螺旋藻蛋白水解产物对ACE抑制活性的研究

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶水解螺旋藻藻胆蛋白制备ACE 抑制肽,通过体外实验测定其ACE 抑制率,以ACE 抑制率为指标确定两种蛋白酶的水解条件。结果表明：胃蛋白酶水解条件为：水解温度37℃,酶与底物比1:50,pH3.0,底物质量分数5%,水解产物的ACE 抑制率为82.16%,其IC50 值为0.104mg/ml;胰蛋白酶水解条件为：水解温度42℃,酶与底物1:50,pH8.0,底物质量分数6%,水解产物的ACE 抑制率为93.54%,其IC50值为0.017mg/ml。此外,胃蛋白酶水解产物再用胰蛋白酶水解,其产物的IC50 值为0.087mg/ml。     

C.I.活性黑5低温水解性能分析

为研究并有效控制活性染料在冷轧堆染色中的水解,应用高效液相色谱（HPLC）对双乙烯砜型活性染料C.I.活性黑5在低温下的水解性能进行定性及定量分析。结果表明：在碱性缓冲液中,C.I.活性黑5的消除反应及水解反应为假一级反应,在其消除反应速率及水解反应速率均随着缓冲液pH值增加而显著提高;在30℃、pH值为9时,C.I.活性黑5的水解速率为3.5×10-5/min-1;相同温度下,在pH值10、11、12时该染料的水解反应速率常数分别是pH值为9时的3、27、233倍,因此,C.I.活性黑5在冷轧堆染色时,在 pH值为9～10的缓冲液中水解稳定性较好。     

牦牛乳酪蛋白肽分离组分对DPP-4活性的抑制作用

以牦牛乳酪蛋白为原料,研究牦牛乳酪蛋白水解产物及其分离组分对二肽基肽酶-4(DPP-4)活性的抑制作用。以木瓜蛋白酶水解牦牛乳酪蛋白,水解产物采用Sephadex G-25凝胶过滤色谱进行分离,以DPP-4抑制率为指标,分析水解产物和分离组分对DPP-4活性的抑制作用。结果表明,木瓜蛋白酶水解0.5 h获得的水解产物表现出最强的DPP-4抑制活性,抑制率可达(59.57±0.23)%,半抑制浓度(IC50)为0.67 mg/m L。经Sephadex G-25凝胶过滤分离将木瓜蛋白酶水解产物分成4个组分,其中第3个组分对DPP-4抑制作用最强,IC50值为0.583 mg/m L。研究结果表明,与牦牛乳酪蛋白相比,其水解产物的DPP-4抑制活性显著增强,经凝胶过滤色谱分离后的水解产物分离组分具有更强的DPP-4抑制活性。     

直接稀释-液相色谱法快速测定葡萄酒中的甘油和糖

采用30%的乙腈水(体积分数)为稀释液,建立了样品直接稀释、高效液相色谱(HPLC)分离、示差折光检测器(RID)快速测定葡萄酒中的甘油、果糖、葡萄糖、蔗糖的可靠方法。该方法以保留时间(Rt)定性,外标法定量;在0.05 mg/mL~5 mg/mL的浓度范围内,标准曲线有良好的线性关系,相关系数大于0.999 5;样品在0.25、2.5、25.0 g/L 3个加标水平内的回收率范围为96%~102%(n=10),相对标准偏差小于8.0%;方法的定性检出限(LOD)为0.04g/L、定量检出限(LOQ)为0.10g/L。     

TCEP在CE型染料羊毛低温染色中的应用研究

以还原剂TCEP(三羧乙基膦)作为低温染色助剂,Lanasol CE型毛用活性染料对羊毛进行低温染色。通过对CE型活性染料的上染速率、染色羊毛的色差等实验指标的分析,探讨了TCEP用量、酸剂种类和用量对CE型活性染料低温染色工艺的影响。实验结果表明:TCEP的用量越大,CE型活性染料的上染速率越快,但对于不同的染料作用效果有差异;甲酸作为酸剂的染色效果优于醋酸;甲酸用量对于低温染色效果也有影响。最佳用量为:TCEP 3.0%(owf),甲酸1.5%~2.0%(owf)。     

花生蛋白酶水解产物抗氧化活性研究

利用蛋白酶水解花生蛋白并对水解产物的抗氧化活性进行研究.采用中性蛋白酶AS1.398和低温高碱性蛋白酶水解花生蛋白,AS1.398的水解条件为:温度55℃,pH6.5,底物浓度5.0%,酶用量1.0%,水解时间6 h;碱性蛋白酶的水解条件为:温度40℃,pH7.5,底物浓度5.0%,酶用量2.0%,水解时间6 h.在此条件下进行水解、灭酶、离心除去不溶性的成分,水解产物冷冻干燥.酶水解产物的抗氧化活性用油脂的过氧化值进行评价.产物添加到猪油中,65℃恒温保存30 d,每隔一定时间取样测定其过氧化值.Rancimat也用于评价花生蛋白酶水解产物的抗氧化活性,添加不同的酶水解产物后测定样品的氧化诱导期,用诱导期作为花生蛋白酶水解产物的抗氧化活性的评价指标.研究结果表明,花生蛋白酶水解产物具有一定的抗氧化性能.     

MEKC在线推扫富集法检测蔬菜中残留甲基对硫磷

建立胶束电动色谱在线推扫富集法检测蔬菜中残留的痕量甲基对硫磷。讨论了十二烷基硫酸钠(SDS)浓度、NaH2PO4浓度、缓冲液pH、有机溶剂添加量、样品中电解质浓度、运行电压、进样压力对富集效果的影响;考察了活性炭净化对回收率的影响。结果:选择20 mmol/L磷酸二氢钠+180 mmol/LSDS(pH=6.2),甲醇10%(体积分数)为缓冲液,电压7 kV,进样压力2 062.5KPa×s。1.8 g活性炭的加入对回收率没有明显的影响。甲基对硫磷在0.03 mg/L~2.5 mg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 6,检测限为0.011 5 mg/L。加标水平在0.4 mg/kg~0.6 mg/kg范围内,回收率为90.44%~90.63%,RSD为1.12%~1.16%。胶束电动色谱在线推扫富集法可用于蔬菜中残留痕量农药的检测。     

鱼鳞明胶酶解制备超氧阴离子清除活性肽的研究

研究了Alcalase2.4L水解鱼鳞明胶的工艺条件及产物的超氧阴离子清除活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,通过响应面实验优化得到最佳酶解条件为温度54.5℃,pH7.7,底物浓度1.8%(W/V),加酶量1%(W/W),在此条件下水解2h的水解度为13.02%。对酶解产物进行体外超氧阴离子清除活性分析,结果表明,不同水解度的酶解产物表现出不同的抗氧化活性。在优化条件下水解4h,水解产物的超氧阴离子清除活性最高,IC50为0.36mg/mL,此时水解度为14.11%。     

乙烯砜型活性染料在阴离子表面活性剂体系中的水解动力学

为研究活性染料在阴离子表面活性剂体系中的水解行为,本文采用高效液相色谱（HPLC）对乙烯砜型染料活性艳蓝KN-R在不同浓度的阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠（LAS）中的水解行为进行了定性及定量分析。结果表明：pH=10的条件下,KN-R在水及表面活性剂体系中的水解反应均为准一级反应,其水解速率常数受表面活性剂浓度和温度的影响较大;当LAS浓度为0.1 g/L时（< CMC）,其水解速率常数为1.37×10-2 min-1,是水中的3倍左右,对KN-R的水解起到促进作用;而当LAS浓度为1 g/L时（< CMC）时,其水解速率常数略小于水体系,对KN-R的水解起到抑制作用。同时温度升高将显著促进KN-R的水解。     

鲢肉酶解工艺及其产物对大鼠ACE抑制活性的研究

研究了四种蛋白酶水解白鲢鱼肉的工艺条件,并采用离体培养的方法研究其水解产物对大鼠血管紧张素转化酶(AntiotensinI-ConcertingEnzyme,ACE)的抑制活性。研究结果表明1398中性蛋白酶、复合风味酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶的最适水解温度分别为40、55、55和50℃,最适起始pH分别为7.5、7.0、7.5和6.5。复合风味酶的水解产物具有较高的ACE抑制活性,其12h的水解产物水解度为28.05%,ACE活性抑制率为64.75%。在优化酶解条件下,采用复合风味酶水解白鲢不同部位的蛋白质,蛋白质提取率可达90%,水解度22%～40%,在酶解液浓度相同时(1mg/ml),白肉酶解产物对ACE的抑制率最高。     

乙醇-水体系中酪蛋白水解物的类蛋白反应及ACE抑制活性的变化

采用Neutrase 0.8L蛋白酶水解酪蛋白,制备水解度为13.6%的酪蛋白水解产物,测得其对血管紧张素转化酶(ACE)的体外抑制活性IC50为(46.92±0.27)mg/L。在乙醇溶剂中,利用Neutrase 0.8L蛋白酶对水解物进行类蛋白反应修饰,并研究酶添加量、底物质量分数、反应温度、反应时间和乙醇浓度对修饰反应的影响。在优化条件下的类蛋白反应体系中,游离氨基浓度减少,说明合成反应占优势;酶添加量、底物质量分数、乙醇质量分数对修饰反应的影响显著,而反应时间和温度影响不大。通过单因素实验确定类蛋白反应的最适反应条件为:44%乙醇水溶液、反应温度为40℃,酶添加量为3 kU/g蛋白质、底物质量分数40%、反应时间6.0 h。此条件下,反应体系中游离氨基浓度变化达到202.19μmol/g蛋白质,修饰产物的IC50值降低至(25.96±0.29)mg/L,降低44.7%。     

仿刺参精酶解工艺条件优化及体外抗氧化

本研究以仿刺参精(Apostichopus japonicus spermary,ASJS)为材料,以水解度为指标优化了酶解工艺条件,并考察了酶解产物的体外抗氧化效果。实验选用木瓜蛋白酶(PAP)、复合蛋白酶(PRO)和风味蛋白酶(FLA)作为实验用酶,以双缩脲法结合三氯乙酸法测定水解度,通过单因素与正交实验,优化了单酶酶解工艺条件,并与双酶及三酶复配水解进行了比较实验,最后对不同的水解产物进行了体外抗氧化活性测定。结果表明:单酶最佳酶解工艺条件为PAP:酶添加量3.0%、温度70℃及反应时间4 h;PRO:酶添加量3.0%、温度45℃及反应时间4 h;FLA为:酶添加量2.0%、温度45℃及反应时间4 h。在最佳酶解工艺条件下PAP水解度为32.14%,PRO为31.09%,FLA为11.89%。双酶及三酶的复配水解工艺检测到的水解度均低于单PAP及单PRO。不同水解产物清除羟自由基和超氧阴离子自由基能力结果为,在样品浓度为5 mg/m L和10 mg/m L时,ASJS的PAP酶解产物好于PRO、FLA、双酶、三酶复配,同时也好于仿刺参卵及体壁PAP酶解产物。综上可知,ASJS的PAP水解产物显示出较好的体外抗氧化活性,可以进一步开发利用。     

基于响应面法优化脂肪酶水解涤纶织物工艺

酶处理改善涤纶织物的亲水性是目前涤纶改性中一种绿色环保的方法。本文通过改变猪胰脂肪酶(PPL)水解涤纶织物的反应条件(反应温度、反应pH、酶用量、反应时间),以及添加表面活性剂来增强PPL水解涤纶织物的效果。实验以水解产物释放量为评价指标,通过在单因素实验的基础上进行Box-Behnken优化实验。结果表明：PPL水解涤纶织物工艺中因素的影响作用大小顺序为反应时间(24 h)>表面活性剂(吐温80,2 g/L)>反应温度(60℃)>酶用量(80 U/mL)>pH(7)。经模型优化的最佳水解工艺条件为：反应温度59℃,pH 6.6,酶用量67 U/mL,反应时间31.2 h,表面活性剂质量浓度2.1 g/L,理论水解产物531.862 mg/L。最优条件下实验值与预测值的相对误差为5.3%。在此条件下,处理后织物表面的接触角下降了19.8%,力学性能良好。     

双酶法制备小麦微孔淀粉的动力学

为明确α-淀粉酶和糖化酶协同水解小麦淀粉制备微孔淀粉的动力学特征,以小麦A淀粉为材料,系统地分析pH值、反应温度、α-淀粉酶及糖化酶用量对水解速率的影响,并确定α-淀粉酶、糖化酶单一酶的米氏常数以及双酶协同效应。结果表明:在单一水解体系中,α-淀粉酶和糖化酶对小麦A淀粉的降解均遵循Michaelis-Menten方程,α-淀粉酶的米氏常数Km为9.548mg/mL,最大反应初速率(Vmax)为0.659mg/(mL.min),糖化酶以淀粉为底物的米氏常数(Km)为12.676mg/mL,最大反应初速率(Vmax)为0.555mg/(mL.min)。水解产物葡萄糖对反应体系具有竞争性抑制剂的作用,其抑制常数(Ki)为4.288mg/mL。在小麦A淀粉质量浓度为5mg/mL、α-淀粉酶10U/mL、糖化酶20U/mL、反应温度55℃、pH4.5、水解时间为25min的条件下,可达到淀粉的水解极限即还原糖生成质量浓度为2.54mg/mL。α-淀粉酶和糖化酶可协同水解小麦A淀粉制备微孔淀粉,双酶协同作用的水解效率明显高于单酶的水解效率。     

Alcalase蛋白酶水解法制备山核桃肽的研究

以脱脂山核桃渣为原料,利用Alcalase 蛋白酶对山核桃蛋白进行水解制备山核桃活性肽,以水解度(DH)表征其反应程度,确定其最佳水解条件为：温度55℃,pH9.0,底物浓度8%,酶质量分数6%,水解时间2.0h。在此条件下水解度(DH)为76.16%。     

消化道酶连续水解制备苦荞球蛋白多肽及其抗氧化活性研究

采用胃蛋白酶、胰蛋白酶对苦荞球蛋白进行连续水解,以水解度(DH%)为指标,采用单因素分析底物浓度、酶底比、pH值、水解时间对苦荞球蛋白的酶解效果,并通过正交实验对胃-胰蛋白酶连续作用的酶解工艺进行优化;检测酶解产物的体外抗氧化活性。结果表明:苦荞球蛋白经胃蛋白酶酶解的最佳条件为:底物浓度30 g/L、酶底比为10%、pH值为2.0、反应时间为2.0 h;胰蛋白酶酶解的最佳条件为:底物浓度30 g/L、酶底比为5%、pH值为8、反应时间为2.5 h;胃-胰蛋白酶连续酶解最佳条件:经胃蛋白酶先水解1 h后再继续用胰蛋白酶水解1.5h,水解度为25.18%。和苦荞球蛋白相比,苦荞球蛋白酶解物的抗超氧阴离子能力及羟自由基清除能力均增强(p0.05)。     

UPLC-MS/MS法测定凉茶饮料中的有机酸和黄酮类化合物

建立一种超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法同时测定凉茶饮料中5种有机酸和黄酮类化合物的方法。样品经高速离心,甲醇稀释后,经BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,乙腈-0.1%甲酸水(体积分数)梯度洗脱,串联质谱电喷雾负离子扫描,多反应监测(MRM)模式检测。5种目标物的方法检出限在0.2 mg/L~0.5 mg/L,在0.02 mg/L~0.5 mg/L浓度范围内,线性相关系数均大于0.999 0。添加水平为1.0 mg/L~40 mg/L时,平均回收率为86.3%~102%;相对标准偏差(RSD,n=6)为2.4%~8.7%。     

玉米ACE抑制肽的制备工艺及中试生产

以玉米黄粉为原料,利用Alcalase酶、Protamex酶和Flavourzyme酶酶解制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,研究酶解条件、酶解方式对玉米肽ACE抑制活性的影响。同时,在试验的基础上,对100 kg玉米黄粉酶解制备ACE抑制肽进行了中试生产。实验结果表明:单酶水解制备ACE抑制肽的最适酶为Protamex酶,在酶解150 min时水解产物的ACE抑制率为(90.98±0.54)%,水解产物的分子质量集中在10 405.22~300 Da。Flavourzyme酶和Protamex酶的分步水解可进一步提高玉米蛋白的酶解效率和玉米肽对ACE的抑制活性,在先用Flavourzyme酶水解2 h再加入Protamex酶继续水解3 h后,水解产物的ACE抑制率达到(99.35±3.55)%(IC50=0.764 mg/m L),水解产物的分子质量集中在8 439.49~185.2 Da。采用双酶分步水解方式水解100 kg玉米黄粉时,肽粉得率为27%,ACE抑制率为(56.70±0.86)%(1 mg/m L)。     

营养鲜味剂的研制

通过酶法水解将小梅鱼制备成营养型高档调味剂 .用酶对小梅鱼进行水解 ,结果表明温度、pH、酶的种类、酶的组合、酶添加的顺序对产物的分布有影响 .在初始pH值为 8,温度为 5 0℃时 ,胰酶水解产物中小分子产物含量较高 .胰酶的水解产物用微生物风味复合酶进一步酶解 ,可脱除苦味 .对产物进行氨基酸分布检测 ,结果显示 ,产物中含 18种氨基酸 ,总氮质量分数为 12 6 .4mg/ g(以N计 ) ,α 氨基氮质量分数为 6 0 .8mg/ g .     

原子吸收分光光度法测定接装纸中的砷、铅

建立了用氢化物发生器-、石墨炉-原子吸收分光光度法测定接装纸中砷、铅含量的方法。结果表明:①铅测定最佳条件为样品中硝酸浓度1.0%(体积分数),添加基体改进剂;②砷测定最佳条件为样品中硝酸浓度0.05mol/L,硼氢化钠浓度2.0%(质量分数),载液中盐酸浓度5.0%(体积分数);③砷、铅的相对标准偏差≤6.65%,回收率在96.0%~103.0%之间。