体后转染奶牛乳腺上皮细胞,检测Thrsp过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响。结果表明:泌乳期高乳品质奶牛Thrsp mRNA表达高于低乳品质奶牛(P0.05),过表达Thrsp后奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯浓度升高(P0.05)。结论:Thrsp参与调控奶牛乳脂合成。     

奶牛乳腺中瘦素及其受体的表达与定位

为探讨瘦素在奶牛乳腺发育、泌乳及退化各时期的表达变化规律及在乳腺组织中的具体位置,采用免疫印迹(western blot-ting)技术及激光共聚焦技术检测奶牛乳腺组织中瘦素及瘦素受体(OB-Rb)的表达变化及其定位。结果表明,瘦素在青春期表达量较高,在泌乳期表达量最低。瘦素受体在青春期和妊娠期表达量较高,泌乳期表达量相对较低,退化期逐渐恢复到妊娠期水平。     

miR-9-5p对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响

以健康的泌乳期中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞(Dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)为实验模型,探究mi R-9-5p对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响。通过体外转染mi R-9-5p mimics的方式处理奶牛乳腺上皮细胞。随后采用MTT方法测定细胞增殖能力,采用western blotting技术检测乳脂合成相关信号通路蛋白SREBP1的表达情况,再采用甘油三脂检测试剂盒检测奶牛乳腺上皮细胞中甘油三脂含量的变化。实验结果显示mi R-9-5p对奶牛乳腺上皮细胞的增殖有明显的抑制作用,同时mi R-9-5p对乳脂合成相关信号通路蛋白SREBP1的表达也有明显的抑制作用,且显著抑制甘油三脂的合成,说明mi R-9-5p对奶牛乳腺上皮细胞乳脂的合成有着负调控作用。本实验试图从分子水平揭示中国荷斯坦奶牛乳品质差异的原因,进一步完善中国荷斯坦奶牛泌乳的分子机制。     

奶牛不同发育时期乳腺组织IGF-I及其受体的表达与定位

采用免疫印迹和间接免疫荧光方法,对荷斯坦奶牛不同发育时期乳腺组织IGF-I及其受体IGF-IR的表达与定位进行研究,结果表明,IGF-I(Insulin-like growth factor-I)及IGF-IR(Insulin-like growth factor-I receptor)均定位于乳腺导管腔上皮细胞、腺泡上皮细胞以及基质;IGF-I蛋白表达量在围产前期降到最低,在泌乳中期达到最高;IGF-IR蛋白表达量在妊娠6月急速下降,随后在围产前期上升至最大值。结论:IGF-I与IGF-IR蛋白在奶牛乳腺中定位的一致性及其特异性表达规律,预示配体与受体相结合并参与了奶牛乳腺发育及泌乳的调控。     

G蛋白偶联雌激素受体在乳制品雌激素检测中的应用潜力

乳制品作为人们广泛消费的一种食品,其安全性备受关注。研究发现,乳制品中出现的高含量的天然雌激素和滥用或非法使用的合成雌激素可能导致人体内分泌失调,甚至诱发癌症。研究还发现,雌激素与G蛋白偶联雌激素受体（G-protein coupled estrogen receptor,GPER）互相作用来控制基于钙离子通道的快速非基因组途径,该途径有别于经典的核受体（雌激素受体（estrogen receptor,ER）α和ERβ）介导的基因组途径。本文阐述了GPER与雌激素以及乳制品中雌激素检测的关系,重点介绍了乳制品中雌激素生物学检测方法的研究进展,并对GPER在乳制品雌激素检测中的应用潜力进行了分析和展望。     

长期槲皮素膳食暴露对小鼠乳腺发育的影响

目的：槲皮素等植物雌激素早期不当摄入的负面影响已逐渐为人们所关注。本研究以围青春期雌性小鼠为模型,以成年后个体乳腺组织生殖内分泌激素受体表达水平及增殖能力为指标,考察幼年期槲皮素暴露对于乳腺发育的影响。方法：以高效液相色谱四极杆飞行时间串联质谱法检测槲皮素相关代谢产物在血浆及乳腺组织局部分布状况,以免疫组织化学方法检测乳腺上皮细胞内雌、孕激素受体以及增殖相关标志性分子增殖细胞核抗原的表达水平。结果：槲皮素相应代谢产物在乳腺内含量显著高于血浆,存在典型的组织局部富集的现象;在5 mg/（kg·d）剂量下,槲皮素可显著上调乳腺上皮细胞雌激素受体（estrogen receptor,ER）α及ERβ的表达比值,并抑制孕激素受体的表达。结论：乳腺组织对于槲皮素的暴露十分敏感,围青春期槲皮素的不当摄入极有可能通过改变相应激素受体表达谱进而提高个体成年后罹患乳腺相关疾病的风险。     

催乳素对奶牛RANKL基因启动子活性的研究

文章以奶牛乳腺上皮细胞为实验模型,探讨催乳素对RANKL基因启动子活性的调节。采用Western Blot方法检测催乳素对RANKL蛋白表达的影响,构建RANKL启动子荧光素酶载体,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测催乳素对RANKL基因启动子活性影响,采用定点合成突变的方法,构建突变型RANKL启动子荧光素酶载体,运用双荧光素酶报告基因检测系统检测催乳素对突变型RANKL启动子活性影响。结果表明,催乳素能够显著提高乳腺上皮细胞RANKL启动子活性及RANKL蛋白表达,催乳素响应元件在奶牛RANKL基因启动子-826～-814 bp区域。     

G蛋白偶联受体87对奶牛乳腺上皮细胞泌乳的影响

为研究G蛋白偶联受体87(GPR87)在氨基酸调控泌乳过程中的作用,在奶牛乳腺上皮细胞中分别添加浓度为0.6mmol/L蛋氨酸(Met)和1.2 mmol/L赖氨酸(Lys),检测细胞泌乳能力变化及细胞中GPR87的表达。结果表明,1添加Met和Lys均能使细胞泌乳能力和细胞中GPR87的表达显著增加;对GPR87进行过表达和抑制,检测细胞泌乳能力变化;GPR87过表达后,细胞泌乳能力显著增加,抑制后,细胞泌乳能力显著下降;2抑制GPR87同时添加Met或Lys,检测细胞中CSN2、m TOR、SREBP-1c、GLUT1的表达及细胞泌乳能力的变化;3与只添加氨基酸组比较,抑制GPR87同时添加氨基酸组,细胞中CSN2、m TOR、SREBP-1c、GLUT1的表达及细胞泌乳能力的增加程度显著下降。综合结果说明,GPR87能接受并传递氨基酸信号,正向调控奶牛乳腺上皮细胞的泌乳。     

奶牛乳腺中整联蛋白alpha6、beta4表达对细胞增殖的影响

用组织免疫荧光和蛋白印迹检测两种整联蛋白亚基的定位和表达水平,并观察阻断它们的功能对乳腺上皮细胞增殖的影响。结果表明,奶牛乳腺中整联蛋白α6和β4主要在青春期和妊娠期的导管和腺泡的基底侧腺上皮细胞和肌上皮细胞表达,而脂肪细胞和成纤维细胞几乎无表达,α6亚基显示出基底侧极性分布,β4亚基在整个细胞膜均匀分布。阻断整联蛋白亚基功能会显著抑制细胞增殖,表明它们对于促进青春期和妊娠期导管和腺泡发育时的细胞增殖有着重要作用。     

牛初乳对子代雌鼠子宫结构及雌激素受体表达的影响

目的 研究妊娠期和哺乳期通过SD母鼠暴露于牛初乳及断乳后继续食用牛初乳对成年子代雌鼠子宫发育及雌激素受体(ERα和ERβ3)表达的影响.方法 将母鼠随机分成2组,牛初乳组和空白对照组.牛初乳组母鼠在交配前期、妊娠期和哺乳期食用含有牛初乳的饲料,仔鼠3周断乳后食用对应于母鼠的饲料至成年.空白组母鼠和仔鼠食用普通饲料.仔鼠成年后处死,取其血液,剥离子宫和卵巢称重,检测血清激素,子宫病理学检查;利用免疫组化法检测子鼠子宫内雌激素受体(ERα和ERβ)的表达.结果 牛初乳组子代雌鼠体重、卵巢和子宫脏体比与空白组相比差异无统计学意义(P＞0.05),血清中催乳素(PRL)含量显著高于对照组,差异有统计学意义(p＜0.05),其余激素含量两组间差异无统计学意义(P＞0.05),子宫组织结构无异常表现,子宫内雌激素受体ERα表达量高于空白组,ERβ表达量与空白组相近,但与空白组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 妊娠期和哺乳期暴露于子代的牛初乳不会对子代雌鼠子宫发育和雌激素受体表达产生不利影响.     

大豆异黄酮对新生儿期大鼠子宫发育和雌激素受体表达的影响

目的研究母鼠暴露于大豆异黄酮对新生儿期大鼠子宫发育及雌激素受体表达的影响。方法将母鼠及其仔鼠随机分至6组,母鼠的大豆异黄酮暴露剂量分别为0、10、50、100、150、200mg/kgBW（i.g.）,暴露时间为产后第5至10天（PND5~10）。在PND11处死雌性仔鼠,称量子宫重量并进行病理学检查,利用ELISA方法测定血清雌二醇（E2）和孕酮（P）浓度,利用RT-PCR方法测定子宫中雌激素受体（ER）mRNA的表达。结果与对照组比较,大豆异黄酮150、200mg/kgBW剂量组仔鼠的子宫/体重比显著增加,子宫内膜增厚的差异有统计学意义（P〈0.05）;血清E2浓度明显高于对照组,SIF150组升高幅度最大,但各处理组血清P浓度呈下降趋势;100、150、200mg/kgBW剂量组仔鼠的子宫ERmRNA表达降低的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论大豆异黄酮经母鼠暴露,可刺激雌性仔鼠的子宫发育,这种雌激素样效应至少与该物质对血液性激素和子宫ERmRNA表达的调节作用有关。     

大豆异黄酮和双酚A联合暴露对雌性大鼠不同组织雌激素受体表达的影响

目的研究大豆异黄酮和双酚A哺乳期联合暴露对SD雌性大鼠的子宫增生效应及其对下丘脑-垂体-卵巢轴雌激素受体(ERα和ERβ)表达的影响。方法将母鼠及其仔鼠随机分至4组,即阴性对照组、大豆异黄酮组(每公斤体重150mg,i.g.)、双酚A组(每公斤体重150mg,i.g.)、联合暴露组(每公斤体重150mg大豆异黄酮 每公斤体重150mg双酚A,i.g.)。母鼠在产后第5至11天给予受试物,仔鼠在出生后5至11d(PND5-PND11)通过母乳暴露受试物。在PND12处死部分雌性仔鼠。剩余雌性仔鼠观察阴门开口时间和动情周期,并于PND70处死。剥离子宫并称重,病理学检查;利用Westernblot方法测定下丘脑、垂体、卵巢和子宫的ERα和ERβ表达。结果与阴性对照组比较,PND12时,大豆异黄酮组和双酚A组大鼠子宫体重比显著增加(P<0.05),联合暴露组子宫体重比亦显著增加(P<0.05),但其幅度略低于大豆异黄酮组和双酚A组。PND70时,各组大鼠的子宫体重比差异无统计学意义(P>0.05)。大豆异黄酮组、双酚A组和联合暴露组的阴门开口时间和动情周期与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在PND12和PND70时,大豆异黄酮组、双酚A组和联合暴露组大鼠下丘脑、垂体、卵巢和子宫的ERα和ERβ表达有部分增强或减弱。结论哺乳期大鼠大豆异黄酮和双酚A联合暴露时,可促进雌性仔鼠的子宫发育,但两者并未表现出协同作用;这种子宫增生效应在生命后期消失。大豆异黄酮和双酚A的子宫效应可能与对下丘脑-垂体-卵巢轴和子宫组织中ERα和ERβ表达的调节有关。     

雌激素受体可抑制暴饮暴食

正美国贝勒医学院儿童营养研究中心和得克萨斯州儿童医院的研究人员首次发现,雌激素能触发大脑5-羟色胺神经元,抑制雌性小鼠的暴饮暴食。该研究发表在《临床研究》杂志上。暴饮暴食一般是指一些人,在非常短的时间内,毫无节制,又猛又急地吞食大量食物。通常人们将暴饮暴食定义为不良生活习惯,大约有10%的美国成年人有暴饮暴食的不良习惯,其中又以女性居多。此前有数据表明,月经周期不规律的女性,易出现暴饮暴食现象,这表明,暴饮暴食与雌激素有着相当密切的关联。雌激素高时,暴饮暴食受到抑制;雌激素低时,暴饮暴食比较频繁。